Summary
La procédure chirurgicale utilisée pour induire un infarctus du myocarde expérimental chez la souris commence par thoracotomie gauche, entre le troisième et le quatrièmes nervures afin de visualiser la surface antérieure du cœur et le poumon gauche. L'artère coronaire gauche est ligaturée, la poitrine est fermée et la souris est autorisé à se rétablir spontanément.
Abstract
L'infarctus du myocarde (IM) est l'une des plus importantes causes de mortalité chez l'homme 1-3. Afin d'améliorer la morbidité et de la mortalité chez les patients atteints d'IM nous avons besoin de meilleures connaissances sur la physiopathologie de l'ischémie myocardique. Cette connaissance peut être utile de définir de nouvelles cibles thérapeutiques innovantes pour le traitement des maladies cardiovasculaires 4. MI modèle expérimental chez la souris est de plus en plus populaire petit modèle animal dans la recherche préclinique dans laquelle MI est induite par ligature permanente ou temporaire de l'artère coronaire gauche (LCA) 5. Dans cette vidéo, nous décrivons la méthode étape par étape de la façon d'induire MI expérimentale chez la souris.
L'animal est d'abord anesthésiés avec 2% d'isoflurane. La souris inconscient est ensuite intubé et relié à un ventilateur pour la ventilation artificielle. La gauche de la poitrine est rasée et 1,5 cm le long de l'incision ligne mi-axillaire est faite dans la peau. Le muscle grand pectoral gauche est carrément dissociated jusqu'à ce que les nervures sont exposés. Les couches musculaires sont pris à part et fixées avec une paupière de l'enrouleur. Après ces préparatifs, thoracotomie gauche est effectuée entre les troisième et quatrième côtes afin de visualiser la surface antérieure du cœur et le poumon gauche. Le segment proximal de l'artère LCA est ensuite ligaturé avec un fil de suture 7-0 Ethilon qui induit généralement une taille de l'infarctus ~ 40% de ventricule gauche. A la fin, la poitrine est fermée et les animaux reçoivent une analgésie postopératoire (Temgésic, 0,3 mg/50 ml, ip). Les animaux sont maintenus dans une cage chaud jusqu'à ce que la guérison spontanée.
Protocol
1. Texte du Protocole
- Avant de procéder à la chirurgie, anesthésie d'une souris mâle (C57BL / 6), qui est de 6 semaines d'âge ou plus par inhalation de 2-5% d'isoflurane. Effectuer un pincement de l'orteil pour confirmer que l'animal est suffisamment anesthésié.
- La souris inconscient est placé sur le dos sur un tapis chaud pour maintenir une température constante de 37 ° C. La poitrine précordiale sur le côté gauche est rasée.
- Fixer la souris sur un dispositif d'intubation avec une chambre remplie d'isoflurane. Insérez un tube de 0,2 de diamètre intérieur dans la trachée de la souris par la bouche, puis placez la souris intubé sur une zone aseptique chirurgicale (37 ° C par un contrôleur de température) et connecter le tube endotrachéal à un ventilateur (taux de 120 par minute, la pression de 6.4 mm H 2 O); désinfecter la zone avec de la bétadine et de l'éthanol à 75%.
- Appliquer une pommade ophtalmique pour les yeux de la souris. Placer les électrodes ECG standards sur les pattes et branchez la souris à l'enregistreur ECG. Utilisez des ciseaux stériles de faire une incision de 1,5 cm le long de la ligne médio-axillaire. Les ciseaux sont utilisés plutôt que comme un scalpel pour éviter de blesser le tissu sous-jacent chez la souris. Ensuite, utilisez des ciseaux à pointe émoussée navires à disséquer et à rétracter le muscle précordiale de la paroi thoracique.
- Effectuer une thoracotomie gauche entre les troisième et quatrième côtes de visualiser la surface antérieure du cœur et le poumon gauche
- Rétracter en outre la paroi thoracique à l'aide d'un écarteur adapté afin d'améliorer la visualisation et l'accessibilité. Retirez le péricarde à l'aide de pince à griffes et atraumatiques, ciseaux.
- Ligaturer l'artère coronaire gauche en plaçant l'aiguille (joint avec 7-0 suture Ethilon) en dessous de l'artère avec une bande de myocarde entre la ligature et l'artère. Une occlusion coronaire de succès est vérifiée par hypokinésie / akinésie de la paroi antérieure du ventricule gauche et par les altérations de l'enregistrement ECG (par exemple élévation du segment ST, QRS broadening)
- Fermer la poitrine en plaçant deux points de suture (6-0 Ethilon) sur les troisième et quatrième côtes.
- Utilisez 5-0 suture Ethilon pour refermer la peau.
