Summary
פרוטוקול עבור cannulation של בלוטת הרוק עכבר submandibular דרך צינור של וורטון מתואר. לצורך ניסוי זה, הפתרון כחול trypan משמש הצבעים כדי להדגים כיצד טכניקה זו יעילה מספק חליטות לתוך בלוטת ממוקד, ולהציע את האמינות של הגישה החדשה הזו כמו טיפול פוטנציאלי סמים / תא קליניות לגבי רגנרצית של בלוטות הרוק.
Abstract
בלוטת הרוק חמור hypofunction נמצא לעתים קרובות בחולים עם תסמונת סיוגרן ואלה שקיבלו טיפולי הקרנה בראש שלהם ואזורים הצוואר לטיפול בסרטן. שתי קבוצות של סימפטומים מהמטופלים חווים כגון xerostomia (יובש בפה), הבליעה (לקויי בלעיסה ובבליעה), עששת חמורה, טעם שונה, oro-בלוע זיהומים (קנדידה), mucositis כאב ואי נוחות.
גישה אחת חדשני של רפואה רגנרטיבית לטיפול בלוטת הרוק תת פונקציה משערים של RS רדמן, E Mezey et al 2009:. בתאי גזע ניתן להפקיד ישירות לתוך בלוטת ידי cannulation כשיטה עוצמה להחיות את הפונקציות של לקויי איברים. יש להניח, התאים נדדו גזע זר יהיה להתמיין לתאי הבלוטות לתפקד כחלק של בלוטת הרוק המארח. כמו כן, טכניקה זו cannulation היא שיטה המסירה רצוי ויעיל ליישום קליני גן ההעברה.
כאן אנו מדגימים את השלבים הכרוכים בביצוע ההליך cannulation על בלוטת הרוק עכבר submandibular דרך צינור של וורטון (איור 1). C3H עכברים (צ'ארלס ריבר, מונטריאול, QC, קנדה) משמשים עבור ניסוי זה, אשר נשמרו בתנאים רגילים נקיים במרכז אוניברסיטת מקגיל משאב בעל חיים. כל הניסויים אושרו על ידי ועדת טיפול בבעלי חיים באוניברסיטת היו בהתאם להנחיות המועצה הקנדית על בריאות בעלי חיים.
לצורך ניסוי זה, פתרון trypan הכחול הוא החדיר לתוך בלוטת באמצעות פתיחת צינור של וורטון באמצעות מזרק אינסולין עם מחט 29-מד עטוף בתוך צינור פוליאתילן. לאחר מכן, העכבר הוא גזור להראות כי חליטות היגרו לתוך בלוטת בהצלחה.
Protocol
1. תיאור פרוצדורלי
- תת עורי להזריק μl 1 / משקל הגוף גרם monohydrate אטרופין 0.5 מ"ג / מ"ל סולפט (Cat # 11330, Fluka, ארה"ב) לעכבר כדי למנוע את כל הפרשות הרוק מן לשבש את התנועה של חליטות.
- הרדימי כל עכבר עם משקל גוף μl 1 / g של קטמין מ"ג / מ"ל ו - 100 20 מ"ג / מ"ל xylazine (פיניקס מדעי, AR, ארה"ב) פתרון מוזרק התוך צפקי (IP)
- הנח את העכבר על פלטפורמה מחוייט פלסטיק במצב הגחון: החותכות לסתי נעולים על חוט מתכת, החותכות mandibular מחוברות על חוט אלסטי על מנת להחזיק את הפה פתוח.
- השתמש מזרק אינסולין עם מחט 29-מד (Cat # 600145, Tyco Healthcare, מסצ'וסטס, ארה"ב) ממוקמים בתוך צינור פוליאתילן בקוטר 0.58 מ"מ (Cat # 427410, בקטון דיקינסון, MD, ארה"ב; איור 2). צינור פוליאתילן מוכנס 5mm על קצה מחט 29-מד. מחט משמש כמדריך נוקשה להזיז את הצינור לתוך צינור פוליאתילן של וורטון. צינור פוליאתילן מוכנס 3-5 מ"מ בתוך צינור. שים לב, רק צינור פוליאתילן נכנס צינור בלוטת הרוק בעוד המחט נותרת מחוץ בצינור. הזרק 50ul מסונן של פתרון 0.4% trypan כתם כחול (Cat # 15250, Gibco, ארה"ב) לתוך בלוטת submandibular דרך צינור של וורטון, הנמצא ממש מתחת ללשון. עירוי מועבר בהתמדה עם לחץ חיובי על הבוכנה מזרק; אצבע נשארת על הבוכנה גם אחרי כל העירוי נמסרה בלוטת, על מנת למנוע backflow של העירוי התוך דרך הפה. הפתרון כחול trypan משמש וידאו כמו צבע כדי להדגים את הטכניקה.
