Summary
På grunn av enkelheten i kirurgi og den robuste atferdsmessige utfall, er kronisk innsnevring av hoftenervene en av de fremste dyremodeller av nevropatisk smerte. Innen 24 timer etter operasjonen, er smerte overfølsomhet etablert og kan kvantitativt måles ved hjelp av en von Frey aesthesiometer (mekanisk test) og plantar analgesi meter (termisk test).
Abstract
Kronisk nevropatisk smerte, som følge av skade på sentrale eller perifere nervesystemet, er en utbredt og ødeleggende tilstanden, rammer 7-18% av befolkningen 1,2. Symptomer inkluderer spontan (prikking, brenning, elektrisk støt og lignende) smerte, dysestesi, parestesi, allodyni (smerte som følge av normalt ikke-smertefulle stimuli) og hyperalgesia (en økt respons til smertefulle stimuli). De sensoriske symptomene er co-sykelig med atferdsvansker, for eksempel søvnløshet og depresjon. Å studere kroniske nevropatiske smerter flere dyremodeller etterligner perifer nerveskade har blitt utviklet, er en av de mest brukte Bennett og Xie (1988) unilateral hoftenervene kronisk innsnevring skade (CCI) 3 (figur 1). Her presenterer vi en metode for å utføre CCI og testing smerte overfølsomhet.
CCI er utført under narkose, med isjiasnerven på den ene siden utsettes ved å gjøre somkin snitt, og skjære gjennom bindevevet mellom gluteus superficialis og biceps femoris muskler. Fire Chromic gut ligaturer er knyttet løst rundt isjiasnerven på 1 mm mellomrom, å bare occlude men ikke arrestere epineural blod flyte. Såret er lukket med sting i muskel og stifter i huden. Dyret er da lov til å gjenopprette fra kirurgi i 24 timer før smertene overfølsomhet testing begynner.
For atferdsmessige testing, er rotter plassert i testing apparater og får lov til å tilvenne til testprosedyren. Området testet er mid-plantar overflaten av hindpaw (figur 2), som faller innenfor hoftenervene fordeling. Mekanisk tilbaketrekking terskel vurderes ved mekanisk stimulere både skadde og friske hindpaws ved hjelp av en elektronisk dynamisk plantar von Frey aesthesiometer eller manuell von Frey hår fire. Den mekaniske uttak Terskelen er maksimalt press(I gram) som utløser pote tilbaketrekning. For måling av termisk tilbaketrekking ventetid, først beskrevet av Hargreaves et al (1988), er hindpaw utsatt for en stråle av strålevarme gjennom et gjennomsiktig glass overflate ved hjelp av en plantar analgesi meter 5,6. Tilbaketrekkingen latency til varmen stimulans er registrert som tiden for pote uttak i både skadde og friske hindpaws. Etter CCI, mekanisk tilbaketrekning terskel, samt termisk tilbaketrekking latens i den skadde labben er begge betydelig redusert, sammenlignet med baseline målinger og den friske Paw (figur 3). Den CCI modell av perifer nerve skade kombinert med smerter overfølsomhet testing gir en modell for å undersøke effekten av potensielle terapeutiske agenter for å endre kroniske nevropatiske smerter. I vårt laboratorium, bruker vi CCI sammen termisk og mekanisk følsomhet hindpaws å undersøke rollen av nevro-immune interaksjoner i patogenesenog behandling av nevropatisk smerte.
Protocol
1. Hoftenervene Kronisk Sammensnøring
Aseptiske teknikker skal brukes for den kirurgiske prosedyren. Desinfiser kirurgisk arbeidsflaten med 70% etanol og forberede på forhånd sterile instrumenter (f.eks, fine sakser, pinsetter og inntrekking), gauzes, stifter og vattpinner ved autoklavering. For flere operasjoner, rengjøre og resteriliseres instrumenter med 70% etanol eller en tørr perle sterilisatoren mellom rotter. En kirurgisk maske, hår panser og sterile hansker.
For innsnevring av nerve, forberede kromsyre tarmen sutur ved å skjære den opp i små biter på ca 3 cm lengde nedsenket i sterilt saltvann, for å hindre uttørking. For å lukke såret, bruk kommersielt tilgjengelige sterile silke suturer.
