Summary
Un protocole pour la canulation de la glande salivaire sous-maxillaire de la souris via le conduit de la Wharton est décrite. Pour cette expérience, la solution de bleu trypan est utilisé comme un teinturier de démontrer comment cette technique délivre effectivement des perfusions dans la glande cible, et de suggérer la fiabilité de cette nouvelle approche comme un potentiel clinique des médicaments / thérapie cellulaire pour la régénération des glandes salivaires.
Abstract
Sévère hypofonction des glandes salivaires est fréquemment retrouvée chez les patients atteints du syndrome de Gougerot-Sjögren et ceux qui recevoir une irradiation thérapeutique dans leur tête et du cou pour le traitement du cancer. Les deux groupes de patients éprouvent des symptômes tels que la xérostomie (bouche sèche), dysphagie (mastication et de la déglutition altérée), caries dentaires graves, altération du goût, des infections oro-pharyngées (candidose), inflammation des muqueuses, des douleurs et de l'inconfort.
Une approche novatrice de la médecine régénérative pour le traitement de la glande salivaire hypo-fonction est spéculé RS Redman, E Mezey et al, 2009:. Cellules souches peuvent être déposés directement par canulation dans la glande comme une méthode efficace pour relancer les fonctions de l'altération organe. On peut supposer que les cellules souches ont migré étrangers se différencier en cellules glandulaires à fonctionner dans le cadre de la glande salivaire hôte. En outre, cette technique de canulation est une méthode de livraison rapide et efficace pour les essais cliniquesdemande de transfert de gène.
Ici, nous illustrons les étapes à suivre pour effectuer la procédure de cathétérisme de la glande salivaire sous-maxillaire de la souris via le conduit de la Wharton (figure 1). C3H souris (Charles River, Montréal, QC, Canada) sont utilisés pour cette expérience, qui ont été gardés sous des conditions conventionnelles propres au centre de l'Université McGill ressources animales. Toutes les expériences ont été approuvés par le Comité de protection des animaux et de l'Université étaient en conformité avec les lignes directrices du Conseil canadien de protection des animaux.
Pour cette expérience, un bleu trypan solution est perfusée dans la glande à travers l'ouverture de la gaine de Wharton en utilisant une seringue à insuline avec une aiguille de calibre 29-enfermé à l'intérieur d'un tube de polyéthylène. Par la suite, la souris est disséqué pour montrer que les perfusions migré dans la glande succès.
Protocol
1. Description du procédurale
- Voie sous-cutanée injecter 1 poids corporel ul / g de 0,5 mg / ml monohydrate de sulfate d'atropine (Cat # 11330, Fluka, USA) dans chaque souris pour empêcher les sécrétions salivaires de perturber le mouvement des perfusions.
- Anesthésier chaque souris avec 1 poids corporel ul / g de 100 mg / ml de kétamine et 20 mg / ml de xylazine (Phoenix scientifique, AR, USA) solution injecté par voie intra-péritonéale (IP)
- Placez la souris sur une plate-forme en plastique sur mesure en position ventrale: les incisives supérieures sont bloqués sur un fil métallique, et les incisives mandibulaires sont accrochés sur une corde élastique pour maintenir la bouche ouverte.
- Utilisez une seringue à insuline avec une aiguille 29-gauge (Cat # 600145, Tyco Healthcare, MA, USA) placé à l'intérieur d'un tube de 0,58 mm de diamètre en polyéthylène (Cat # 427410, Becton Dickinson, MD, USA; Figure 2). Le tube de polyéthylène est insérée au-dessus de 5 mm de la pointe d'un manomètre 29-néedle. L'aiguille est utilisé comme un guide rigide pour déplacer le tube de polyéthylène dans le canal de Wharton. Le tube de polyéthylène est insérée 3-5 mm à l'intérieur du conduit. Notez que seul le tube de polyéthylène entre dans le canal de la glande salivaire alors que l'aiguille reste en dehors de la gaine. Injecter 50 ul de solution à 0,4% filtrée tache bleu trypan (Cat # 15250, Gibco, USA) dans la glande sous-maxillaire par le conduit de la Wharton, qui se trouve juste sous la langue. La perfusion est délivré de façon régulière avec une pression positive sur le piston de la seringue, le doigt reste sur le piston, même après la perfusion de tous ont été livrés à la glande, afin d'empêcher un reflux de la perfusion intra-orale. La solution de bleu trypan est utilisé dans la vidéo en tant que colorant pour démontrer la technique.
