Summary
कक्ष अनुसंधान में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाई और बढ़ती भूमिका निभाते हैं, और खोज और नई चिकित्सा विज्ञान के विकास. हम लगाव निर्भर कक्षों के लिए बढ़ रही है और कटाई अधिक कुशल और प्रभावी तरीके की जरूरत कक्षों की एक बड़ी संख्या के लिए इस बढ़ती हुई आवश्यकता के साथ. सही सुविधाओं के साथ एक multilayered फ्लास्क इस उद्देश्य की सेवा कर सकते हैं.
Abstract
सेल आधारित अनुप्रयोगों का एक बढ़ती संख्या कोशिकाओं की बड़ी संख्या की आवश्यकता है. एकल परत टी बोतल, कि छोटे पैमाने पर विस्तार के दौरान पर्याप्त कर रहे हैं का प्रयोग, बोझिल, श्रमसाध्य और समय लेने वाली हो जब कोशिकाओं की बड़ी संख्या की आवश्यकता हो सकता है. इस की जरूरत है पता करने के लिए, एक नया सेल बहुस्तरीय संस्कृति पोत के प्रदर्शन आसान पैमाने को सुविधाजनक बनाने के लिए एकल स्तरित टी बोतल से कोशिकाओं की चर्चा की जाएगी. परीक्षण बोतल 3 में उपलब्ध हैं - और 5 परत प्रारूप और तीन की संस्कृति और पूरी वसूली और पांच बार कोशिकाओं की संख्या क्रमशः सक्षम T-175 बोतल के लिए तुलना में. बी.डी. फ्लास्क मल्टी की एक प्रमुख विशेषता एक बंदरगाह / मिश्रण संतुलन है कि तेजी से पोत की अनुमति देता है और कोशिकाओं के भीतर और प्रत्येक पोत की परतों के बीच अभिकर्मकों के समान वितरण के रूप में मिश्रण के रूप में अच्छी तरह से और लगातार कोशिकाओं है कि एक वातावरण है कि में संवर्धित किया जा सकता है है उत्पादन T-175 बोतल के लिए अनुकूल है.
इन मल्टी बोतल के डिजाइन भी ग के लिए अनुमति देता हैबोतल में सीधे जोड़ने अभिकर्मकों और कोशिकाओं के रूप में के रूप में अच्छी तरह से मूल्यवान कोशिकाओं और अभिकर्मकों के कुशल वसूली के लिए onvenient पिपेट का उपयोग करने के लिए और डालने का कार्य करने के लिए कारण संदूषण का जोखिम कम कर देता है. अनुप्रयोगों में जहां डालने के लिये pipetting अधिक पसंद है के लिए, डिजाइन न्यूनतम अवशिष्ट तरल बनाए रखने के लिए इतनी के रूप में मूल्यवान कोशिकाओं और अभिकर्मकों के अपव्यय को कम करने के लिए अनुमति देता है.
Protocol
1. प्रोटोकॉल सेल संस्कृति के लिए मल्टी बोतल का उपयोग करने के लिए
- वाहिकाओं और सेल निलंबन जोड़ने की तैयारी
- सेल के विकास मध्यम तैयार के रूप में की जरूरत है.
- बहु फ्लास्क खड़ी काम की सतह (बाँझ लामिना का प्रवाह हुड) का सामना करना पड़ टोपी के साथ अपने पक्ष पर अप लाइन.
- ये बोतल 3 में उपलब्ध हैं और 5 परत स्वरूप और काम प्रवाह एक T-175 फ्लास्क के रूप में एक समान पैटर्न का उपयोग करें.
- टोपी ढीला और निकालें. फ्लास्क में एक 50 या 100 एमएल विंदुक का उपयोग कर या गिरने से पूर्व गर्म माध्यम के लिए आवश्यक राशि जोड़ें.
- Pipettes कि ≤ 10 मिलीलीटर पोत के नीचे तक पहुँचने जब मल्टी बोतल खड़ी टोपी ऊपर का सामना करना पड़ के साथ रखा जाता है . Pipettes ≥ 10ml पोत में तुरंत पिछले मल्टी फ्लास्क - पर लोगो तक पहुँच सकते हैं, जिससे पोत के लिए मीडिया की बड़ी मात्रा में जोड़ने के लिए एक सुविधाजनक पोर्टल प्रदान.