- Anaesthetise rotta på en induksjon kammer med 5% isofluran i O 2, deretter levere 2% isofluran i O 2 via en spesiallaget ansiktsmaske, og overvåke bedøvet dyret under prosedyren. Vanlige alternative bedøvelsesmidler er inhalert halotan eller intraperitoneal natrium pentobarbital. Ketamin, som en N-metyl-D-aspartat (NMDA), bør unngås, da disse reseptorene er viktige i utviklingen av nevropatisk smerte.
- Barbere venstre bakbein av rotte. Deretter plasserer dyret på en termo-regulert varme matte ved 37 ° C og gjelder smøring ophthalmic salve til øynene.
- Steriliser barberte området med tre alternative anvendelser av 70% isopropylalkohol og jod løsning.
- Med rotta liggende på brystet / thorax, heve venstre bakbein og hold i stilling med femor ved 90 ° til ryggraden bruke maskeringstape på foten.
- Lag et snitt i huden parallelt, men 3-4 mm under femor, og fri huden fra muskelen rundt snittet ved å skjære gjennom bindevevet.
- Ved hjelp av sløve sakser, skjærer gjennom bindevevet mellom gluteus superficialis og bicepsfemoris muskler.
- Bruk en retractor å utvide gapet mellom de to musklene, slik klar visualisering av hoftenervene.
- Ved hjelp av buede sløv-tipped tang og mikro-saks, forsiktig gratis ca 10 mm på isjiasnerven (proksimalt for sciatic trifurcation) fra omkringliggende bindevev.
- Under mikroskopet og en god lyskilde, binde fire ligaturer (kromsyre gut 4.0, Ethicon, USA) med en dobbel knute, 1 mm fra hverandre, proksimalt for trifurcation av hoftenervene. For hver ligatur, starte med en enkelt løs sløyfe, så ta tak i de to endene nær sløyfen og stram til loopen er bare så vidt tettsittende og ligatur ikke skyve ikke langs nerve. Å holde løkken i sin rette posisjon, plasserer en andre sløyfe på toppen av den første å fullføre knuten. Til slutt kuttet de løse endene av ligatur til rundt 1mm. Innsnevring av nerve bør være minimal, og straks stanset hvis en kort rykk observeres, for å hindre arresterer av the epineural blodstrømmen. Over etterstramming av ligaturer fører til axotomy, og autotomy (self-lemlestelse), begge uønskede bieffekter som utelukker vellykket smerte overfølsomhet testing.
- Bruk suturene (Mersilk 5.0, Ethicon) for å lukke muskel lag og stifter (Autoclip, 9 mm) for å feste huden. Deretter bruker jod-løsning (Riodine) å sterilisere såret.
- Observer rotte tett under anestesi utvinning perioden, og la den komme i en egen bur med flat papir sengetøy (ikke standard husdyrhold sengetøy), for å hindre det ubevisste dyret kveles.
Før gi noen postoperative analgesi etterforskere bør vurdere det faktum dette kan forstyrre smerter overfølsomhet testing. Faktisk, det er dokumentert at lokal anvendelse av bedøvelse, lidokain, på tidspunktet for skade kan endre utviklingen av nevropatisk smerte, og redusere graden av hyperalgesia i de foregående ukene 7. For ytterligere diskusjon om dette matter se gjennomgang av Bennett et al åtte.
2. Målinger av Pain Atferd
- Daglig håndtering av rotter i flere dager før du starter forsøket anbefales for å venne rottene til behandlingsprogram deres, redusere stress og risiko for biting.
- Før atferdsmessige testing, rotter må habituated til testprosedyren og dyret kabinettet. Testomgivelsene bør holdes stille og godt kontrollert, med konstant temperatur og luftfuktighet, og gjennomføres på et tilsvarende tidspunkt hver testøkt.
- Smerter overfølsomhet testing bør utføres flere ganger før CCI (baseline) og ved ulike tidspunkt etter CCI, som ønsket.
3. Mekanisk Tilbaketrekking Threshold
- På dagen for testing, sted rotter inn i forhøyet mesh floored testing bur 15-30 minutter før måling tilbaketrekking terskler, slik at buret leting og GroMing aktiviteter for å slutte og rotter til å bli avslappet og i ro.