- près avoir l'injection de la solution de bleu trypan, la souris a été euthanasiée avant la dissection. Les glandes salivaires est exposé chirurgicalement afin de déterminer dans quelle mesure les perfusions ont effectivement restés dans laglande.
2. Les résultats représentatifs:
Après les injections ont été injectés, la souris a été disséquée chirurgicalement exposer la glande salivaire post-canule. Comme le montre l'image-2, la coloration foncée de la gaine de la Wharton fournit la preuve que la solution de bleu trypan a été infusé avec succès.
Figure 1. Canulation de la glande sous-maxillaire de la souris.
Tube de polyéthylène figure 2. Est enveloppé autour de la pointe d'une aiguille 29-gauge. L'aiguille de la seringue est utilisée comme un guide rigide pour déplacer le tube de polyéthylène dans le canal de Wharton. Le tube de polyéthylène est insérée (perforé) 3-5 mm à l'intérieur du conduit. Notez que seul le tube de polyéthylène entre dans le canal de la glande salivaire alors que l'aiguille reste en dehors de la gaine.
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Discussion
Une difficulté avec cette méthode canulation est d'empêcher le reflux de la solution injectée. Même si la solution de bleu trypan a temporairement migré dans la glande salivaire succès, la sécrétion de salive pourrait interférer avec les perfusions et provoquer le reflux de la solution de bleu trypan hors de la glande. Par mesure de précaution, en plus d'utiliser l'atropine pour inhiber la sécrétion de la salive, la canule polyéthylène doit rester dans le conduit de Wharton et le piston de la seringue maintenue pendant 60 secondes après les perfusions ont été déposés. Cela permettra à la plupart de la solution infusée à rester à l'intérieur de la glande.
Classiquement, l'application systémique, à savoir l'injection intraveineuse (IV) de médicaments / cellules, a été utilisé comme une approche clinique de la régénération des glandes salivaires. Perfusions par voie intraveineuse une injection Voyage à travers l'ensemble du système circulatoire, ne permettant que certains des médicaments / cellules à migrer vers les glandes ciblées.Par rapport à cette méthode traditionnelle, l'application locale, qui est l'injection de drogues / cellules via la procédure de cathétérisme, peut être perçu comme une façon plus directe et efficace de raviver les fonctions des glandes parotides, sous-maxillaires et sublinguales salivaires. Par conséquent, cette technique de canulation peut être utilisé comme un modèle fiable pour la médecine régénérative de la glande salivaire de la souris, et, comme une perspective d'avenir, cette procédure peut être une méthode efficace pour une application clinique.
Ce serait un grand plaisir pour cet article visuelle à être utilisé comme un outil efficace pour les étudiants et chercheurs qui sont intéressés à d'autres études dans la médecine régénérative de la glande salivaire.
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Disclosures
Toutes les expériences ont été approuvés par le Comité de protection des animaux et de l'Université étaient en conformité avec les lignes directrices du Conseil canadien de protection des animaux.
Acknowledgments
Les auteurs tiennent à remercier le Dr Ana Cotrim de consultation technique et le Dr Monzur Murshed pour l'équipement. Ce travail a été en partie financée par les Instituts de recherche en santé.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Atropine | Drug | Fluka | 11330 | To inhibit saliva secretion |
| Ketamine | Drug | Phoenix Scientific | Sedation | |
| Xylazine | Drug | Phoenix Scientific | ||
| Polyethylene tubing (0.58 mm diameter) | Tube | Intramedic | 427410 | To insert over tip of needle to avoid tissue injury during insertion into Wharton’s duct. |
| Ultra Comfort Insulin syringe (with a 29G needle) | Syringe | Tyco Healthcare, Covidien | 600145 | |
| 4% trypan blue | Stain | GIBCO, by Life Technologies | 15250 |
References
- Fox, P. C. Acquired salivary dysfunction. Drugs and radiation. Ann N Y Acad Sci. 842, 132-137 (1998).
- Bhide, S. A., Miah, A. B., Harrington, K. J., Newbold, K. L., Nutting, C. M. Radiation-induced xerostomia: pathophysiology, prevention and treatment. Clin Oncol (R Coll Radiol). 21, 737-744 (2009).
- Redman, R. S., Ball, W. D., Mezey, E., Key, S. Dispersed donor salivary gland cells are widely distributed in the recipient gland when infused up the ductal tree. Biotech Histochem. 84, 253-260 (2009).
