Summary
הזרקת Intravitreous היא טכניקה בשימוש נרחב במחקר מדעי חזותיים מחלות עיניים או כיישום ישירה של טיפול מקומי. סרט הווידאו הזה הוכיח פרוטוקול להזרקה intravitreous שימוש במזרק 1ml עם כוס פיפטה. טיפים שימושיים לגבי מניעת דימום מסיבי נזק העדשה מקבלים.
Abstract
הזרקת Intravitreous היא טכניקה בשימוש נרחב במחקר במדעי הראייה. זה יכול לשמש כדי ליצור מודלים של בעלי חיים עם מחלות עיניים או כיישום ישירה של טיפול מקומי. וידאו זה מציג כיצד להשתמש בכלים פשוט וזול כדי לסיים את ההליך הזרקת intravitreous. השימוש מזרק 1 מ"ל, במקום מזרק hemilton, משמש. עצות מעשיות כיצד להפוך את המחטים המתאימות באמצעות הזרקה pipettes זכוכית עם טיפים מושלם, וכיצד להתחבר בקלות את מחט המזרק עם פיפטה את הכוס בחוזקה יחד, מקבלים.
כדי לבצע הזרקה intravitreous טוב, ישנם שלושה היבטים כדי לצפות: 1) באתר ההזרקה לא צריך לשבש מבנה הרשתית; 2) דימום יש להימנע כדי להפחית את הסיכון לזיהום: 3) העדשה צריכה להיות ללא מגע, כדי למנוע קטרקט טראומטי. בקיצור, הנקודה החשובה ביותר היא לצמצם את הפרעה של מבנה העין נורמלי. כדי למנוע הפרעה של הרשתית, באזור האף מעולה של העין עכברוש נבחר. כמו כן, נקודת לנקב של המחט היה ב מישוריים נקוב, אשר היה כ -1.5 מ"מ מהאזור limbal העין חולדה. כמות קטנה של הזגוגית היא דחפה בעדינות החוצה דרך החור לנקב כדי להפחית את הלחץ התוך עיני לפני הזריקה. עם זריקה בזווית של 45 מעלות, זה פחות סביר לגרום קטרקט טראומטי בעין חולדה, וכך למנוע סיבוכים הקשורים השפעה מגורמים lenticular. במבצע הזה, לא היה חיתוך של השריר ואת לחמית העין, ללא דימום. עם פגיעה מהירה קטין, בזריקה intravitreous מוצלח יכול להיעשות בתוך דקות.
הזרקת להגדיר המפורטים בפרוטוקול המסוים הזה ספציפית להזרקה intravitreous. למרות זאת, שיטות וחומרים המוצגים כאן יכולים לשמש גם עבור תהליכי הזרקה אחרים משלוח סמים על המוח, חוט השדרה או לאיברים אחרים ויונקים קטנים.
Protocol
- הכן את pipettes זכוכית באמצעות חולץ pipettes, לחבר אותו מזרק 1ml, וסוגרים את הקשר עם parafilm. משיכה 2 מ"ל של תמיסת אל קצה pipettes ולהתכונן ההזרקה.
- לטשטש את העכברוש בזריקה תוך הצפק של קטמין (80mg/kg) ו xylazine (8mg/kg) (יחס נפח ב 02:01).
- החל טיפה אחת של alcaine 0.5% לעיניים עכברוש כמו הרדמה מקומית לפני הזריקה intravitreous.
- מקם את החולדה ולחשוף את אזור האף מעולה של העין.
- השתמש מחט מד 30 לנקב את האף מעולה sclera ברמה של פלאנה נקוב. הימנעו מלגעת שריר העין וכלי.
- תן את הכדור עין בלחץ מתון להיפטר כמות קטנה של הזגוגית דרך החור לנקב מן החדר האחורי.
- הכנס את קצה פיפטה זכוכית דרך החור לנקב על 45 ° זווית באמצעות בלובן העין לתוך הגוף הזגוגי. להזריק 2 מ"ל של תמיסת לתא האחורי ולשמור במקום במשך כמה שניות, ואז להסיר בעדינות את המחט. הימנע מנגיעה את העדשה התוך עיני וכלי.
- לאחר הזרקת intravitreous, להחיל משחה Tobrex עיניים על העין חולדה כדי למנוע זיהום.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
הזרקת intravitreous טוב שימושי להקמת מודל החיה, כמו גם טיפול תוך עיני ישיר. ראשית, באתר ההזרקה לא צריך לשבש מבנה הרשתית. דימום שנית, יש להימנע כדי להפחית את הסיכון לזיהום. עדשה שלישית, צריך להיות ללא שינוי, כדי למנוע קטרקט טראומטי. החשוב ביותר הוא להפחית את הפרעה של מבנה העין נורמלי.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
החיות טופלו לפי פרוטוקול לשימוש בבעלי חיים במחקר שאושר על ידי הוועדה על השימוש בבעלי חיים בהוראה ומחקר (CULATR) של אוניברסיטת הונג קונג האגודה לחקר הצהרות חזון עיניים עבור השימוש בבעלי חיים עיניים ומחקר החזון.
Acknowledgments
המחקר של גלאוקומה במעבדה זו נתמכת על ידי מחקר מטעם הקרן הלאומית גלאוקומה עוזר הבריאות האמריקאי.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Operating Microscope | Olympus Corporation | OME | |
| Glass Pipettes | World Precision Instruments, Inc. | ||
| Pipette Puller | David Kopf Instruments | ||
| 1ml syringes | single use | ||
| 30G needles | single use | ||
| Ketamine | Aldasan | anesthetic | |
| Xylazine | Aldasan | anesthetic | |
| Alcaine | Alcon | 0.5% proparacaine hydrochloride | |
| Tobrex | Alcon | ointment, 3% tobramyxin. |
References
- Chiu, K., Lam, T. T., Ying Ku, W. W., Caprioli, J., Kwong Kwong, J. M. Calpain and N-methyl-d-aspartate (NMDA)-induced excitotoxicity in rat retinas. Brain Research. 1046, 207-215 (2005).
- Fisher, D., Pavlidis, M., Thanos, S. Cataractogenic lens injury prevents traumatic ganglion cell death and promotes axonal regeneration both in vivo and in culture. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 41, 3943-3954 (2000).
- Ji, J. -Z., Elyaman, W., Yip, H. K., Lee, V. W. H., Yick, L. -W., Hugon, J., So, K. -F. CNTF promotes survival of retinal ganglion cells after induction of ocular hypertension in rats: the possible involvement of STAT3 pathway. European Journal of Neuroscience. 19, 265-272 (2004).
- Lam, T. T., Abler, A. S., Kwong, J. M. K., Tso, M. O. M. N-Methyl-D-Aspartate (NMDA)-Induced Apoptosis in Rat Retina. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 40, 2391-2397 (1999).