- Ved hjelp av en dynamisk plantar von Frey aesthesiometer (Ugo Basile, Italia), plasser touch-stimulator enhet med filament rett under midten plantar overflaten av hindpaw, unngår metall mesh, og trykk på start knappen. Dette løfter filament til mekanisk stimulere plantar overflaten av hindpaw med en økende kraft.
Manuelle von Frey hår er en serie av økende diameter filamenter som er kalibrert for å indusere en bestemt kraft når påføres huden. De kan brukes som et alternativ til en elektronisk dynamisk plantar von Frey aesthesiometer for måling av labben tilbaketrekning terskel, som tidligere beskrevet fire. Det finnes også flere alternative produsenter av elektroniske von Frey aesthesiometers (f.eks IITC, USA og Somedic, Sverige).
- Ta opp mekanisk tilbaketrekning terskelen fra både skadde og friske hindpaws, i en motvektstruck rekkefølge. Denne enheten gjelder press på labben og ved uttak reaksjon systemet automatisk registrerer og viser den maksimale kraften (i gram). Dersom en tvetydig reaksjon skjer (dvs. i tilfelle av bevegelse og eller grooming), gjenta den stimulans og registrere terskelen igjen. Licking eller risting av hindpaw etter stimulering er et tegn på atferd forbundet med smerte.
- Gjenta mekanisk stimulering 3 ganger med et intervall på ca 5 min mellom stimuli, noterer terskler, og deretter beregne gjennomsnittet av labb tilbaketrekning terskler.
4. Termisk Tilbaketrekking Latency
Den infrarøde (IR) varmeintensiteten av plantar test instrument skal justeres før du starter eksperimentet. I vårt laboratorium, justerer vi IR intensitet for å gi en gjennomsnittlig pote tilbaketrekking ventetid på ca 10 sekunder i naive rotter, og vi setter cut-off ventetid på 20 sekunder for å unngå vev demningenalder i tilfelle svikt for å fjerne en pote.
- På dagen for testing, for å plassere rotter i glasset floored testing bur 15-30 minutter før måling latency, slik at buret leting og pleie aktiviteter å opphøre og rotter blir avslappet og i ro.
- Ved hjelp av en termisk plantar analgesi instrument (Ugo Basile, Italia), posisjon den infrarøde kilden direkte under mid-plantar overflate hindpaw, og trykk på start knappen. Dette utsetter plantar overflaten av hindpaw til en stråle av strålevarme gjennom et gjennomsiktig glass overflate. Det finnes også alternative produsenter av termisk plantar analgesi instrumenter (f.eks IITC, USA og Stoelting, USA).
- Noter uttak latency fra både skadde og friske hindpaws, i en motvektstruck rekkefølge. Denne enheten registrerer automatisk tiden tatt (i sekunder) fra utbruddet av den termiske stimulans til tilbaketrekking av labb fra varmekilden. Dersom en tvetydig reaksjon skjer (dvs. i tilfellet ambulasjon eller grooming), gjenta den stimulans og registrere ventetid igjen. Licking eller risting av hindpaw etter stimulering er et tegn på atferd forbundet med smerte.
- Gjenta varmen stimulering minst 3 ganger med et intervall på ca 5 min mellom stimuli, registrere ventetider, og deretter beregne gjennomsnittet av labb tilbaketrekning ventetider.
4. Representative Resultater
Et eksempel på mekanisk tilbaketrekning terskel og termisk tilbaketrekking ventetid i ipsilaterale (skadet) og kontralateral (friske) labber av Wistar rotter er vist før (baseline) og 2-12 dager etter CCI i figur 3A, og Figur 3B. Fra disse tallene kan det ses at CCI fører til en betydelig reduksjon i både mekaniske tilbaketrekning terskler og termiske tilbaketrekning ventetider i ipsilaterale hindpaw, indikerer tilstedeværelse av mekanisk og termisk smerte overfølsomhet, begge funksjonene i kroniske nevropatiske smerter .
Figur 1. En skjematisk illustrerer plasseringen av ligaturer i CCI-modellen. Denne dyremodell av nevropatisk smerte innebærer plassering av fire løse kromsyre-gut ligaturer på isjiasnerven, midt på låret nivå. Det resulterer i skader bare en del av afferenter går til foten og påfølgende smerter overfølsomhet av hindpaw.
