Summary
Injeção intravítrea é uma técnica amplamente utilizada na pesquisa em ciências visuais para doenças oculares ou como a aplicação direta do tratamento local. Este vídeo demonstra um protocolo para a injeção intravítrea usando uma seringa de 1ml com vidro pipeta. Dicas úteis sobre como evitar sangramento maciço e danos lentes são dadas.
Abstract
Injeção intravítrea é uma técnica amplamente utilizada na pesquisa em ciências visuais. Ele pode ser usado para estabelecer modelos animais com doenças oculares ou como a aplicação direta do tratamento local. Este vídeo apresenta como usar ferramentas simples e baratas para terminar o procedimento de injeção intravítrea. Uso de uma seringa de 1 ml, em vez de uma seringa hemilton, é usado. Dicas práticas de como fazer agulhas de injeção apropriada usando pipetas de vidro com pontas perfeitas, e como facilmente se conectar a agulha da seringa com a pipeta de vidro bem juntos, são dadas.
Para realizar uma boa injeção intravítrea, há três aspectos a serem observados: 1) no local da injecção não deve atrapalhar estrutura retina; 2) sangramento devem ser evitados para reduzir o risco de infecção; 3) lente deve ser intocável para evitar a catarata traumática. Em resumo, o ponto mais importante é reduzir a interrupção da estrutura ocular normal. Para evitar a interrupção da retina, a região nasal superior do olho de rato foi escolhido. Além disso, o ponto de punção da agulha estava no planar par, que foi cerca de 1,5 mm do limbo na região do olho de rato. Uma pequena quantidade de vítreo é delicadamente empurrado para fora através do orifício da punção para reduzir a pressão intra-ocular antes da injeção. Com o ângulo de injeção de 45 °, é menos provável de causar catarata traumática no olho do rato, evitando assim complicações relacionadas e influência de fatores lenticular. Nesta operação, não houve corte do músculo conjuntiva ocular e, sem sangramento. Com lesão rápido e menor, uma injeção intravítrea de sucesso pode ser feito em minutos.
A injeção set descritas neste protocolo específico é específico para injeção intravítrea. No entanto, os métodos e materiais aqui apresentados também podem ser usados para outros procedimentos de injecção na entrega da droga para o cérebro, medula espinhal ou em outros órgãos pequenos mamíferos.
Protocol
- Prepare as pipetas de vidro usando extrator pipetas, conectá-lo a uma seringa de 1ml, e selar a conexão com parafilme. Retirar 2 ml de solução na ponta das pipetas e prepare-se para a injecção.
- Anestesiar o rato por injeção intra-peritoneal de cetamina (80mg/kg) e xilazina (8mg/kg) (relação de volume de 2:1).
- Aplique uma gota de Alcaine 0,5% para os olhos de ratos como anestésicos tópicos antes da injeção intravítrea.
- Posicione o rato e expor a região nasal superior do olho.
- Use uma agulha de calibre 30 para perfurar a esclera nasal superior ao nível do par plana. Evite tocar o músculo ocular e vasos.
- Dê a pressão do globo ocular leve para se livrar de uma pequena quantidade de vítreo através do orifício de punção da câmara posterior.
- Insira a ponta da pipeta de vidro através do orifício de punção em um ângulo de 45 ° através da esclera no corpo vítreo. Injetar 2 ml de solução para a câmara posterior e manter no local durante cerca de alguns segundos, em seguida, remova cuidadosamente a agulha. Evite tocar na lente e vasos intra-ocular.
- Após a injeção intravítrea, aplique pomada oftálmica Tobrex sobre os olhos de ratos para prevenir a infecção.
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Discussion
Injeção intravítrea bom é útil para estabelecer um modelo animal, bem como o tratamento intra-ocular directa. Primeiro, no local da injecção não deve perturbar a estrutura retina. Sangramento, segundo devem ser evitados para reduzir o risco de infecção. Lente, o terceiro deve ser intocável para evitar a catarata traumática. O mais importante é reduzir a interrupção da estrutura ocular normal.
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Disclosures
Os animais foram tratados de acordo com o protocolo para o uso de animais em pesquisa aprovado pelo Comitê sobre o Uso de Animais Vivos em Ensino e Pesquisa (CULATR) da Universidade de Hong Kong e da Associação para Pesquisa em Visão e Oftalmologia Demonstrações para o uso de animais em oftálmica e Vision Research.
Acknowledgments
O estudo do glaucoma neste laboratório é apoiado pela National Research Glaucoma da Fundação Americana de Saúde Adjunto.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Operating Microscope | Olympus Corporation | OME | |
| Glass Pipettes | World Precision Instruments, Inc. | ||
| Pipette Puller | David Kopf Instruments | ||
| 1ml syringes | single use | ||
| 30G needles | single use | ||
| Ketamine | Aldasan | anesthetic | |
| Xylazine | Aldasan | anesthetic | |
| Alcaine | Alcon | 0.5% proparacaine hydrochloride | |
| Tobrex | Alcon | ointment, 3% tobramyxin. |
References
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