Placer du facteur de croissance des billes recouvertes sur les premiers embryons de poulet scène
Summary
Une variété de facteurs de croissance et les protéines interagissent pour induire les cellules à prendre sur le destin des cellules différentes lors du développement. Ici nous démontrons l'utilisation d'un en préparation pour répondre ovo interactions possibles entre les différentes protéines dans le développement en plaçant des perles sur E2.5 embryons de poulet.
Abstract
Le tube neural exprime de nombreuses protéines spécifiques dans les schémas spatio-temporelle pendant le développement. Ces protéines ont été montré pour être critique pour la détermination du destin cellulaire, migration cellulaire, et la formation des circuits neuronaux. L'induction neuronale et la structuration impliquent des protéines morphogénétiques osseuses (BMP), Sonic hedgehog (SHH), facteur de croissance des fibroblastes (FGF), entre autres. En particulier, le profil d'expression de Fgf8 est à proximité de régions BMP4 et SHH exprimer. Ce schéma d'expression est compatible avec les interactions de développement qui facilitent la structuration dans le télencéphale.
Ici, nous offrir une démonstration visuelle d'une méthode dans laquelle une préparation ovo peut être utilisé pour tester les effets des FGF dans la formation du cerveau antérieur. Perles sont revêtues de protéines et placé dans le tube neural de développement à fournir une exposition prolongée. Parce que la procédure utilise de petites perles soigneusement placé, il est peu invasive et permet plusieurs perles pour être placé dans un seul tube neural. Par ailleurs, la méthode permet le développement continu de sorte que les embryons peuvent être analysées à un stade plus mature pour détecter des changements dans l'anatomie et à la structuration neuronale. Ce protocole simple mais utile pour l'imagerie permet en temps réel. Il fournit un moyen de faire spatialement et temporellement des changements limités à des niveaux de protéine endogène.
Protocol
Discussion
Selon les protéines que vous souhaitez utiliser, il existe des protocoles différents sur la façon de préparer les perles. Dans ces expériences, nous utilisons l'héparine acryliques perles, mais Affi-Gel perles peuvent également être utilisés. Nous avons trouvé que les billes d'héparine-acryliques sont plus faciles à manipuler dans l'environnement aqueux de l'albumine d'oeuf. Les perles sont trempés dans 5 l de protéines nuit à 4 ° C. Perles de contrôle sont placés dans du PBS stérile jusqu'au momen…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Eggs | Animal | Fertilized, E2-2.5 (~ St. 17 HH) | ||
| Incubator | Profi-I | Lyon | ||
| India Ink | Tool | Higgins | Prepare a 4% solution in sterile PBS. | |
| Sterile PBS | Alternatively, an antibody cocktail can be used | |||
| 1ml syringe | ||||
| 27G 1/2 needles | Tool | BD | 305109 | Angled at 90 degrees |
| Forceps | Tool | World Precision Instruments | size 55 | |
| Hemostats | ||||
| Dissection scissors | Tool | World Precision Instruments | 500086 | vannas, 8.5cm |
| Parafilm tape | to seal eggs | |||
| Tungsten Probe | Tool | Electron Microscopy Sciences | 62091 | Tool #24. Handle optional. |
References
- Korn, M. J., Cramer, K. S. Windowing Chicken Eggs for Developmental Studies. Jounal of Visualized Experiments. 8, (2007).
- Crossley, P. H., Martinez, S., Ohkubo, Y., Rubenstein, J. L. Coordinate expression of Fgf8, Otx2, Bmp4, and Shh in the rostral prosencephalon during development of the telencephalic and optic vesicles. Neuroscience. 108, 183-206 (2001).
- Alexandre, P., Bachy, I., Marcou, M., Wassef, M. Positive and negative regulations by FGF8 contribute to midbrain roof plate developmental plasticity. Development . 133, 2905-2913 (2006).
