Summary
العملية الجراحية المستخدمة للحث على احتشاء عضلة القلب التجريبية في الفئران يبدأ بضع الصدر الأيسر بين الثالث والرابع في الأضلاع أجل رؤية سطح الأمامي للقلب والرئة اليسرى. وligated التاجي الأيسر الشريان، يتم إغلاق الصدر ويسمح الماوس لاسترداد تلقائيا.
Abstract
احتشاء عضلة القلب (MI) هو واحد من أهم أسباب الوفيات في البشر 1-3. من أجل تحسين معدلات الاعتلال والوفيات في المرضى الذين يعانون من MI نحتاج معرفة أفضل حول الفيزيولوجيا المرضية لنقص تروية عضلة القلب. قد تكون هذه المعرفة قيمة لتحديد أهداف علاجية جديدة لعلاج القلب والأوعية الدموية مبتكرة 4. نموذج تجريبي MI في الفئران هو شعبية متزايدة الحيوانات الصغيرة في مجال البحوث قبل السريرية نموذج التي يسببها MI عن طريق ربط دائمة أو مؤقتة من الشريان التاجي الأيسر (LCA) 5. في هذا الفيديو، ونحن تصف طريقة خطوة بخطوة لكيفية حمل MI التجريبية في الفئران.
الحيوان للتخدير الأولى مع 2٪ isoflurane. ومدخل أنبوب الماوس ثم فاقدا للوعي وصله بجهاز التنفس الصناعي للتهوية اصطناعية. وحلق الصدر الأيسر ويتم شق 1،5 سم على طول خط منتصف الإبط في الجلد. العضلة الصدرية الكبرى اليسار هو بصراحة dissociated حتى تتعرض الأضلاع. يتم سحبها طبقات العضلات جانبا وثابتة مع مبعاد-جفن. بعد هذه الاستعدادات، يتم تنفيذ بضع الصدر بين الأضلاع اليسرى الثالث والرابع من أجل رؤية سطح الأمامي للقلب والرئة اليسرى. وligated ثم الجزء القريب من الشريان LCA مع خياطة ethilon 7-0 الذي يدفع عادة حجم احتشاء ~ 40٪ من البطين الأيسر. في النهاية، يتم إغلاق الصدر والحيوانات تسكين بعد العملية الجراحية تلقي (Temgesic، 0.3 مل mg/50، والملكية الفكرية). يتم الاحتفاظ الحيوانات في قفص دافئ حتى الشفاء التلقائي.
Protocol
1. بروتوكول النص
- قبل الشروع في عملية جراحية، تخدير ماوس الذكور (C57BL / 6) وهذا هو 6 أسابيع من العمر أو أكثر عن طريق الاستنشاق من 2-5٪ isoflurane. أداء قليل أخمص القدمين للتأكد من أن الحيوان هو تخدير بما فيه الكفاية.
- يتم وضع الماوس على ظهرها وعيه على وسادة دافئة للحفاظ على درجة حرارة ثابتة للC. ° 37 وحلق الصدر بركي على الجانب الأيسر.
- تأمين الماوس لجهاز التنبيب مع دائرة isoflurane شغلها. إدخال أنبوب من 0.2 القطر الداخلي في القصبة الهوائية الماوس من خلال الفم، ثم ضع الماوس المنببين على مساحة جراحي العقيم (37 ° C بواسطة وحدة تحكم بدرجة الحرارة) وتوصيل أنبوب القصبة الهوائية لجهاز التنفس الصناعي (معدل 120 في دقيقة، ضغط من 4-6 MMH 2 O)؛ تطهير المنطقة مع betadine والايثانول 75٪.
- تطبيق مرهم للعين للعيون الفأر. وضع معيار أقطاب ECG على الكفوف وتوصيل الماوس إلى مسجل ECG. استخدام مقص العقيمة لجعل شق الطول 1،5 على طول خط منتصف الإبط. وتستخدم بدلا من المقص مشرط لتجنب إصابة الأنسجة الكامنة في الفئران. ثم، استخدم مقص سفينة حادة معلومات سرية لتشريح العضلات وسحب بركي من جدار الصدر.
- إجراء بضع الصدر بين الأضلاع اليسرى الثالث والرابع لتصور سطح الأمامي للقلب والرئة اليسرى
- سحب المزيد من الجدار الصدري باستخدام مبعاد مناسبة من أجل تحسين التصور وسهولة الوصول إليها. إزالة التأمور ملقط مسنن باستخدام مقص حادة وذات الرؤوس.
