Summary
शल्य चिकित्सा के चूहों में प्रयोगात्मक myocardial infarction के लिए प्रेरित करने के लिए प्रक्रिया का इस्तेमाल किया 3 और 4 पसलियों के बीच छोड़ दिया thoracotomy के साथ शुरू होता है क्रम में दिल और बाएं फेफड़े के पूर्वकाल सतह कल्पना करने के लिए. बाईं कोरोनरी धमनी ligated है, सीने में बंद है और माउस अनायास ठीक करने के लिए अनुमति दी है.
Abstract
रोधगलन (एमआई) 1-3 इंसानों में मृत्यु दर का सबसे महत्वपूर्ण कारणों में से एक है. आदेश में एमआई के साथ रोगियों हम दौरे के pathophysiology के बारे में बेहतर ज्ञान की आवश्यकता में रुग्णता और मृत्यु दर में सुधार करने के लिए. इस ज्ञान अभिनव हृदय 4 उपचार के लिए नया चिकित्सात्मक लक्ष्य को परिभाषित करने के लिए मूल्यवान हो सकता है. चूहों में प्रायोगिक एमआई मॉडल preclinical अनुसंधान के क्षेत्र में एक तेजी से लोकप्रिय छोटे पशु मॉडल में जो एमआई बाईं कोरोनरी धमनी (एलसीए) 5 के स्थायी या अस्थायी ligation के माध्यम से प्रेरित है. इस वीडियो में, हम कैसे चूहों में प्रयोगात्मक एमआई प्रेरित करने के लिए कदम दर कदम विधि का वर्णन है.
पशु 1 2% isoflurane के साथ anesthetized है. बेहोश माउस और फिर intubated कृत्रिम वेंटीलेशन के लिए एक वेंटीलेटर से जुड़ा है. बाएं सीने के बाल काटे और मध्य कक्षा रेखा के साथ 1.5 सेमी चीरा त्वचा में किया जाता है. छोड़ दिया pectoralis प्रमुख मांसपेशी दो टूक dissoc हैiated तक पसलियों उजागर कर रहे हैं. मांसपेशी परतों तरफ खींच रहे हैं और एक पलक retractor साथ तय की. इन तैयारियों के बाद छोड़ दिया thoracotomy तीसरे और चौथे पसलियों के बीच किया जाता है क्रम में करने के लिए दिल और बाएं फेफड़े के पूर्वकाल सतह कल्पना. एलसीए धमनी के समीपस्थ खंड तो 7-0 ethilon सीवन जो आमतौर पर एक infarct आकार ~ बाएं वेंट्रिकल की 40% लाती साथ ligated है. अंत में, सीने में बंद है और जानवरों के पश्चात analgesia प्राप्त (Temgesic, 0.3 mg/50 मिली, आईपी). जानवरों के सहज वसूली तक एक गर्म पिंजरे में रखा जाता है.
Protocol
1. प्रोटोकॉल पाठ
- सर्जरी करने के लिए आगे बढ़ने से पहले, एक पुरुष (/ 6 C57BL) माउस है कि 6 सप्ताह की आयु या isoflurane 2-5% की साँस लेना द्वारा पुराने anesthetize. एक पैर की अंगुली चुटकी का प्रदर्शन करने के लिए पुष्टि करते हैं कि पशु पर्याप्त anesthetized है.
- बेहोश माउस अपनी पीठ पर एक गर्म पैड पर रखा गया है करने के लिए 37 डिग्री सेल्सियस के एक निरंतर तापमान बनाए रखने के बाईं ओर precordial छाती के बाल काटे है.
- Isoflurane से भरे एक कक्ष के साथ एक इंटुबैषेण डिवाइस के लिए माउस सुरक्षित. माउस ट्रेकिआ में मुंह के माध्यम से 0.2 भीतरी व्यास की एक ट्यूब डालें, तो एक सड़न रोकनेवाला शल्य चिकित्सा के क्षेत्र में हो (37 डिग्री तापमान नियंत्रक द्वारा सी) intubated माउस जगह और एक वेंटीलेटर (120 प्रति मिनट दर के दबाव अंतःश्वासनलीय ट्यूब कनेक्ट 04-06 फ़रवरी MMH O); Betadine और 75% इथेनॉल के साथ क्षेत्र कीटाणुरहित.