- मध्यम के बुदबुदाती से बचने के लिए, FL के तरल धारा की अनुमतिबहु फ्लास्क ढक्कन (लोगो साइड) की भीतरी दीवार के साथ ओ.
- एक केंद्रित सेल स्टॉक से मध्यम विकास में शीर्ष 10 एमएल विंदुक और टोपी बोतल का उपयोग परत के माध्यम से सेल निलंबन जोड़ें.
युक्तियाँ:
- परिवहन इनक्यूबेटर साइट के लिए एक गाड़ी पर मल्टी बोतल और शेष चरणों का पालन.
सेल बोने घनत्व सेल प्रकार, मध्यम और संस्कृति की अवधि की जरूरत पर निर्भर करता है अलग अलग होंगे. बोने घनत्व और मानक टी-175 बोतल में इस्तेमाल किया है कि मीडिया की मात्रा के साथ शुरू और मल्टी फ्लास्क - स्वरूप उपयोग पर निर्भर करता है 3 या 5 से गुणा.
- कक्षों की मिलाकर देखना
- मिक्स स्थिति: मल्टी फ्लास्क - ईमानदार लोगो आप का सामना करने के साथ और पकड़ो काउंटर दक्षिणावर्त बारी एक 45 ° मिश्रण बंदरगाह के साथ आप का सामना कोण.
- उसी कोण पर होल्डिंग, धीरे सामने से मल्टी फ्लास्क झुकाव तरल जब तक आप से दूर गर्दन ऊपर परत में वापस पूरी तरह से downwar नालियांमिश्रण बंदरगाह के माध्यम से डी एस. बंदरगाह पक्ष के मिश्रण पर धुरी.
- इसी तरह, धीरे जब तक मिश्रण बंदरगाह के माध्यम से ऊपर की ओर नीचे की परत के माध्यम से पूरी तरह से नालियों पीछे से सामने (आप की ओर गर्दन) मल्टी फ्लास्क रॉक. दोहराएँ चरण 1.2.2 और 1.2.3 एक अधिक समय उचित मिश्रण सुनिश्चित.
- मल्टी फ्लास्क के मिश्रण स्थिति (1.2.1 चरण) वापस ले आओ और 1.3 कदम आगे बढ़ना
- वैकल्पिक रूप से, सेल निलंबन मल्टी फ्लास्क - से बाह्य तैयार कर सकते हैं और सेल निलंबन एक पोत का उपयोग विंदुक या कोमल गिरने से जोड़ा जा सकता है.
- मिक्स बंदरगाह वाहिका में मीडिया के साथ कोशिकाओं के मिश्रण की अनुमति देता है और सेल निलंबन के बड़ी मात्रा में बाह्य बनाने की आवश्यकता eliminates.
- यह भी मल्टी फ्लास्क की परतों के पार मीडिया समकारी की अनुमति देता है
- तरल पदार्थ के प्रतितोलन
- बाद मिश्रण / सेल निलंबन के जोड़ने, फ्लास्क - मल्टी जगह खड़ी एक फ्लैट काम की सतह पर तरल की मात्रा equa बराबरlly सभी परतों में.
- प्रत्येक परत में विभाजन तरल
- आप का सामना लोगो के साथ मल्टी फ्लास्क पकड़ो और एक 45 ° कोण परतों के प्रत्येक में विभाजन करने के लिए तरल के लिए दक्षिणावर्त बारी.
युक्ति:
सर्वोत्तम परिणामों के लिए, यह महत्वपूर्ण है के लिए 1.3-1.4 चरण के लिए एक फ्लैट काम की सतह का उपयोग
- आप का सामना लोगो के साथ मल्टी फ्लास्क पकड़ो और एक 45 ° कोण परतों के प्रत्येक में विभाजन करने के लिए तरल के लिए दक्षिणावर्त बारी.