Figur 2. Diagram av hindpaw areal brukt til smerte testing. Midten av plantar overflaten bare posterior til footpads, som indikert av den røde prikkete sirkel, brukes til smerte testing. Dette området er innerverte meste av terminal grener av hoftenervene. Hælen og footpads bør unngås på grunn av differensial hud følsomhet.
3.jpg "/>
Figur 3. Pain overfølsomhet etter kronisk innsnevring av isjiasnerven i rotter. Etter CCI, er det en betydelig reduksjon i labben uttak terskelen til mekaniske stimuli (A) og labb tilbaketrekning ventetid til termiske stimuli (B) i den skadelidte (ipsilaterale) hindpaw sammenlignet med friske (kontralaterale) hindpaw (p <0,01 gjentatte tiltak 2 -way ANOVA). Data viser gjennomsnitt ± SEM, n = 7 Wistar rotter.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
CCI er et mye brukt perifer nerveskade modell av kroniske nevropatiske smerter. Det er relativt enkelt å utføre, og produserer robust og stabil smerte overfølsomhet i minst en måned etter skade. Etter CCI, rotter har unormal holdning av de skadde hindpaw (tær holdt sammen og plantar-bøyd og labben øyelokkene snur seg utover), samt gjentatt risting, vokter og slikking av den skadde hindpaw antyder tilstedeværelsen av spontan smerte 9. I tillegg til sensorisk dysfunksjon, har flere etterforskere vist at CCI fremkaller atferdsvansker, for eksempel forstyrret sosial samhandling, søvnforstyrrelser, depresjon-lignende og angst-lignende atferd 10-13, men dette er i kontrast til den manglende finne slike atferdsvansker av andre 14,15. CCI er derfor vanlig å undersøke både patofysiologien, og potensielle terapeutiske agenter for behandling av nevropatiske smerter.
Vi descrIbe ensidig innsnevring av venstre hoftenervene, men det bør bemerkes at mange forskere har utført CCI på høyre hoftenervene, med lignende smerter og atferdsmessige utfall. Noen etterforskere kan finne det lettere å utføre kirurgi på en bestemt side på grunn av handedness har mens andre skiftet side i løpet av eksperimenter for å utelukke eventuelle skjevheter. Det er bemerkelsesverdig at flere varianter til den opprinnelige prosedyren er rapportert inkludert med kun to ligaturer rundt nerve 16,17 og bruke sutur materiale annet enn kromsyre gut som vanlig gut og polyglactin (vicryl) 18,19 i rotter. I tillegg har CCI modellen også blitt modifisert for bruk i mus, der prosedyren er identisk, bortsett fra bruk av 2-3 ligaturer med ulike suturmaterialer inkludert kromsyre gut, nylon, og prolene 15,20,21.
En begrensning av denne modellen er graden av variasjon blant rottene utsatt for CCI, grunnet variability i tetthet av restriksjonar produsert ved å binde knop med sting. Dette kan delvis overvinnes ved å ha en erfaren forsker som utfører operasjonen på en konsistent måte. Videre kan den type sutur materiale som brukes for ligating nerve også bidra til variasjon, og det antas at kjemikalier fra kromsyre gut megle noen av de atferdsmessige og nevrokjemiske effekter observert i denne modellen 19,22. Man bør være spesielt hensyn til valg av rotte kjønn (menn kontra kvinner) 23, alder (ung versus gammel) 24,25, 26 kosthold og belastning 27, noe som i betydelig grad kan påvirke utviklingen av smerte overfølsomhet etter CCI.
Smerter overfølsomhet testing, bruk en elektronisk von Frey aesthesiometer eller manuelle von Frey hår for mekanisk tilbaketrekking terskel og en plantar analgesi (Hargreaves) meter for termisk tilbaketrekking ventetid, er godt etablert og reavgiftspliktige kvantitative målinger av smerte overfølsomhet i små dyr. Deres bruk, i kombinasjon med modeller av nevropatisk smerte, er utbredt og gir mulighet for direkte sammenligninger av pote følsomhet for mekaniske og termiske stimuli på tvers av ulike behandlingstilbud, og mellom ulike stammer av rotter. Det bør bemerkes at andre atferdsmessige analyser, slik som PIN-prikktest og kaldt allodyni, brukes også til testing av CCI-indusert smerte overfølsomhet 8.