- Ligate التاجي الأيسر الشريان عن طريق وضع إبرة (المرفقة مع خياطة ethilon 7-0) تحت الشريان مع عصابة من عضلة القلب بين ضمد والشريان. يتم التحقق من وانسداد الشريان التاجي ناجحة من نقص الحراك / تعذر الحركة للجدار البطين الأيسر الأمامي والتعديلات على تسجيل ECG (مثل ارتفاع الجزء ST، QRS broadeniنانوغرام)
- إغلاق الصدر بوضع اثنين غرز (6-0 ethilon خياطة) على الأضلاع الثالث والرابع.
- استخدام 5-0 خياطة ethilon لإغلاق الجلد.
- لتسكين بعد العملية، إدارة حقنة واحدة داخل الصفاق من البوبرينورفين (0.05 مغ / كغ). فإن الحيوانات استرداد تلقائيا خلال 2-5 دقيقة بعد وقف التخدير isoflurane. وأخيرا، ضع الماوس في قفص دافئة وتوفير 0.6 ملغ / مل من البوبرينورفين في مياه الشرب (تراكب النص: 0.6 ملغ / مل في مياه الشرب) لمنع استغاثة بعد الجراحة. يرصد عن كثب الماوس لال 24 ساعة الأولى بعد الجراحة.
- يتم تنفيذ تخطيط صدى القلب لتقييم وظائف القلب بعد 3 أيام احتشاء عضلة القلب. يتم التحقق الداخلي الناجحة التي قام بها تعذر الحركة في جدار البطين الأيسر الأمامي (انظر الفيديو المرفق في النتائج). في نهاية التجربة، سيتم جمعها وتخزينها قلب في 80oC لاستكمال التحقيقات. أي التعبير الجيني.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
| صك | وصف وظيفة |
| معلومات سرية حادة مقص | تستخدم لقطع الجلد، وعضلات الصدر وربي، وخياطة الجروح |
| العين مبعاد | تستخدم للكشف عن رأي الجراحية |
| كليلة معلومات سرية ملقط | تستخدم لفهم الجلد والعضلات |
| إبرة حامل | عقد إبرة |
| 5-0 خياطة | خياطة الجلد تستخدم ل |
| 6-0 خياطة | تستخدم لخياطة عضلات الصدر |
| 7-0 خياطة | تستخدم لligate الشريان التاجي |
الجدول 1. الأدوات المستخدمة في إجراء احتشاء عضلة القلب.
/ ftp_upload/3093/3093figA.jpg "/>
والرقم A. قبل ربط الشريان التاجي، ويتعرضون الأذين الأيسر، الرئة اليسرى، والجدار الأمامي للبطين الأيسر. كانت المجمعات QRS هو مبين في ECG ضيقة وقصيرة.
الرقم B. بعد ربط الشريان التاجي، الجدار الأمامي للبطين الأيسر وضعت زراق diskinesia. أصبحت المجمعات QRS أوسع بكثير وكان من الواضح أن قطاعات مرتفعة ST، مقارنة مع تلك قبل ربط الشريان التاجي.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
العملية الجراحية لربط المخصص كما هو موضح في هذا التقرير هو وسيلة يمكن الاعتماد عليها وقابلة للتكرار لتحريض MI التجريبية في الفئران 3 و 6. وربط المخصص للوفقا لهذا البروتوكول يدفع نقص تروية عضلة القلب عادة الانخراط ~ 40٪ من البطين الأيسر 3. هذا يدفع تغييرات مهمة في قطاع ST ECG 7 و شحوب مرئية على سطح الأمامي للقلب. بسبب احتشاء عضلة القلب وكبيرة، يمكن أن تكون وفيات تصل إلى 30٪ 8 و 9. وينبغي بذل علما بأن معدل وفيات المنطقة واحتشاء آخر MI-عضلة القلب قد تكون مختلفة بين سلالات الحيوانية المختلفة. طريقة ديها العديد من المزايا. وضع شق الجلد على طول خط منتصف الإبط بدلا من جدار الصدر الأمامي على تسهيل التحقيق في وقت لاحق مع ضربات القلب. وغرز في الجرح المنطوق لا تتداخل مع التصوير بالموجات فوق الصوتية للقطاعات الأمامية للقلب. وعلاوة على ذلك، فإن التنبيب من الفئران يسمح للمشغلما يكفي من الوقت لإجراء الجراحة. وربط المخصص لل"في الموقع" داخل الصدر هو أكثر "الفسيولوجية" بدلا من ربط للLCA بعد تخريج من حيث سيؤدي ذلك إلى بطء شديد وحمل نقص الأكسجة العالمية 10. يحمل هذا النهج أيضا المزايا على النهج القائم على cryoinjury يرتبط هذا الأخير مع العمليات الفيزيولوجية المرضية تختلف عن نقص التروية الناجم عن احتشاء عضلة القلب التي قد تؤدي إلى تشويش الدراسات الآلي من اعتلال عضلة القلب الإقفاري. ونحن نعتقد أن هذا الفيديو والتعليمات المرفقة سيكون من تكملة مفيدة للتقنيات القائمة لMI التجريبية في الفئران.