- परिवहन
- एक बार सेल निलंबन युक्त मीडिया विभाजित है, एक ही ° 45 कोण चरण 1.4.1 इनक्यूबेटर में मिश्रण बंदरगाह से दूर मीडिया के साथ के रूप में (दक्षिणावर्त) पर परिवहन फ्लास्क मल्टी. इस स्थिति में भी उपयुक्त है जब एक खुर्दबीन पर देखने के लिए इनक्यूबेटर से बोतल हटाने.
- इनक्यूबेटर शेल्फ पर मल्टी फ्लास्क रखकर
- मल्टी फ्लास्क होल्डिंग 45 डिग्री कोण (दक्षिणावर्त, मिश्रण बंदरगाह से दूर), धीरे इसे बारी बारी से नीचे क्षैतिज इनक्यूबेटर सतह पर (कोने के रूप में एक मिश्रण बंदरगाह से दूर का उपयोगधुरी). लोगो सामना करना पड़ रहा के साथ मल्टी फ्लास्क लेटाओ.
- फाल्कन डिजाइन बहु - फ्लास्क वाहिकाओं खड़ी होने के लिए अनुमति देता है और उन्हें एक तगड़ा stacking रिब द्वारा जगह में रखती है.
- मल्टी फ्लास्क होल्डिंग 45 डिग्री कोण (दक्षिणावर्त, मिश्रण बंदरगाह से दूर), धीरे इसे बारी बारी से नीचे क्षैतिज इनक्यूबेटर सतह पर (कोने के रूप में एक मिश्रण बंदरगाह से दूर का उपयोगधुरी). लोगो सामना करना पड़ रहा के साथ मल्टी फ्लास्क लेटाओ.
- कोशिकाओं और अभिकर्मकों के वितरण
- काम की सतह पर फ्लैट - मल्टी फ्लास्क रखने के बाद, धीरे आगे और पीछे रॉक और पक्ष की ओर करने के लिए कोशिकाओं संस्कृति देखभाल लेने के प्रत्येक परत से तरल नहीं फैल सतहों पर समान रूप से वितरित करने के लिए. बोतल ढेर.
- इस फ्लास्क ऑप्टिकली स्पष्ट सामग्री से बना है और पिछले परत पर कोशिकाओं को आसानी से एक खुर्दबीन पर देखा जा सकता है.
- काम की सतह पर फ्लैट - मल्टी फ्लास्क रखने के बाद, धीरे आगे और पीछे रॉक और पक्ष की ओर करने के लिए कोशिकाओं संस्कृति देखभाल लेने के प्रत्येक परत से तरल नहीं फैल सतहों पर समान रूप से वितरित करने के लिए. बोतल ढेर.
- मीडिया मुद्रा
- महाप्राण (व्यंजन) जबकि झुकने लोगो के साथ आप का सामना बाईं मल्टी फ्लास्क (मिश्रण बंदरगाह साइड).
- फिर झुकाव, सही करने के लिए मल्टी फ्लास्क, सभी अवशिष्ट मीडिया महाप्राण (व्यंजन) जारी.
- मीडिया की उचित राशि जोड़ें और 1.3-1.7 चरण का पालन करें
2.मल्टी बोतल से फसल काटने वाले कोशिकाओं
- कोशिकाओं, लाइन अप बोतल मल्टी खड़ी अलग कर देना और प्रत्येक स्थिति (1.2.1 चरण) मिक्स लाने. धीरे से गर्दन आप इतना का सामना करना पड़ के रूप में मीडिया को मल्टी फ्लास्क के ऊपर परत के लिए पलायन करने की अनुमति के साथ बोतल पलटना.
- जब तक आप एक 5 या 10 एमएल aspirating टिप गर्दन के माध्यम सम्मिलित मिश्रण बंदरगाह के निकट तरल स्तर तक पहुँचने. थक मध्यम महाप्राण (व्यंजन).
- हदबंदी बफर / अभिकर्मक धोने जोड़ें और 1.2.1 कदम के रूप में स्थिति मिक्स लाने के लिए है, तो आगे बढ़ना और 1.3-1.7 चरणों का पालन करें मध्यम विकास / निष्क्रिय करने एजेंट के साथ बेअसर और प्राप्त ट्यूब में डाल सेल निलंबन या ऐसे फ्लास्क पलटना है कि कोशिकाओं के लिए नाली. पोत के ऊपर परत और एक 10 एमएल पिपेट का उपयोग कोशिकाओं को इकट्ठा.
