הניסוי שלנו יציגו כיצד לבצע ניתוח רצף של מינים translocating חיידקי בדם ההיקפי של חולי איידס.
Abstract
מערכת העיכול בריאה מבחינה פיזיולוגית יישבו על ידי מגוון רחב של חיידקים commensal המשפיעים על התפתחות של 1,2 מערכת הריריות הלחות ואת החיסונית התאית.
החיידקים הוא מוגן מפני מערכת החיסון דרך מחסום הרירית חזק. זיהומים ואנטיביוטיקה ידועים לשנות גם את המכשול נורמלי מערכת העיכול ואת הרכב של חיידקים תושב, אשר עלול לגרום הפרעות החיסון ניתן 3.
HIV גורם פרצה מחסום העיכול עם כישלון מתמשך של חסינות זליגת הרירית תוך מחזור מערכתי של bioproducts חיידקי, כגון lipopolysaccharide ושברי DNA בקטריאלי, אשר תורמת להפעלת מערכת החיסון מערכתית 4-7. טרנסלוקציה מיקרוביאלית הוא מעורב immunopathogenesis HIV / איידס ועל התגובה לטיפול 4,8.
אנו שמטרתו לאפיין את ההרכב של חיידקים translocating בדם ההיקפי של HIV-נגועים. כדי לרדוף אחרי המטרה שלנו הקמנו תגובת PCR עבור הגן 16S panbacteric ribosomial ואחריו ניתוח רצף.
בקצרה, כל דם משני הנושאים HIV נגועים ובריאים משמש. בהתחשב בעובדה אנשים בריאים הנוכחית הומאוסטזיס מעיים רגילה ללא טרנסלוקציה של מיקרופלורת צפוי בחולים אלו. לאחר איסוף הדם כולו על ידי venipuncture והפרדה פלזמה, הדנ"א מופק פלזמה המשמש לביצוע מגוון רחב PCR תגובה עבור 16S panbacteric ribosomial גן 9. ניתוחים לאחר טיהור PCR המוצר, שיבוט רצף מבוצעות.
Protocol
טיפול של דגימות דם נגוע ב-HIV דורש כמה המלצות חשובות. דגימות דם של כל חייב להיות מועבר דליפה הוכחה מכולות חזקים. יש להקפיד בעת לקיחת הדגימה, כדי למנוע זיהום חיצוני של מכולה של כל הניירת המלווה את הדגימה. כל האנשים עיבוד דם נגוע חייב ללבוש כפפות. כפפות יש לשנות לרח?…
Discussion
<p class="jove_content"> הננו להראות פרוטוקול ה-PCR / ריצוף לאפיין את טרנסלוקציה של חיידקים דם היקפיים של HIV-נגוע יחידים.</p><p class="jove_content"> תוצאות אמינות ביותר מתקבלים בעת שימוש פלזמה שנאספו EDTA המכילים צינורות. לאחר דגימה דם, פלזמה צריכים להיות מופרדים על ידי צנטריפוגה בתוך 2 / 3 שעות, כדי למנוע שבר השפלה haemolysis ו-DNA. ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
אנו אסירי תודה ג'יאני Scimone לסיוע מעולה עם ביצוע וידאו.
Merlini, E., Bellistri, G. M., Tincati, C., d’Arminio Monforte, A., Marchetti, G. Sequencing of Bacterial Microflora in Peripheral Blood: our Experience with HIV-infected Patients. J. Vis. Exp. (52), e2830, doi:10.3791/2830 (2011).