- חרי את הזריקה של הפתרון trypan כחול, העכבר היה מורדמים לקראת לנתיחה. בלוטת הרוק נחשף בניתוח על מנת לקבוע כמה חליטות נותרו למעשה בבלוטת.
2. נציג תוצאות:
לאחר חליטות הוזרקו, העכבר היה גזור כדי לחשוף את הבלוטה בניתוח שלאחר cannulated הרוק. כפי שמוצג על תמונה-2, צבע כהה של צינור של וורטון מספק ראיות כי הפתרון כחול trypan היה חדור בהצלחה.
באיור 1. Cannulation של בלוטת submandibular העכבר.
איור 2. פוליאתילן צינור עטוף סביב קצה מחט 29-מד. מחט המזרק משמש כמדריך נוקשה להזיז את הצינור לתוך צינור פוליאתילן של וורטון. צינור פוליאתילן מוכנס (cannulated) 3-5 מ"מ בתוך צינור. שים לב, רק צינור פוליאתילן נכנס צינור בלוטת הרוק בעוד המחט נותרת מחוץ בצינור.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
הקושי בשיטה זו cannulation היא למנוע backflow הפתרון מוזרק. גם אם הפתרון trypan כחול העביר זמנית לתוך בלוטת הרוק בהצלחה, הפרשת רוק עלולים להפריע לתהליך חליטות ולגרום backflow הפתרון trypan כחול מתוך בלוטת. כאמצעי זהירות, בנוסף לשימוש אטרופין כדי לדכא את הפרשת הרוק, את הצינורית פוליאתילן צריך להישאר דביק של וורטון את הבוכנה של המזרק שנערך במשך 60 שניות לאחר חליטות הופקדו. זה יאפשר ביותר של הפתרון חדורים להישאר בתוך הבלוטה.
כמקובל, יישום מערכתי, כלומר הזרקה תוך ורידית (IV) של תרופות / תאים, שימש גישה קליניות לגבי רגנרצית בלוטת הרוק. חליטות מוזרק לווריד ייסעו דרך מערכת הדם כולה, ומאפשר רק חלק תרופות / התאים לנדוד אל בלוטות ממוקדות. לעומת השיטה המסורתית, היישום המקומי, כי הוא הזרקה של תרופות / תאים באמצעות ההליך cannulation, עשויים להיתפס באופן ישיר יותר ויעיל להחיות את הפונקציות של בלוטות הרוק הפרוטיד, submandibular ו sublingual. לפיכך, טכניקה זו cannulation יכול לשמש מודל אמין עבור התרופה משובי של בלוטת הרוק העכבר, וככל הסיכוי לעתיד, הליך זה עשוי להיות שיטה כדאית עבור יישומים קליניים.
זה יהיה תענוג גדול עבור מאמר חזותי זה כדי לשמש כלי יעיל סטודנטים וחוקרים המעוניינים מחקרים נוספים בתחומי הרפואה משובי של בלוטת הרוק.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
כל הניסויים אושרו על ידי ועדת טיפול בבעלי חיים באוניברסיטת היו בהתאם להנחיות המועצה הקנדית על בריאות בעלי חיים.
Acknowledgments
המחברים מודים לד"ר אנה Cotrim להתייעצות טכניים ד"ר Monzur מורשד לציוד. עבודה זו הייתה חלק ממומן על ידי המכון הקנדי לחקר בריאות.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Atropine | Drug | Fluka | 11330 | To inhibit saliva secretion |
| Ketamine | Drug | Phoenix Scientific | Sedation | |
| Xylazine | Drug | Phoenix Scientific | ||
| Polyethylene tubing (0.58 mm diameter) | Tube | Intramedic | 427410 | To insert over tip of needle to avoid tissue injury during insertion into Wharton’s duct. |
| Ultra Comfort Insulin syringe (with a 29G needle) | Syringe | Tyco Healthcare, Covidien | 600145 | |
| 4% trypan blue | Stain | GIBCO, by Life Technologies | 15250 |
References
- Fox, P. C. Acquired salivary dysfunction. Drugs and radiation. Ann N Y Acad Sci. 842, 132-137 (1998).
- Bhide, S. A., Miah, A. B., Harrington, K. J., Newbold, K. L., Nutting, C. M. Radiation-induced xerostomia: pathophysiology, prevention and treatment. Clin Oncol (R Coll Radiol). 21, 737-744 (2009).
- Redman, R. S., Ball, W. D., Mezey, E., Key, S. Dispersed donor salivary gland cells are widely distributed in the recipient gland when infused up the ductal tree. Biotech Histochem. 84, 253-260 (2009).