- माउस की आँखों नेत्र मरहम लागू. पंजे पर मानक ईसीजी इलेक्ट्रोड प्लेस और ईसीजी रिकॉर्डर माउस कनेक्ट. बाँझ कैंची का उपयोग करने के लिए मध्य कक्षा लाइन के साथ एक 1.5 सेमी चीरा बनाने के लिए. कैंची बल्कि एक स्केलपेल से उपयोग किया जाता है चूहों में अंतर्निहित ऊतकों को चोट से बचने के लिए. फिर, कुंद टिप पोत कैंची का उपयोग करने के लिए काटना और छाती दीवार से precordial मांसपेशी वापस लेना.
- तीसरे और चौथे पसलियों के बीच छोड़ दिया thoracotomy प्रदर्शन करने के लिए दिल और बाएं फेफड़े के पूर्वकाल सतह कल्पना
- इसके अलावा वक्ष दीवार एक उपयुक्त retractor का उपयोग करने में दृश्य और पहुंच में सुधार करवाया. दांतेदार संदंश और कुंद इत्तला दे दी कैंची का उपयोग करके pericardium निकालें.
- मायोकार्डियम का संयुक्ताक्षर और धमनी के बीच एक बैंड के साथ सुई (7-0 ethilon सीवन के साथ संलग्न) रखने धमनी नीचे बाईं कोरोनरी धमनी कटी घमनी को बांधना. कोरोनरी धमनी के एक सफल रोड़ा / hypokinesis पूर्वकाल बाएं निलय की दीवार की गतिशक्तिहीनता द्वारा सत्यापित है और ईसीजी रिकॉर्डिंग के परिवर्तन (जैसे अनुसूचित जनजाति श्रेणी के उन्नयन, क्यूआर broadeniएनजी)
- 3 और 4 पसलियों पर दो टांके (6-0 ethilon सिवनी) रखने के द्वारा छाती बंद करें.
- 5-0 ethilon सीवन का उपयोग करने के लिए त्वचा के करीब.
- पोस्ट ऑपरेटिव analgesia के लिए, buprenorphine (0.05 मिलीग्राम / किग्रा) के एक एकल intraperitoneal इंजेक्शन प्रशासन. जानवरों अनायास isoflurane संज्ञाहरण को रोकने के बाद 2-5 मिनट के भीतर ठीक हो जाएगी. अंत में, एक गर्म पिंजरे में माउस जगह और पोस्ट ऑपरेटिव संकट को रोकने के लिए पीने (पाठ ओवरले: / पीने के पानी में 0.6 मिलीग्राम मिलीलीटर) पानी में buprenorphine के 0.6 मिलीग्राम / मिलीलीटर प्रदान करने के लिए. बारीकी से सर्जरी के बाद पहले 24 घंटे के लिए माउस की निगरानी.
- इकोकार्डियोग्राफी myocardial infarction के बाद 3 दिन हृदय समारोह का मूल्यांकन करने के लिए किया जाता है. सफल प्रक्रिया पूर्वकाल बाएं निलय की दीवार में गति - अक्षमता (परिणाम में संलग्न वीडियो देखें) द्वारा सत्यापित है. प्रयोग के अंत में, दिल और एकत्र किया जाएगा में 80oC संग्रहीत यानी आगे की जांच के लिए जीन की अभिव्यक्ति.
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Representative Results
| साधन | समारोह वर्णन |
| ब्लंट - टिप कैंची | त्वचा, पसलियों के बीच सीने में पेशी, और sutures में कटौती करने के लिए इस्तेमाल किया |
| नेत्र retractor | के लिए शल्य चिकित्सा दृश्य बेनकाब करने के लिए किया जाता है |
| ब्लंट - टिप संदंश | त्वचा और मांसपेशियों समझ में प्रयुक्त |
| सुई धारक | एक सुई पकड़ |
| 5-0 सीवन | त्वचा सीवन के लिए प्रयुक्त |
| 6-0 सीवन | सीने में पेशी सिवनी |
| 7-0 सीवन | कोरोनरी धमनी की कटी घमनी को बांधना |
तालिका 1. रोधगलन की प्रक्रिया में प्रयुक्त उपकरण.