Mens bruken av refleksive tilbaketrekning fra mekaniske eller termiske stimuli er den viktigste mål på nevropatisk smerte i denne modellen og andre, har det nylig blitt kritisert for sin dårlig korrelasjon med menneskelige symptomer og involvering av betydelig eksperimentator skjevhet 28. Derfor ville bruk av ekstra paradigmer som operante tiltak av smerte 29 og spontant slippes atferd 30 være gunstig.
Likevel desPite disse begrensningene, den CCI modellen og labb uttak tester for måling smerte overfølsomhet er avgjørende for å forstå mekanismene for nevropatisk smerte og identifisere nye smertestillende mål. I vårt laboratorium, vi rutinemessig utfører CCI og måle mekaniske labb tilbaketrekning terskler og termiske labb tilbaketrekning ventetider, for å forstå hvordan nevroimmunologisk interaksjoner bidra til nevropatisk smerte 31, og vurdere potensialet for modulerende immunsystemet til å redusere smerte overfølsomhet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forsøk på dyr ble godkjent av Animal Care og etikk komité ved University of New South Wales, Australia, og fulgt retningslinjer fra International Association for Study of Pain.
Acknowledgments
Forfatterne ønsker å takke den opprinnelige beskrivelsen av CCI-modellen av Bennett og Xie (1988).
Dette arbeidet ble støttet delvis med tilskudd fra National Health and Medical Research Council of Australia (ID # 568637) og NSW Office for vitenskap og medisinsk forskning til GMT.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Chromic gut | Ethicon Inc. | G-211 | 4-0 thickness |
| Isoflurane | Delvet Pty. Ltd., Seven Hills, NSW | n/a | |
| Mersilk | Ethicon Inc. | W-580 | 5-0 thickness |
| Autoclip | BD Biosciences | 427631 | 9 mm stainless steel |
| Riodine | Orion | R1000802F | 1% w/v iodine |
| Thermal plantar analgesia instrument | Ugo Basile | 37370 | |
| Dynamic plantar aesthesiometer | Ugo Basile | 37400 |
References
- Bouhassira, D., Lanteri-Minet, M., Attal, N., Laurent, B., Touboul, C. Prevalence of chronic pain with neuropathic characteristics in the general population. Pain. 136, 380-387 (2008).
- Toth, C., Lander, J., Wiebe, S. The prevalence and impact of chronic pain with neuropathic pain symptoms in the general population. Pain Med. 10, 918-929 (2009).
- Bennett, G. J., Xie, Y. K. A peripheral mononeuropathy in rat that produces disorders of pain sensation like those seen in man. Pain. 33, 87-107 (1988).
- Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw. J. Neurosci. Methods. 53, 55-63 (1994).
- Hargreaves, K., Dubner, R., Brown, F., Flores, C., Joris, J. A new and sensitive method for measuring thermal nociception in cutaneous hyperalgesia. Pain. 32, 77-88 (1988).
- Yeomans, D. C., Proudfit, H. K. Characterization of the foot withdrawal response to noxious radiant heat in the rat. Pain. 59, 85-94 (1994).
- Dougherty, P. M., Garrison, C. J., Carlton, S. M. Differential influence of local anesthetic upon two models of experimentally induced peripheral mononeuropathy in the rat. Brain Research. 570, 109-115 (1992).
- Bennett, G. J., Chung, J. M., Honore, M., Seltzer, Z. Models of neuropathic pain in the rat. Curr. Protoc. Neurosci. Chapter 9, (2003).
- Attal, N., Jazat, F., Kayser, V., Guilbaud, G. Further evidence for 'pain-related' behaviours in a model of unilateral peripheral mononeuropathy. Pain. 41, 235-251 (1990).
- Hu, B., Doods, H., Treede, R. -D., Ceci, A. Depression-like behaviour in rats with mononeuropathy is reduced by the CB2-selective agonist GW405833. Pain. 143, 206-212 (2009).
- Jesse, C., Wilhelm, E., Nogueira, C. Depression-like behavior and mechanical allodynia are reduced by bis selenide treatment in mice with chronic constriction injury: a comparison with fluoxetine, amitriptyline, and bupropion. Psychopharmacology. 212, 513-522 (2010).
- Monassi, C. R., Bandler, R., Keay, K. A. A subpopulation of rats show social and sleep-waking changes typical of chronic neuropathic pain following peripheral nerve injury. Eur. J. Neurosci. 17, 1907-1920 (2003).