युक्ति कक्षों या अभिकर्मकों की वसूली बढ़ाने के लिए, मल्टी फ्लास्क लाने के लिए स्थिति (1.2.1 चरण) का मिश्रण, ऑपरेटर की ओर गर्दन के साथ पलटना करने के लिए अल से मीडिया की पूरी जल निकासी की अनुमति ऊपर परत करने के लिए मैं परतों. फिर, झुकाव फ्लास्क मल्टी कोण 45 ° (मिश्रण बंदरगाह से दूर) के लिए दक्षिणावर्त जबकि फ्लास्क मल्टी औंधा रहता है. एक विंदुक (1-10 एमएल) का प्रयोग किसी भी शेष अभिकर्मकों इकट्ठा.
3. की सिफारिश की बोतल फाल्कन - बहु में काम कर रहे मात्रा
ग्रोथ मीडिया
मल्टी फ्लास्क प्रति 75-150 एमएल: 3 - परत
5 - परत: मल्टी फ्लास्क प्रति 125-250 एमएल
हदबंदी एजेंट
3 - परत: ≥ मल्टी फ्लास्क प्रति 15 एमएल
5 - परत: ≥ मल्टी फ्लास्क प्रति 25 एमएल
सुझाव: मध्यम मानक T-175 बोतल में प्रयोग किया जाता मात्रा के साथ शुरू करो और 3 या 5 बार बहु फ्लास्क - के आधार पर प्रारूप मूल्यांकन इतना है कि प्रति इकाई सतह क्षेत्र एमएल ही रहता है से गुणा .
4. प्रतिनिधि परिणाम:
फाल्कन फ्लास्क मल्टी डिजाइन 1.
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. चित्रा 1: फ्लास्क मल्टी सेल संस्कृति वाहिकाओं एक 3 में उपलब्ध हैं - और 5 परत के लिए 525 और 875 सेमी 2 विकास सतह क्षेत्र, क्रमशः प्रदान कोशिकाओं के पैमाने अप stackable स्वरूप . पिपेट पहुँच में और पोत के बाहर और कोशिकाओं अभिकर्मकों के अलावा और हटाने की सुविधा. मिश्रण बंदरगाह की उपस्थिति तेजी से पोत मिश्रण और मल्टी फ्लास्क के सभी परतों के पार मीडिया के समकारी के लिए अनुमति देता है.
* 2 सेल बहु फ्लास्क यील्ड का उपयोग कर:
इन जहाजों 3 परत और 5 परत स्वरूप जो 3 के अनुरूप है और 5 बार T-175 बोतल की सतह क्षेत्र में उपलब्ध हैं. तदनुसार, ≥ 3 और 5 बार (130 6.8 ± 6 x 10 और 218 ± x 10 6 कोशिकाओं, क्रमशः 23.6) BHK-21 की संख्या (बच्चा हम्सटर गुर्दे) कोशिकाओं हो और T-175 की तुलना में थे मल्टी फ्लास्क से बरामद बोतल (43.2 ± 3.5 x 10 6 कोशिकाओं; Fig.2A). यू प्रति सेल उपजलीख सतह क्षेत्र 3 में बराबर था - और 5 - परत मल्टी बोतल और BHK-21 के लिए T-175 बोतल, LnCAP (मानव प्रोस्टेट ग्रंथिकर्कटता सेल लाइन), (मानव hepatocarcinoma कोशिका लाइन) Hep-G2, 2-293 EcoPack (मानव गुर्दे सेल लाइन) 48 96h (Fig.2B) विकास (परत प्रति 35 मिलीलीटर) मीडिया के रूप में सेल विक्रेता (ATCC, सिग्मा और / या Clontech) से सिफारिश की अवधि के लिए सुसंस्कृत. कक्ष एक स्वचालित Vi सेल काउंटर (1) पर प्रगणित थे.
