心脏功能免疫细胞的分离

Summary

这种隔离的心脏功能的免疫细胞的方法提供了一种替代传统的方法胶原酶消化，从而导致不​​必要的免疫细胞活化，从而导致了这些细胞的减少响应。我们隔离的方法，产生心脏功能的免疫细胞，避免与酶消化相关的问题。

Abstract

心脏免疫细胞获得利益的角色，他们在许多心脏疾病的病理^重塑发挥1-5这些免疫细胞，其中包括肥大细胞，T细胞和巨噬细胞;存储和释放的多种生物活性介质，包括细胞因子和蛋白酶（如胰蛋白酶^）。6-8这些调解员已被证明是通过激活基质金属蛋白酶或胶原蛋白的积累引起心脏成纤维细胞的功能，通过调节细胞外基质代谢^的关键球员。9-11然而，隔离心脏免疫细胞技术一直是个问题，因为他们使用细菌胶原酶消化心肌组织。这种技术的原因，从而激活免疫细胞功能的损失。例如，心脏肥大细胞变得大大减少响应的化合物，导致脱粒， ^因此 ，我们开发出一种技术，允许对T他隔离心脏功能的免疫细胞，这将导致更好地了解了这些细胞在心脏疾病中^的作用。 13，14

此方法需要一个熟悉大鼠剑突，腋下和镰状韧带的解剖位置，对心脏和心包。这些标志性建筑是重要的，以提高手术成功和心脏的免疫细胞，以确保较高的产量。这些孤立的心脏，免疫细胞可以用于表征功能，表型，成熟，并与其他心肌细胞共培养实验，以获得一个更好地了解它们之间的相互作用。

Protocol

1。汉克斯“平衡盐溶液的制备（HBSS） 1000毫升高压灭菌器1升玻璃烧杯，量筒，搅拌棒。 重组蒸压1 L玻璃烧杯用双蒸水900毫升标记的HBSS粉末的解决方案。 HEPES钠+盐3.4克的HBSS混合溶液和pH值调整到7.35-7.41之间的价值，无论是使用浓盐酸或氢氧化钠。 一旦所需的pH值已达到并保持稳定，加5克牛血清白蛋白在室温下的解决方案，直到完全溶解白蛋白。 添加的抗生?…

Discussion

这种隔离心脏免疫细胞的方法，使无不需要激活，通常发生在传统的酶消化法分离技术，分析其功能，表型，成熟。这种技术获得的平均细胞总数约400000元大鼠心脏，差这些细胞的染色和流式细胞仪分析表明（〜70％），巨噬细胞（〜12％）和肥大细胞，T淋巴细胞混合的人口使用了这种技术^{。（〜12％）。13，14}因此，心脏的免疫细胞群的进一步分离纯化方法是必要的。隔离的免疫细胞，可…

Materials

Name of Reagent and Equipment	Company	Catalogue Number	Comments
Hanks’ Balanced Salt	Sigma	H4891	One bottle makes 1 L of Hanks’ Balance Salt Solution. Reconstitute Hanks’ Balance Salt Solution as a part of the procedure.
Antibiotic- Antimyotic	Gibco	15240-062
HEPES	Sigma	H3784
Bovine Serum Albumin	Sigma	A3912
250 mL Nalogene Filter Bottle	Thermoscientific	157-0020
12 N HCL	Fisher Scientific	CAS 7647-01-0	For 6 N, add equal volumes of HCL to deionized water.
10 N NaOH	Fisher Scientific	SC267	For 5 N, add equal volumes of NaOH to deionized water.
Double Distilled Water

Table of Specific Equipment:

Name of Reagent and Equipment	Company	Catalogue Number	Comments
3-O Suture Silk Braided	Ethicon Products	SA64H
Small Animal Ventilator	CWE Incorporated	SAR-830	Set breathing rate to 40.5 breaths per min.
Bevel 18 gauge needle	BD Biosciences	305199	Trim needle by 1/2 to 3/4 of its original length for use as a tracheal tube.
Teflon Tip (with needle removed) of 24-gauge Baxter quick-cath catheter	Baxter	2N111	Reduce the Teflon Tip length by 1/2 to 3/4.
10 cc syringe	Fisher Scientific	14-823-16B
15 mL Falcon Tubes	BD Biosciences	352097
Sorvall RT6000B Refrigerated Centrifuge	Fisher Scientific	75-004-377	Remember to pre-cool and keep at 4°C.
Hyclone	Thermoscientific	S300030.02
Hemocytometer	Hausser Scientific	HS-LB-1483