- Roeska, K., Doods, H., Arndt, K., Treede, R. D., Ceci, A. Anxiety-like behaviour in rats with mononeuropathy is reduced by the analgesic drugs morphine and gabapentin. Pain. 139, 349-357 (2008).
- Kontinen, V. K., Kauppila, T., Paananen, S., Pertovaara, A., Kalso, E. Behavioural measures of depression and anxiety in rats with spinal nerve ligation-induced neuropathy. Pain. 80, 341-346 (1999).
- Urban, R., Scherrer, G., Goulding, E. H., Tecott, L. H., Basbaum, A. I. Behavioral indices of ongoing pain are largely unchanged in male mice with tissue or nerve injury-induced mechanical hypersensitivity. Pain. 152, 990-1000 (2011).
- Myers, R. R., Yamamoto, T., Yaksh, T. L., Powell, H. C. The role of focal nerve ischemia and Wallerian degeneration in peripheral nerve injury producing hyperesthesia. Anesthesiology. 78, 308-316 (1993).
- Grace, P. M., Hutchinson, M. R., Manavis, J., Somogyi, A. A., Rolan, P. E. A novel animal model of graded neuropathic pain: utility to investigate mechanisms of population heterogeneity. J. Neurosci. Methods. 193, 47-53 (2010).
- Kajander, K. C., Pollock, C. H., Berg, H. Evaluation of hindpaw position in rats during chronic constriction injury (CCI) produced with different suture materials. Somatosens Mot. Res. 13, 95-101 (1996).
- Xu, J., Pollock, C. H., Kajander, K. C. Chromic gut suture reduces calcitonin-gene-related peptide and substance P levels in the spinal cord following chronic constriction injury in the rat. Pain. 64, 503-509 (1996).
- Sommer, C., Schafers, M. Painful mononeuropathy in C57BL/Wld mice with delayed wallerian degeneration: differential effects of cytokine production and nerve regeneration on thermal and mechanical hypersensitivity. Brain. Res. 784, 154-162 (1998).
- Walczak, J. S., Beaulieu, P. Comparison of three models of neuropathic pain in mice using a new method to assess cold allodynia: the double plate technique. Neurosci. Lett. 399, 240-244 (2006).
- Maves, T. J., Pechman, P. S., Gebhart, G. F., Meller, S. T. Possible chemical contribution from chromic gut sutures produces disorders of pain sensation like those seen in man. Pain. 54, 57-69 (1993).
- Tall, J. M., Stuesse, S. L., Cruce, W. L., Crisp, T. Gender and the behavioral manifestations of neuropathic pain. Pharmacol Biochem. Behav. 68, 99-104 (2001).
- Chung, J. M., Choi, Y., Yoon, Y. W., Na, H. S. Effects of age on behavioral signs of neuropathic pain in an experimental rat model. Neurosci. Lett. 183, 54-57 (1995).
- Tanck, E. N., Kroin, J. S., McCarthy, R. J., Penn, R. D., Ivankovich, A. D. Effects of age and size on development of allodynia in a chronic pain model produced by sciatic nerve ligation in rats. Pain. 51, 313-316 (1992).
- Shir, Y., Sheth, R., Campbell, J. N., Raja, S. N., Seltzer, Z. Soy-containing diet suppresses chronic neuropathic sensory disorders in rats. Anesth. Analg. 92, 1029-1034 (2001).
- Yoon, Y. W., Lee, D. H., Lee, B. H., Chung, K., Chung, J. M. Different strains and substrains of rats show different levels of neuropathic pain behaviors. Experimental Brain Research. 129, 167-171 (1999).
- Mogil, J. S., Davis, K. D., Derbyshire, S. W. The necessity of animal models in pain research. Pain. 151, 12-17 (2010).
- Mogil, J. S. Animal models of pain: progress and challenges. Nat. Rev. Neurosci. 10, 283-294 (2009).
- Langford, D. J. Coding of facial expressions of pain in the laboratory mouse. Nat. Methods. 7, 447-449 (2010).
- Austin, P. J., Moalem-Taylor, G. The neuro-immune balance in neuropathic pain: involvement of inflammatory immune cells, immune-like glial cells and cytokines. J. Neuroimmunol. 229, 26-50 (2010).
