Summary
يوصف بروتوكول لإقناء ؛ إدخال القنية من الغدة اللعابية تحت الفك السفلي الماوس عبر قناة وارتون. عن هذه التجربة ، يتم استخدام محلول أزرق التريبان بوصفها صباغ لشرح كيفية توفر هذه التقنية بشكل فعال في ضخ الغدة المستهدفة ، وتشير إلى إمكانية التعويل على هذا النهج الجديد كعلاج المخدرات / خلية السريرية المحتملة لتجديد الغدد اللعابية.
Abstract
وكثيرا ما وجدت شديدة hypofunction الغدد اللعابية في المرضى الذين يعانون من متلازمة سجوجرن والذين يتلقون العلاج في تشعيع رؤوسهم ومناطق الرقبة لعلاج السرطان. كلا المجموعتين من المرضى أعراض الخبرة مثل جفاف الفم (جفاف الفم) ، عسر البلع (ضعاف المضغ والبلع) ، تسوس الأسنان الحادة ، والذوق تتغير ووادي الذهب ، البلعوم العدوى (المبيضات) ، التهاب الغشاء المخاطي والألم والانزعاج.
وتكهن أحد النهج المبتكرة للطب التجديدي لعلاج قصور الغدة اللعابية وظيفة في ريدمان RS ، E Mezey وآخرون 2009 : يمكن أن الخلايا الجذعية التي تودع مباشرة إقناء ؛ إدخال القنية في غدة كوسيلة فعالة في إحياء وظائف ضعاف الجهاز. يفترض ، فإن ترحيل الخلايا الجذعية الخارجية تفرق في الخلايا الغدية لتعمل كجزء من الغدة اللعابية المضيف. أيضا ، وهذا الأسلوب هو أسلوب إقناء ؛ إدخال القنية تسليم سريعة وفعالة لتطبيق نقل الجينات السريرية.
نحن هنا لتوضيح الخطوات المتبعة في تنفيذ الإجراء إقناء ؛ إدخال القنية على الغدة اللعابية تحت الفك السفلي الماوس عبر قناة وارتون (الشكل 1). وتستخدم C3H الفئران (نهر تشارلز ، مونتريال ، QC ، كندا) لهذه التجربة ، والتي ظلت نظيفة في ظل الظروف التقليدية في مركز جامعة ماكجيل الموارد الحيوانية. وقد تمت الموافقة على جميع التجارب من قبل لجنة رعاية الحيوان وجامعة وفقا للمبادئ التوجيهية للمجلس الكندي بشأن رعاية الحيوان.
عن هذه التجربة ، هي التي غرست حل التريبان الأزرق في الغدة من خلال افتتاح قناة وارتون باستخدام حقنة الانسولين مع إبرة عيار 29 مغلف داخل أنبوب من البولي إثيلين. بعد ذلك ، يتم تشريح الماوس لتظهر أن هاجرت إلى ضخ الغدة بنجاح.
Protocol
1. وصف الإجرائية
- حقن تحت الجلد 1 ميكروليتر / غرام من وزن الجسم من 0.5 ملغ / مل سلفات الأتروبين مونوهيدرات (القط # 11330 ، Fluka ، الولايات المتحدة) في كل فأر لمنع الإفرازات اللعابية من عرقلة حركة الضخ.
- تخدير كل الفأر مع وزن الجسم ميكرولتر 1 / ز من الكيتامين ملغ / 100 مل و 20 ملغ / مل زيلازين الحل (فينكس العلمية ، AR ، الولايات المتحدة الأمريكية) حقن داخل الصفاق (IP)
- ضع الماوس على منصة بلاستيكية صنعت خصيصا في موقف بطني : يتم تأمين القواطع العلوية على سلك معدني ، ومدمن مخدرات والقواطع في الفك السفلي عبارة عن سلسلة مرنة من أجل الاستمرار على فتح الفم.
- استخدام حقنة الأنسولين مع إبرة عيار 29 (القط # 600145 ، تايكو للرعاية الصحية ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية) وضعت داخل أنبوب قطره ملم 0.58 البولي ايثيلين (القط # 427410 ، بيكتون ديكنسون ، MD ، الولايات المتحدة الأمريكية ؛ الشكل 2). يتم إدخال أنبوب البولي ايثيلين 5mm على رأس إبرة عيار 29. يتم استخدام إبرة كدليل جامدة لتحريك أنبوب من البولي إثيلين في قناة وارتون. يتم إدخال أنبوب البولي ايثيلين 3-5 ملم داخل القناة. علما بأن فقط أنبوب يدخل البولي ايثيلين القناة الغدد اللعابية في حين لا يزال الإبرة خارج القناة. حقن 50ul من المصفاة 0.4 ٪ حل التريبان الأزرق وصمة عار (القط # 15250 ، Gibco ، الولايات المتحدة الأمريكية) في الغدة تحت الفك السفلي من خلال قناة وارتون ، والذي يقع الحق تحت اللسان. يتم تسليم التسريب بثبات مع الضغط الايجابي على مكبس الحقنة ، ويبقى على اصبع المكبس حتى بعد كل من التسريب تم تسليمها للغدة ، وذلك لمنع التسريب حويضي من داخل شفويا. يستخدم الحل التريبان الأزرق في الفيديو وصبغة لإظهار هذه التقنية.
