Summary
Хирургическая процедура используется, чтобы вызвать экспериментального инфаркта миокарда у мышей начинается с левой торакотомии между третьим и четвертым ребрами для визуализации передней поверхности сердца и левого легкого. Левой коронарной артерии лигируют, грудь закрыта, а мышь имеет право восстановить спонтанно.
Abstract
Инфаркт миокарда (ИМ) является одной из наиболее важных причин смертности в организме человека 1-3. В целях повышения заболеваемости и смертности у пациентов с ИМ нам нужны лучшие знания о патофизиологии ишемии миокарда. Это знание может быть полезным для определения новых терапевтических мишеней для лечения сердечно-сосудистых инновационных 4. Экспериментальная модель MI у мышей становится все более популярным малого модели животных в доклинических исследованиях, в которых MI индуцируется с помощью постоянной или временной перевязкой левой коронарной артерии (ЛКА) 5. В этом видео мы опишем шаг за шагом метод, как вызвать экспериментальный MI у мышей.
Животное первый наркоз с 2% изофлурана. Бессознательном мыши, затем интубированных и подключен к аппарату искусственной вентиляции легких для искусственной вентиляции легких. Левая грудь побрился и 1,5 см разрез по середине подмышечной линии выполнен в коже. Левый большой грудной мышцы прямо dissociated до ребра подвергаются. Мышечные слои тянут в сторону и фиксируют веко-втягивающим. После этих приготовлений, левой торакотомии выполняется между третьим и четвертым ребрами для визуализации передней поверхности сердца и левого легкого. Проксимального отдела артерии ДМС затем лигировали с 7-0 ethilon шов, который обычно вызывает инфаркт размером ~ 40% левого желудочка. В конце концов, грудь закрыта и животные получают послеоперационного обезболивания (Temgesic, 0,3 mg/50 мл, IP). Животные находятся в теплых клетке, пока спонтанное выздоровление.
Protocol
1. Текст протокола
- Прежде чем приступить к операции, анестезию самца мыши (C57BL / 6), что составляет 6 недель и старше при вдыхании 2-5% изофлурана. Выполните ноги щепотку, чтобы подтвердить, что животное достаточно наркозом.
- Бессознательном мыши помещается на спине на теплом площадку для поддержания постоянной температуры 37 ° C. Грудных груди с левой стороны побрился.
- Закрепить мыши, чтобы интубации устройство с изофлуран заполненные камеры. Вставьте трубку в 0,2 внутреннего диаметра в трахею мыши через рот, затем поместите интубированных мыши на асептическую хирургической области (37 ° С регулятором температуры) и подключить эндотрахеальной трубки, чтобы вентилятор (скорость 120 в мин, давление 4-6 MMH 2 O); дезинфекции области с бетадин и 75% этанола.
- Применение глазной мази для глаз мыши. Место стандартных ЭКГ-электродов на лапах и подключить мышь к записи ЭКГ. Используйте стерильные ножницы, чтобы сделать 1,5 см разрез по средней подмышечной линии. Ножницы используются, а не скальпелем, чтобы избежать повреждения подлежащих тканей у мышей. Затем, с помощью тупого кончика ножниц судна, чтобы анализировать и отказаться от грудных мышц от стенки грудной клетки.
- Выполните левой торакотомии между третьим и четвертым ребрами для визуализации передней поверхности сердца и левого легкого
- Далее убрать грудной стенки с использованием подходящего втягивающего в целях улучшения визуализации и доступность. Удалить перикарда с помощью зубчатого щипцы и тупым наконечником ножницы.
- Лигируют левой коронарной артерии, поставив иглу (с приложением 7-0 шва ethilon) под артерией с группой миокарда между лигатурой и артерии. Успешное окклюзии коронарной артерии проверяется гипокинезия / акинезия из передней стенки левого желудочка и изменений ЭКГ (например, с подъемом сегмента ST, QRS broadeniнг)
- Закройте груди, поставив два стежка (6-0 ethilon шва) на третьем и четвертом ребрах.
- Используйте 5-0 ethilon шов, чтобы закрыть кожи.
- Для послеоперационного обезболивания, администрирование однократного внутрибрюшинного введения бупренорфина (0,05 мг / кг). Животные спонтанно выздоравливают в течение 2-5 мин после остановки изофлуран анестезии. Наконец, поместите курсор в теплую клетку и обеспечивает 0,6 мг / мл бупренорфина в питьевой воде (наложение текста: 0,6 мг / мл в питьевой воде), чтобы предотвратить послеоперационные бедствия. Внимательно следить за мышь в течение первых 24 часов после операции.
- Эхокардиография проводится для оценки функции сердца через 3 дня после инфаркта миокарда. Успешная процедура проверяется акинезия в передней стенки левого желудочка (см. прилагаемую видео в результаты). В конце эксперимента, в центре будут собираться и храниться в-80oC для дальнейших исследований. Т.е. экспрессии генов.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
| Инструмент | Описание функций |
| Blunt наконечником ножницы | Используется для резки кожи, межреберных мышц груди, и швы |
| Глаз втягивающего | Используется для подвергать хирургическому зрения |
| Blunt наконечником щипцы | Подержанные понять кожи и мышц |
| Иглодержатель | Для удержания иглы |
| 5-0 шва | Используется для ушивания кожи |
| 6-0 шва | Используется для сшивать мышцы груди |
| 7-0 шва | Используется для лигирования коронарной артерии |
Таблица 1. Инструменты, используемые в процедуре инфаркта миокарда.