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कोरोनरी धमनी ligation से पहले ए चित्रा, बाएं आलिंद, बाएं फेफड़े, और बाएं वेंट्रिकल की पूर्वकाल दीवार खुल गए थे. ईसीजी में दिखाया क्यूआर परिसरों संकीर्ण और कम थे.
कोरोनरी धमनी ligation के बाद चित्रा बी, छोड़ दिया नीलिमा और diskinesia विकसित वेंट्रिकल की पूर्वकाल दीवार. क्यूआर परिसरों काफी व्यापक हो गया है और अनुसूचित जनजाति क्षेत्रों जाहिर कोरोनरी धमनी ligation से पहले उन लोगों के साथ तुलना में ऊपर उठाया गया है,.
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Discussion
एलसीए ligation के लिए शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया के रूप में इस रिपोर्ट में प्रदर्शन प्रयोगात्मक एमआई के 3 चूहों, 6 में शामिल होने के लिए एक विश्वसनीय और प्रतिलिपि प्रस्तुत विधि है. एलसीए के इस प्रोटोकॉल के अनुसार आम तौर पर उलझाने ligation myocardial ischemia लाती ~ छोड़ दिया 3 वेंट्रिकल की 40% है. यह दिल के पूर्वकाल सतह पर अनुसूचित जनजाति के 7 खंड और दिखाई पीलापन में महत्वपूर्ण ईसीजी परिवर्तन लाती है. बड़े myocardial infarction के कारण, मृत्यु दर 30 8%, 9 तक हो सकता है. एक नोट किया जा सकता है कि infarcted दौरे क्षेत्र और मृत्यु दर के बाद एमआई विभिन्न पशु उपभेदों में अलग हो सकता है चाहिए. विधि के कई फायदे हैं. पूर्वकाल छाती दीवार पर मध्य कक्षा रेखा के साथ त्वचा चीरा के बजाय नियुक्ति इकोकार्डियोग्राफी के साथ बाद में जांच की सुविधा है. ऑपरेटिव घाव में stiches दिल के पूर्वकाल क्षेत्रों के अल्ट्रासाउंड इमेजिंग के साथ हस्तक्षेप नहीं करते. इसके अलावा, चूहों की इंटुबैषेण ऑपरेटर के लिए अनुमति देता हैसर्जरी प्रदर्शन करने के लिए पर्याप्त समय है. छाती के अंदर एलसीए में सीटू "ligation अधिक" शारीरिक "रूप में की बाह्यीभवन के बाद एलसीए के ligation के लिए विरोध के रूप में इस गंभीर bradycardia और वैश्विक 10 hypoxia प्रेरित है. यह दृष्टिकोण भी cryoinjury आधारित दृष्टिकोण से अधिक लाभ धारण के रूप में बाद pathophysiological ischemia प्रेरित myocardial infarction जो इस्कीमिक cardiomyopathy के यंत्रवत अध्ययनों उलझाना के उन लोगों से अलग प्रक्रियाओं के साथ जुड़ा हुआ है. हम मानते हैं कि इस वीडियो और साथ निर्देश उपयोगी चूहों में प्रयोगात्मक एमआई के लिए मौजूदा तकनीकों को पूरक होगा.
समस्या निवारण:
- महत्वपूर्ण संरचनात्मक ढांचे (बाएं आलिंद, बाएँ पूर्वकाल ventricular दीवार और बाएं फेफड़े) का सबसे अच्छा दृश्य मिलता है, बाएं thoracotomy आमतौर पर 3 और 4 रिब के बीच किया जाता है.
- ध्यान रखें कि छोड़ दिया एटीआर के आकस्मिक पंचरगंभीर रक्तस्राव में ium परिणाम है कि जानवर की मौत के लिए नेतृत्व कर सकते हैं.
- फेफड़े contusion के रूप में यह वृद्धि की मृत्यु का कारण हो सकता है बचा जाना चाहिए. यदि बाएं फेफड़े छाती के उद्घाटन के बाद दिल को कवर कर रहा है, फेफड़े के ऊतकों जैसे कपास - छड़ी का उपयोग करके धीरे मुकर चाहिए.
- Isoflurane के उच्च एकाग्रता से बचा जाना चाहिए. आम तौर पर 2% isoflurane के वर्तमान सर्जरी में उचित संज्ञाहरण की उपलब्धि के लिए इष्टतम है.
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Disclosures
ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.
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