- fter حقن الحل التريبان الأزرق ، والموت الرحيم الماوس قبل تشريح. يتعرض جراحيا الغدة اللعابية لتحديد كم من ضخ ظلت في الواقع في الغدة.
2. ممثل النتائج :
بعد حقن السوائل وكان تشريح الفأر لفضح جراحيا الغدة اللعابية مقنى بعد. كما هو موضح في الصورة 2 ، وتلوين المظلم من قناة وارتون يقدم ادلة على ان الحل غرست التريبان الأزرق بنجاح.
الشكل 1. الغدة تحت الفك السفلي إقناء ؛ إدخال القنية الماوس.
الشكل 2. أنبوب البولي إثيلين هو المغطى نحو غيض من إبرة عيار 29. يتم استخدام إبرة حقنة كدليل جامدة لتحريك أنبوب من البولي إثيلين في قناة وارتون. يتم إدخال أنبوب البولي إيثيلين (مقنى) 3-5 ملم داخل القناة. علما بأن فقط أنبوب يدخل البولي ايثيلين القناة الغدد اللعابية في حين لا يزال الإبرة خارج القناة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
وصعوبة في استخدام هذا الأسلوب هو إقناء ؛ إدخال القنية لمنع حويضي من الحل حقن. حتى إذا حل التريبان الأزرق قد هاجروا بشكل مؤقت في الغدة اللعابية بنجاح ، قد إفراز اللعاب تتداخل مع عملية الضخ وتسبب حويضي من الحل التريبان الأزرق خارج الغدة. كإجراء وقائي ، بالإضافة إلى استخدام الأتروبين لتثبيط إفراز اللعاب ، يجب أن تبقى في قنية البولي ايثيلين لاصق وارتون والمكبس من المحاقن التي عقدت لمدة 60 ثانية بعد أن تم إيداع دفعات. هذا سوف تسمح لمعظم من الحل غرست في البقاء داخل الغدة.
تقليديا ، استخدمت التطبيق المنهجي ، وهما الحقن في الوريد (رابعا) من المخدرات / الخلايا ، كنهج السريرية لتجديد الغدة اللعابية. حقن في الوريد وحقن السفر عن طريق الدورة الدموية بأكملها ، والسماح فقط بعض العقاقير / الخلايا على الهجرة الى الغدد المستهدفة. هذا بالمقارنة مع الطريقة التقليدية ، قد ينظر إلى التطبيق المحلي ، وهذا هو حقن المخدرات / الخلايا عن طريق إجراء إقناء ؛ إدخال القنية ، وبطريقة أكثر مباشرة وفعالة في إحياء وظائف الغدد اللعابية النكفية و، تحت الفك السفلي ، وتحت اللسان. وبالتالي ، يمكن استخدام هذه التقنية إقناء ؛ إدخال القنية نموذجا موثوقا به للطب التجديدي في الغدة اللعابية الماوس ، ونتيجة لاحتمالات المستقبل ، وهذا الإجراء قد يكون الأسلوب الملائم لتطبيق السريرية.
سيكون من دواعي سروري البالغ لهذه المادة البصرية لاستخدامها كأداة فعالة للطلاب والباحثين الذين يرغبون في مزيد من الدراسات في الطب التجديدي في الغدة اللعابية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
وقد تمت الموافقة على جميع التجارب من قبل لجنة رعاية الحيوان وجامعة وفقا للمبادئ التوجيهية للمجلس الكندي بشأن رعاية الحيوان.
Acknowledgments
المؤلفون ممتنون للدكتور آنا Cotrim للتشاور والتقنية للدكتور Monzur مرشد للمعدات. وكان في جزء منه بتمويل هذا العمل من قبل المعاهد الكندية لأبحاث الصحة.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Atropine | Drug | Fluka | 11330 | To inhibit saliva secretion |
| Ketamine | Drug | Phoenix Scientific | Sedation | |
| Xylazine | Drug | Phoenix Scientific | ||
| Polyethylene tubing (0.58 mm diameter) | Tube | Intramedic | 427410 | To insert over tip of needle to avoid tissue injury during insertion into Wharton’s duct. |
| Ultra Comfort Insulin syringe (with a 29G needle) | Syringe | Tyco Healthcare, Covidien | 600145 | |
| 4% trypan blue | Stain | GIBCO, by Life Technologies | 15250 |
References
- Fox, P. C. Acquired salivary dysfunction. Drugs and radiation. Ann N Y Acad Sci. 842, 132-137 (1998).
- Bhide, S. A., Miah, A. B., Harrington, K. J., Newbold, K. L., Nutting, C. M. Radiation-induced xerostomia: pathophysiology, prevention and treatment. Clin Oncol (R Coll Radiol). 21, 737-744 (2009).
- Redman, R. S., Ball, W. D., Mezey, E., Key, S. Dispersed donor salivary gland cells are widely distributed in the recipient gland when infused up the ductal tree. Biotech Histochem. 84, 253-260 (2009).
