유도 및 항원에 특정한 T 세포의 확장을위한 새로운 DC 독립적인 방법을 설명합니다. HLA A2 – IG 기반의 인공 항원 제시 세포 (aAPC)을 효율적으로 다양한 항원 특이성의 CTL 확장 HLA – A2 제한 펩티드와 함께로드됩니다. 이 기술은 CTL 기반 입양 immunotherapy에 대한 잠재력을 보유하고 있습니다.
최적의 효과기 기능 CTL은 다양한 세포 내 감염 및 암에 대한 보호를 중재에 중요한 역할을 재생합니다. 그러나, 개인은 진압 면역 microenvironment을 전시 수 있으며, 활성화 CTL과는 달리 그들의 autologous 항원 제시 세포 tolerize하는 경향이 있거나 특정 항원 CTL을 anergize. 그 결과, 아직 실험 단계에 있지만, CTL 기반 입양 immunotherapy는 암 및 바이러스 감염 등 다양한 질환에 대한 유망한 치료되기 발전했습니다. 초기 실험에서 전 생체내 확대 CMV (사이토 메갈로 바이러스) 특정 CTL은 immunocompromised allogeneic 골수 이식 환자에서 CMV 감염의 치료에 사용되었습니다. 그것이 환자의 생명을 위협하는 CMV viremia의를하는 것이 일반적입니다받을 환자의 없음 CTL은 안티 CMV 내성이 adoptively 전송 CTL 1 설립 뜻, CMV와 관련된 질병을 개발 확대했습니다. 있지만 유망 결과는 흑색증에 대한 관찰되었으며 암이 다른 종류의 연장 수 있습니다.
인간의 CTL을 자극하고 확장 예 생체내 여러 가지가 있지만, 현재 방법은 비용과 기술적 한계에 의해 제한됩니다. 예를 들어, 현재의 금 본위 제도는 autologous DC의 사용에 따라 달라집니다. 이것은 각각의 환자가 leukocytes의 상당수를 기부 필요하며 비용도 아주 많이하고 힘드는입니다. 또한, DC 확장 CTL의 체외 특성화에 설명된이 단지 suboptimal 효과기 기능 3했다고 밝혔다.
우리가 입양 immunotherapy (그림 1) 인간 CMV CTL의 구체적인 예 생체내 확장을위한 고효율 aAPC 기반 시스템을 제시한다. aAPC 인간의 HLA – A2 – IG 이합체 및 안티 CD28mAb 4 셀 크기의 자석 구슬을 결합하여 만들어졌다. aAPC가 만들어진 후에는, 그들은 관심의 다양한 펩티드와 함께로드하고, 몇 달 동안 기능 유지하실 수 있습니다. 이 보고서에서는 aAPC는 CMV, pp65 (NLVPMVATV)에서 지배적인 펩타이드와 함께로드되었습니다. 일주일 동안 aAPC있는 건강한 기증자로부터 인간의 CD8 + CTL 투석을 culturing 후 CMV CTL은 특정 98% (그림 2) 특이성에 극적으로 증가하고 10,000 명이 넘는 배 증폭하실 수 있습니다. 더 CMV 특정 CTL이 필요한 경우, 추가 확장이 쉽게 aAPC과 반복적인 자극에 의해 얻을 수 있습니다. Phenotypic 및 기능 특성이 확장 세포 효과기 메모리 표현형을 가지고 있고 (그림 3) TNFα와 IFNγ 모두 상당한 금액을 보여줍니다.
우리가 여기서 설명 aAPC 시스템은 항원의 다양한 인간에 대한 CTL의 전직 생체내 확장을위한 효율적인 시스템입니다. 특별한주의가 96 – 웰 플레이트 문화 단백질 결합의 품질과 aAPC과 CTL의 균등과 관련하여 이동해야합니다. 우리는 백만 배 4 항원 특정 CTL을 확장하는 동안, 이상 8 주 CTL을 확대할 수있다이 방법을 사용합니다. 셀 라인 또는 기타 acellular 플랫폼 5 활용한 다양한 인공 APC 시스템이되었습니다 있지만, 모든 시스템 확장 및 특이성에 대해서는 서로 다른 애플 리케이션을 지원과 함께 독특한 프로필을 가진 게시된 데이터에 따르면. CTL의 품질 수량만큼이나 중요되기 때문에 중요한 것은, 우리의 시스템에서 발생하는 CMV 특정 CTL의 polyfunctionality이 우수한 안티 바이러스 효율성을 부여 것으로 예상된다.
The authors have nothing to disclose.
우리는 도움이 토론을 위해 아론 Selya 감사하고 싶습니다. 이 작품은 JS, MO 수있는 존스 홉킨스 말라리아 연구소에서 시험 부여 및 국방 부여 PC 040,972학과에 NIH 부여 AI29575, CA108835, AI077097 지원했습니다
Reagent | Company | Catalogue number |
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Vacutainer tube (contains heparin) | Becton Dickinson | 367874 |
Human CD8+ T cell isolation kit | Miltenyi | 130-094-156 |
Dynabeads M-450 Epoxy | Invitrogen | 140.11 |
Dynal MPC-1 Magnet | Invitrogen | 120-01D |
Ficoll-Paque Plus | GE healthcare | 17-1440-03 |
RPMI medium 1640 | Gibco | 11875 |
HLA-A2-Ig dimer X | Becton Dickinson | 551263 |
iTAgMHC tetramer (HLA-A2-CMV)-PE | Beckman Coulter | T20099 |
Falcon clear 96-well Microtest plate | Becton Dickinson | 353077 |
Rat anti-mouse IgG2a-FITC | Becton Dickinson | 553390 |
Goat anti-mouse IgG1-PE | Invitrogen | P21129 |
Human serum type AB | Atlanta biologicals | S40110 |
Mouse anti-human CD8a-FITC | Sigma-Aldrich | F0772 |
Mouse anti-human CD8a-APC | Becton Dickinson | 340684 |
Mouse anti-human IFNγ-FITC | Becton Dickinson | 340449 |
Mouse anti-human TNFα-PE | Becton Dickinson | 340512 |