- Pour l'analgésie postopératoire, administrer une injection intrapéritonéale unique de la buprénorphine (0,05 mg / kg). Les animaux guérissent spontanément dans les 2-5 min après l'arrêt anesthésie à l'isoflurane. Enfin, placez la souris dans une cage au chaud et de fournir 0,6 mg / ml de buprénorphine dans l'eau potable (superposition de texte: 0,6 mg / ml dans l'eau potable) pour prévenir la détresse post-opératoire. Suivre de près la souris pendant les 24 premières heures après la chirurgie.
- L'échocardiographie est réalisée afin d'évaluer la fonction cardiaque 3 jours après l'infarctus du myocarde. Procédure de succès est vérifiée par une akinésie de la paroi antérieure du ventricule gauche (voir la vidéo ci-jointe dans les résultats). A la fin de l'expérience, le cœur va être collectées et stockées dans -80 ° C pour des examens complémentaires. L'expression génique soit.
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Representative Results
| Instrument | Description de la fonction |
| Blunt-tip ciseaux | Utilisé pour couper la peau, muscle de la poitrine intercostal, et les sutures |
| Enrouleur yeux | Utilisée pour exposer vue chirurgical |
| Blunt-tip pince | Utilisé pour saisir la peau et le muscle |
| Porte-aiguille | Pour tenir une aiguille |
| 5-0 suture | Utilisé pour suturer la peau |
| 6-0 suture | Utilisé pour suturer muscle de la poitrine |
| 7-0 suture | Utilisé pour ligaturer l'artère coronaire |
Instruments Tableau 1. Utilisés dans la procédure d'infarctus du myocarde.
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Figure A. Avant ligature de l'artère coronaire, l'oreillette gauche, le poumon gauche et paroi antérieure du ventricule gauche ont été exposés. Les complexes QRS de l'ECG présentés étaient étroites et courtes.
Figure B. Après ligature de l'artère coronaire, la paroi antérieure du ventricule gauche développé une cyanose et diskinesia. Les complexes QRS est devenu beaucoup plus larges et les segments ST étaient évidemment élevé, par rapport à ceux d'avant ligature de l'artère coronaire.
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Discussion
La procédure chirurgicale pour l'ACV ligature comme l'a démontré dans le présent rapport est une méthode fiable et reproductible pour l'induction de l'IM expérimentale chez la souris 3, 6. La ligature de l'ACV selon ce protocole induit une ischémie myocardique engageant typiquement ~ 40% du ventricule gauche 3. Cela induit d'importantes modifications de l'ECG dans le segment ST 7 et la pâleur visible sur la face antérieure du cœur. En raison de l'infarctus du myocarde grande, le taux de mortalité peut atteindre 30% 8, 9. Une note doit être faite que la mortalité infarctus du myocarde région et post-IM peut être différente entre les souches d'animaux divers. La méthode a plusieurs avantages. Placement d'incision de la peau le long ligne mi-axillaire plutôt que sur la paroi thoracique antérieure facilite l'enquête plus tard à l'échocardiographie. Les points de suture dans la plaie opératoire ne pas interférer avec l'imagerie ultrasonore des segments antérieurs du cœur. En outre, l'intubation des souris permet à l'opérateur deavoir suffisamment de temps pour effectuer la chirurgie. La ligature du LCA "in situ" à l'intérieur de la poitrine est plus «physiologique», par opposition à la ligature de l'ACV après l'externalisation de la car cela va induire une bradycardie sévère et une hypoxie globale 10. Cette approche est également titulaire d'avantages par rapport à l'approche basée sur cryoinjury que celle-ci est associée à des processus physiopathologiques distinctes de celles de l'ischémie induite par l'infarctus du myocarde qui pourrait fausser les études mécanistiques de cardiomyopathie ischémique. Nous croyons que cette vidéo et les instructions qui l'accompagnent seront de complément utile aux techniques existantes pour MI expérimentale chez la souris.
Dépannage:
- Pour obtenir la meilleure visualisation des structures anatomiques importantes (oreillette gauche, la paroi ventriculaire gauche antérieure, et le poumon gauche), la thoracotomie gauche est généralement effectuée entre la troisième et la quatrième côte.
- Soyez conscient du fait que la perforation accidentelle de la gauche atrles résultats de l'IUM de saignements graves qui peuvent entraîner la mort de l'animal.
- Contusion pulmonaire doit être évitée car elle peut provoquer une mortalité accrue. Si poumon gauche recouvre le coeur après l'ouverture de la poitrine, le tissu pulmonaire doit être rétractée en douceur à l'aide par exemple du coton-adhésive.
- Une forte concentration d'isoflurane doit être évitée. Typiquement 2% d'isoflurane est optimale pour la réalisation de l'anesthésie adéquate dans la chirurgie actuelle.
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Disclosures
Aucun conflit d'intérêt déclaré.
References
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