Summary
Intravitreale injectie is een veel gebruikte techniek in de visuele wetenschappen voor oculaire ziekten of als directe toepassing van lokale behandeling. Deze video toonde een protocol voor intravitreale injectie met een 1 ml injectiespuit met glazen pipet. Handige tips over het vermijden van grote bloeden en de lens beschadigd worden gegeven.
Abstract
Intravitreale injectie is een veel gebruikte techniek in de beeldende sciences onderzoek. Het kan gebruikt worden om diermodellen te leggen met oculaire ziekten of als directe toepassing van lokale behandeling. Deze video introduceert hoe u eenvoudige en goedkope instrumenten te gebruiken om de intravitreale injectie procedure te beëindigen. Het gebruik van een 1 ml spuit, in plaats van een hemilton spuit, wordt gebruikt. Praktische tips voor hoe de juiste injectienaalden met glazen pipetten met een perfecte tips, en hoe de naald gemakkelijk verbinden met de glazen pipet dicht op elkaar te maken, worden gegeven.
Voor het uitvoeren van een goede intravitreale injectie, zijn er drie aspecten in acht worden genomen: 1) de plaats van injectie dient niet te verstoren netvlies structuur; 2) bloeden moet worden vermeden om het risico op infectie te verkleinen; 3) lens moet worden ongemoeid te traumatisch cataract te voorkomen. In het kort, het belangrijkste punt is het verminderen van de onderbreking van de normale oculaire structuur. Om te voorkomen dat onderbreking van het netvlies, was de superieure nasale regio rat oog gekozen. Ook de punctie punt van de naald was op de par vlakke, die ongeveer 1,5 mm was van de limbale regio van de rat oog. Een kleine hoeveelheid van het glasachtig lichaam wordt zachtjes geduwd uit door het lek gat om de intraoculaire druk voor injectie te verminderen. Met de 45 ° hoek van injectie, is het minder waarschijnlijk traumatisch cataract veroorzaken in de rat ogen, zo te voorkomen gerelateerde complicaties en de invloed van lenticulaire factoren. In deze operatie, was er geen snijden van het bindvlies en oculaire spieren, geen bloeden. Met een snelle en kleine verwonding, kan een succesvolle intravitreale injectie gedaan worden in minuten.
De injectie set die in dit bijzonder protocol is specifiek voor intravitreale injectie. Echter, de methoden en materialen hier gepresenteerde ook gebruikt worden voor andere injectie procedures in drug delivery naar de hersenen, ruggenmerg of andere organen in kleine zoogdieren.
Protocol
- Bereid de glazen pipetten met pipetten trekker, sluit het aan op een 1ml spuit, en sluit de verbinding met parafilm. Te trekken 2 ml van oplossing in de punt van de pipetten en maak je klaar voor injectie.
- Verdoof de rat door intraperitoneale injectie van ketamine (80mg/kg) en xylazine (8mg/kg) (volume ratio 2:1).
- Breng een druppel van de 0,5% alcaine aan de rat ogen als actueel anesthetica voor intravitreale injectie.
- Plaats de rat en bloot de superieure neus regio van het oog.
- Gebruik een 30 gauge naald te prikken de superieure neus sclera op het niveau van de par plana. Vermijd het aanraken van de oculaire spieren en schepen.
- Geef de oogbol milde druk om zich te ontdoen van een kleine hoeveelheid van het glasvocht krijgen via het lek gat van de achterste kamer.
- Steek de punt van de glazen pipet door de punctie gat op een hoek van 45 ° door de sclera in het glasachtig lichaam. Injecteer 2 ml van oplossing in de achterste kamer en zijn plaats te houden gedurende een paar seconden en verwijder voorzichtig de naald. Vermijd het aanraken van de lens en de intra-oculaire schepen.
- Na intravitreale injectie toe te passen oogheelkundige Tobrex zalf op de rat oog om infectie te voorkomen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Goede intravitreale injectie is nuttig voor het vaststellen van diermodel evenals directe intraoculaire behandeling. Ten eerste moet de plaats van injectie niet verstoren netvlies structuur. Ten tweede, bloeden moet worden vermeden om het risico op infectie te verkleinen. Ten derde, de lens moet worden ongemoeid te traumatisch cataract te voorkomen. Het belangrijkste is het verminderen van de onderbreking van de normale oculaire structuur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De dieren werden behandeld volgens het protocol voor het gebruik van dierlijke in het onderzoek goedgekeurd door het Comite voor het gebruik van levende dieren in Onderwijs en Onderzoek (CULATR) van de Universiteit van Hong Kong en de Association for Research in Vision en Oogheelkunde Verklaringen voor de gebruik van dieren in Ophthalmic en Vision Research.
Acknowledgments
De studie van glaucoom in dit laboratorium wordt ondersteund door de Nationale Glaucoom Research van de Amerikaanse Health Assistant Foundation.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Operating Microscope | Olympus Corporation | OME | |
| Glass Pipettes | World Precision Instruments, Inc. | ||
| Pipette Puller | David Kopf Instruments | ||
| 1ml syringes | single use | ||
| 30G needles | single use | ||
| Ketamine | Aldasan | anesthetic | |
| Xylazine | Aldasan | anesthetic | |
| Alcaine | Alcon | 0.5% proparacaine hydrochloride | |
| Tobrex | Alcon | ointment, 3% tobramyxin. |
References
- Chiu, K., Lam, T. T., Ying Ku, W. W., Caprioli, J., Kwong Kwong, J. M. Calpain and N-methyl-d-aspartate (NMDA)-induced excitotoxicity in rat retinas. Brain Research. 1046, 207-215 (2005).
- Fisher, D., Pavlidis, M., Thanos, S. Cataractogenic lens injury prevents traumatic ganglion cell death and promotes axonal regeneration both in vivo and in culture. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 41, 3943-3954 (2000).
- Ji, J. -Z., Elyaman, W., Yip, H. K., Lee, V. W. H., Yick, L. -W., Hugon, J., So, K. -F. CNTF promotes survival of retinal ganglion cells after induction of ocular hypertension in rats: the possible involvement of STAT3 pathway. European Journal of Neuroscience. 19, 265-272 (2004).
- Lam, T. T., Abler, A. S., Kwong, J. M. K., Tso, M. O. M. N-Methyl-D-Aspartate (NMDA)-Induced Apoptosis in Rat Retina. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 40, 2391-2397 (1999).