استكشاف الأخطاء وإصلاحها:
- للحصول على أفضل رؤية الهياكل التشريحية الهامة (الأذين الأيسر، البطين الأيسر الأمامي الجدار، والرئة اليسرى)، وعادة ما يتم إجراء بضع الصدر الأيسر بين الثالث والضلع الرابع.
- تكون على علم بأن عرضي ثقب من اليسار ATRالنتائج البوتاسيوم في نزيف حاد قد يؤدي إلى موت الحيوان.
- وينبغي تجنب كدمة الرئة لأنه قد يسبب زيادة معدل الوفيات. إذا الرئة اليسرى والقلب بعد تغطية افتتاح الصدر، ينبغي سحب أنسجة الرئة بلطف باستخدام مثل القطن لاصقة.
- وينبغي تجنب تركيز عال من isoflurane. عادة 2٪ من isoflurane هو الأمثل لتحقيق التخدير المناسب لعملية جراحية في الوقت الحاضر.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
References
- Tabrizchi, R. Beta-blocker therapy after acute myocardial infarction. Expert Rev. Cardiovasc. Ther. 11, 293-296 (2013).
- Pell, S., Fayerweather, W. E. Trends in the incidence of myocardial infarction and in associated mortality and morbidity in a large employed population, 1957-1983. N. Engl. J. Med. 312, 1005-1011 (1985).
- Ramunddal, T., Gizurarson, S., Lorentzon, M., Omerovic, E. Antiarrhythmic effects of growth hormone--in vivo evidence from small-animal models of acute myocardial infarction and invasive electrophysiology. J. Electrocardiol. 41, 144-151 (2008).
- Thom, T., Haase, N., Rosamond, W., Howard, V. J., Rumsfeld, J., Manolio, T., Zheng, Z. J., Flegal, K., O'Donnell, C., Kittner, S., et al. Heart disease and stroke statistics--2006 update: A report from the american heart association statistics committee and stroke statistics subcommittee. Circulation. 113, 85-151 (2006).
- van den Bos, E. J., Mees, B. M., de Waard, M. C., de Crom, R., Duncker, D. J. A novel model of cryoinjury-induced myocardial infarction in the mouse: A comparison with coronary artery ligation. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 289, 1291-1300 (2005).
- Omerovic, E., Ramunddal, T., Lorentzon, M., Nordlander, M. Effects of neuropeptide y2 receptor blockade on ventricular arrhythmias in rats with acute myocardial infarction. Eur. J. Pharmacol. 565, 138-143 (2007).
- Ahn, D., Cheng, L., Moon, C., Spurgeon, H., Lakatta, E. G., Talan, M. I. Induction of myocardial infarcts of a predictable size and location by branch pattern probability-assisted coronary ligation in c57bl/6 mice. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 286, 1201-1207 (2004).
- Lindbom, M., Ramunddal, T., Camejo, G., Waagstein, F., Omerovic, E. In vivo effects of myocardial creatine depletion on left ventricular function morphology and lipid metabolism: Study in a mouse model. J. Card Fail. 14, 161-166 (2008).
- Omerovic, E., Bollano, E., Basetti, M., Kujacic, V., Waagstein, L., Hjalmarson, A., Waagstein, F., Soussi, B. Bioenergetic, functional and morphological consequences of postinfarct cardiac remodeling in the rat. J. Mol. Cell. Cardiol. 31, 1685-1695 (1999).
- Gao, E., Lei, Y. H., Shang, X., Huang, Z. M., Zuo, L., Boucher, M., Fan, Q., Chuprun, J. K., Ma, X. L., Koch, W. J. A novel and efficient model of coronary artery ligation and myocardial infarction in the mouse. Circ. Res. 107, 1445-1453 (2010).