/ Ftp_upload/3093/3093figA.jpg "/>
Рисунок A. Перед перевязкой коронарной артерии, левого предсердия, левого легкого и передней стенки левого желудочка подвергались. QRS комплексов показаны на ЭКГ были узкие и короткие.
Рисунок B. После перевязки коронарной артерии, передней стенки левого желудочка разработана цианоз и дискинезия. QRS комплексов стали значительно шире и ST сегмента, очевидно, повышенным, по сравнению с теми, перед перевязкой коронарной артерии.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Хирургические процедуры ДМС перевязки, как показано в настоящем докладе является надежным и воспроизводимым методом индукции экспериментального инфаркта миокарда у 3 мышей, 6. Перевязка ДМС в соответствии с этим протоколом вызывает ишемию миокарда привлечения обычно ~ 40% левого желудочка 3. Это вызывает значительные изменения на ЭКГ в ST сегмента 7 и видимой бледности на передней поверхности сердца. В связи с большим инфаркт миокарда, смертность может составлять до 30% 8, 9. Следует отметить, что инфаркт миокарда смертность области и после ИМ может быть различным у разных штаммов животного. Этот метод имеет несколько преимуществ. Размещение разрез кожи по средней подмышечной линии, а не на передней стенке грудной клетки способствует более поздние исследования с эхокардиографии. Швами в операционной ране не мешает ультразвуковое исследование передних сегментов сердца. Кроме того, интубация мышей позволяет операторуиметь достаточное время для выполнения операции. Перевязка ДМС "на месте" внутри грудной клетки является более "физиологический" в отличие от перевязки ДМС после экстернализации, так как это будет стимулировать тяжелой брадикардии и глобальных гипоксии 10. Этот подход также имеет преимущества по сравнению с cryoinjury подход как последняя связана с патофизиологические процессы отличаются от вызванного ишемией миокарда, который может посрамить механистические исследования ишемической кардиомиопатией. Мы считаем, что это видео и прилагаемой инструкции будет полезным дополнением к существующим методам экспериментального инфаркта миокарда у мышей.
Устранение неисправностей:
- Чтобы получить лучшее визуализации важных анатомических структур (левое предсердие, левый передней стенки желудочка и левого легкого), левый торакотомии как правило, осуществляется между третьим и четвертым ребром.
- Помните, что случайный прокол левого ATRНМУ результатов в сильное кровотечение, которое может привести к смерти животного.
- Легкие контузии следует избегать, поскольку это может привести к увеличению смертности. Если левое легкое покрытие сердце после открытия грудной клетки, ткани легкого должна быть втянута осторожно, используя, например, хлопка-палки.
- Высокие концентрации изофлурана следует избегать. Как правило 2% изофлурана является оптимальным для достижения надлежащей анестезии в настоящее хирургии.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Нет конфликта интересов объявлены.
References
- Tabrizchi, R. Beta-blocker therapy after acute myocardial infarction. Expert Rev. Cardiovasc. Ther. 11, 293-296 (2013).
- Pell, S., Fayerweather, W. E. Trends in the incidence of myocardial infarction and in associated mortality and morbidity in a large employed population, 1957-1983. N. Engl. J. Med. 312, 1005-1011 (1985).
- Ramunddal, T., Gizurarson, S., Lorentzon, M., Omerovic, E. Antiarrhythmic effects of growth hormone--in vivo evidence from small-animal models of acute myocardial infarction and invasive electrophysiology. J. Electrocardiol. 41, 144-151 (2008).
- Thom, T., Haase, N., Rosamond, W., Howard, V. J., Rumsfeld, J., Manolio, T., Zheng, Z. J., Flegal, K., O'Donnell, C., Kittner, S., et al. Heart disease and stroke statistics--2006 update: A report from the american heart association statistics committee and stroke statistics subcommittee. Circulation. 113, 85-151 (2006).
- van den Bos, E. J., Mees, B. M., de Waard, M. C., de Crom, R., Duncker, D. J. A novel model of cryoinjury-induced myocardial infarction in the mouse: A comparison with coronary artery ligation. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 289, 1291-1300 (2005).
- Omerovic, E., Ramunddal, T., Lorentzon, M., Nordlander, M. Effects of neuropeptide y2 receptor blockade on ventricular arrhythmias in rats with acute myocardial infarction. Eur. J. Pharmacol. 565, 138-143 (2007).
- Ahn, D., Cheng, L., Moon, C., Spurgeon, H., Lakatta, E. G., Talan, M. I. Induction of myocardial infarcts of a predictable size and location by branch pattern probability-assisted coronary ligation in c57bl/6 mice. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 286, 1201-1207 (2004).
- Lindbom, M., Ramunddal, T., Camejo, G., Waagstein, F., Omerovic, E. In vivo effects of myocardial creatine depletion on left ventricular function morphology and lipid metabolism: Study in a mouse model. J. Card Fail. 14, 161-166 (2008).
- Omerovic, E., Bollano, E., Basetti, M., Kujacic, V., Waagstein, L., Hjalmarson, A., Waagstein, F., Soussi, B. Bioenergetic, functional and morphological consequences of postinfarct cardiac remodeling in the rat. J. Mol. Cell. Cardiol. 31, 1685-1695 (1999).
- Gao, E., Lei, Y. H., Shang, X., Huang, Z. M., Zuo, L., Boucher, M., Fan, Q., Chuprun, J. K., Ma, X. L., Koch, W. J. A novel and efficient model of coronary artery ligation and myocardial infarction in the mouse. Circ. Res. 107, 1445-1453 (2010).
