العصبية زرع السلائف هي استراتيجية واعدة لحماية و / أو استبدال / عنق الرحم المختلة وظيفيا فقدت الخلايا العصبية الحركية في الحجابي إصابة الحبل الشوكي (النخاع الشوكي) ، واضطراب في الخلايا العصبية الحركية ، التصلب الضموري الخطوط الفرعية (ALS). ونحن نقدم على بروتوكول لتسليم خلية لعنق الرحم القرن بطني الحبل الشوكي في القوارض نماذج من المرض واصابات النخاع الشوكي.
حل وسط في التنفس بسبب فقدان الخلايا العصبية الحركية الحجابي هو نتيجة المنهكة لنسبة كبيرة من البشر صدمة إصابة الحبل الشوكي (SCI) (1) والحالات هو السبب الأساسي للوفاة في المرضى الذين يعانون من اضطراب الخلايا العصبية الحركية ، التصلب الضموري الخطوط الفرعية (ALS) 2.
ALS هو اضطراب عصبي المدمرة التي تتميز تنكس السريع نسبيا من الخلايا العصبية العليا والسفلى المحركات. المرضى الخضوع في النهاية إلى المرض في المتوسط 2-5 سنوات بعد تشخيص بسبب شلل الجهاز التنفسي بسبب فقدان الخلايا العصبية innnervation الحجابي المحرك للحجاب 3. الغالبية العظمى من الحالات المتفرقة ، في حين أن 10 ٪ منهم من النموذج العائلي. ويرتبط ما يقرب من عشرين في المئة من الحالات العائلية إلى حدوث طفرات نقطة مختلفة في الجينات النحاس / الزنك الفائق ديسموتاز 1 (SOD1) على الصبغي 21 4. وقد ولدت الفئران المعدلة وراثيا والفئران 6 4،5 تحمل جينات طافرة SOD1 الإنسان (G93A ، G37R ، G86R ، G85R) ، وبالرغم من وجود نماذج حيوانية أخرى من فقدان الخلايا العصبية الحركية ، في الوقت الحاضر أكثر النماذج المستخدمة للغاية من هذا المرض .
اصابات الحبل الشوكي (SCI) هي مجموعة غير متجانسة من الظروف الناتجة عن الإصابات البدنية إلى الحبل الشوكي ، مع نتائج وظيفية مختلفة وفقا لنوعها وموقعها وشدة إصابة 7. ومع ذلك ، ما يقرب من نصف حالات اصابات النخاع الشوكي الإنسان تؤثر على مناطق عنق الرحم ، مما أدى إلى ضعف الجهاز التنفسي المنهكة بسبب فقدان الخلايا العصبية الحركية الحجابي وإصابة الجهاز التنفسي البصلي تنازلي المحاوير 1. وقد تم تطوير عدد من النماذج الحيوانية لاصابات النخاع الشوكي ، والأكثر شيوعا وسريريا ذات الصلة ، كونها كدمة 8.
زرع فئات مختلفة من الخلايا العصبية السلائف (الشخصيات) هي استراتيجية واعدة العلاجية لعلاج إصابات الجهاز العصبي المركزي وتنكس عصبي الصدمة ، بما في ذلك المرض واصابات النخاع الشوكي ، وذلك بسبب القدرة العصبية لتحل محل فقدان أو اختلال الجهاز العصبي المركزي توفير أنواع الخلايا ، وتوفير عوامل الجينات الفائدة 9.
يمكن أن النماذج الحيوانية على حد سواء والمرض اصابات النخاع الشوكي النموذج العديد من الجوانب ذات الصلة سريريا من هذه الأمراض ، بما في ذلك فقدان الخلايا العصبية الحركية الحجابي ويترتب على ذلك من تنازلات التنفسي 10،11. من أجل تقييم فعالية للمجلس الوطنى القائم على استراتيجيات على وظيفة الجهاز التنفسي في هذه النماذج الحيوانية من المرض واصابات النخاع الشوكي ، لا بد من تدخلات الخلوية موجهة خصيصا لأهداف علاجية المناطق التي تحتوي على ذات الصلة ، مثل الخلايا العصبية الحركية الحجابية. ونحن نقدم بروتوكول مفصلة لزرع متعددة داخل النخاع قطعي من الشخصيات في عنق الرحم المسألة بطني الحبل الشوكي الرمادي نماذج الاعصاب مثل الفئران والجرذان G93A SOD1 ، فضلا عن الجرذان الحبل الشوكي المصاب والفئران 11.
لدراسات شملت SOD1 الفئران والجرذان G93A والعمر والجنس المباراة الحيوانات ضمن مجموعة ، وتوزيع الحيوانات داخل القمامة نفسه إلى مجموعات مختلفة. فمن الأفضل استخدام جميع الحيوانات من جنس واحد لكل من المرض ونماذج اصابات النخاع الشوكي بسبب العمليات المرض قد تختلف بين ا?…
The authors have nothing to disclose.
وأود أن أشكر : جميع أعضاء لوبور ، Maragakis Rothstein ومختبرات للمناقشة مفيدة ، وقدامى المحاربين مشلولة الأمريكية وكريج نيلسون H. مؤسسة للتمويل.
Name of reagent | Company | Catalog number |
HBSS | Gibco | 14170 |
0.05% Trypsin | Gibco | 25300 |
Soybean Trypsin Inhibitor (optional) | Sigma | T-6522 |
Acepromazine maleate (0.7 mg/kg) | Fermenta Animal Health | |
Ketamine (95 mg/kg) | Fort Dodge Animal Health | |
Xylazine (10 mg/kg) | Bayer | |
#11 Feather surgical blade | Electron Microscopy Sciences | 72044-11 |
Cotton-tipped applicators (6 inch) | Fisher | 23-400-101 |
Rat-toothed forceps | Fine Science Tools | Rat: 11023-15; Mouse: 11042-08 |
Medium-sized spring scissors | Fine Science Tools | 15012-12 |
Mini spring scissors | Fine Science Tools | 15000-10 |
Rongeur | Fine Science Tools | Rat: 16121-14; Mouse: 16221-14 |
Microknife | Fine Science Tools | 10056-12 |
Needle holders | Fine Science Tools | 12502-14 |
Suture: 4-0 | Vicryl | S-183 |
Staples: 9 mm | Autoclip | 427631 |
Stapler: 9 mm (Reflex #203-1000) | World Precision Instruments | 5000344 |
Warm water pump (T/Pump) | Gaymar | P/N 07999-000 |
Cyclosporin A: 250.0 mg/5.0 mL ampules | Novartis/Sandimmune | NDC 0078-0109-01 |
FK-506 | LC Laboratories | F-4900 |
Rapamycin | LC Laboratories | R-5000 |
Injector | World Precision Instruments | UMP2 |
Micro 4 Microsyringe Pump Controller | World Precision Instruments | UMC4 |
Micromanipulator | World Precision Instruments | Kite-R |
10.0 μL Hamilton syringe | Hamilton | 80030 |
Hamilton needles: 33-gauge, 45° bevel, 1 inch | Hamilton | 7803-05 |
Glass 20.0 μL microcapillary pipettes (optional) | Kimble | 71900-20 |