चित्रा 2A: तीन और पांच बार BHK-21 कोशिकाओं की संख्या बढ़ी है और 3 से बरामद थे - और 5 - परत बोतल मल्टी T-175 बोतल की तुलना में. उम्मीद उपज नियंत्रण से मतलब सेल उपज का उपयोग निर्धारित किया गया था टी 175 से गुणा 3 के लिए तीन और पांच बार बोतल - और 5 - परत बहु बोतल क्रमशः (n = 4 बोतल / प्रारूप).
चित्रा 2B: 3 में 2 सेमी प्रति सेल उपज बराबर था - और 5 - परत मल्टी बोतल और BHK-21, LnCAP, HepG2 और EcoPack2-293 कोशिकाओं के लिए T-175 बोतल . प्रत्येक बार 4 से 6 बोतल के मतलब का प्रतिनिधित्व करता है. BHK-21 कोशिकाओं (11,000 cells/cm2) 72 घंटे, LnCAP कोशिकाओं (cells/cm2 बीस हज़ार) और EcoPack2 293 कोशिकाओं (३५००० ~ cells/cm2) के लिए सुसंस्कृत थे 96 घंटे और HepG2 कोशिकाओं (25,000 कोशिकाओं / 2 सेमी के लिए सुसंस्कृत थे ) 48 घंटे के लिए पूर्व फसल के लिए सुसंस्कृत थे.
3. मल्टी फ्लास्क की परतों के बीच मीडिया वितरण
सेल संस्कृति माध्यम (DMEM, Invitrogen) 5 - परत मल्टी बोतल (250 mL/5-layer पोत) करने के लिए जोड़ा गया है और प्रोटोकॉल ऊपर वर्णित अनुसार परतों में विभाजित है. मीडिया वितरण प्रत्येक परत और मीडिया व्यक्तिगत परतों से बाहर पंप में छेद ड्रिलिंग के द्वारा मापा गया था. प्रत्येक परत से बरामद तरल पदार्थ का वजन परत से परत करने के लिए अपेक्षाकृत समान हो सकता है के रूप में 3 चित्र में दिखाया गया है पाया गया था. वे इस प्रकार हैं: 510.8 ± 0.73, 50.3 ± 0.58, 50.21 ± 0.13, 49.88 ± 0.35, 49.45 ± 0.37 (ग्राम).
चित्रा 3 एक 5 परत फ्लास्क मल्टी के पांच परतों के प्रत्येक में वर्दी मीडिया वितरण. सेल संस्कृति माध्यम (250 ml/5-layer पोत) मल्टी बोतल, equilibrated और अलग - अलग परतों को विभाजित करने के लिए जोड़ा गया है. मीडिया व्यक्तिगत परतों और तरल पदार्थ के वजन में drilled छेद के माध्यम से लगाया गया था प्रत्येक परत (n = 6 बोतल) से दर्ज किया गया था.
4. मल्टी फ्लास्क की परतों के बीच सेल वितरण
कक्ष और जोड़ा जा सकता है फ्लास्क - बहु के भीतर में मिश्रित. हम (10μm, PolySciences इंक) मोती का उपयोग मल्टी फ्लास्क की परतों के बीच कक्षों की नकली वितरण आकार में कक्षों के लिए इसी तरह की. मनका निलंबन मल्टी फ्लास्क ऊपर परत के माध्यम से एक 10 एमएल पिपेट का उपयोग पोत में जोड़ा गया है और desc के रूप में पोत में मीडिया के साथ मिश्रितऊपर प्रोटोकॉल में ribed. मनका वितरण प्रत्येक परत और तरल पदार्थ युक्त मनका निलंबन व्यक्तिगत परतों से बाहर पंप किया गया था में ड्रिलिंग छेद द्वारा मापा गया था. मनका प्रत्येक परत से बरामद एकाग्रता कल्टर काउंटर पर पढ़ा था और दर्ज है. नीचे दिखाई जाती हैं 3 परत मल्टी बोतल (Fig.4A) में बराबर अंतर - परत मनका वितरण. मिश्रण बंदरगाह कोशिकाओं और मल्टी फ्लास्क परतों के बीच अभिकर्मकों के समरूप वितरण सक्षम बनाता है.
चित्रा 4A: 3 - परत फ्लास्क मल्टी के तीन परतों में से प्रत्येक में मनका वितरण . मोतियों की एक निलंबन (3.6 x10 6 / एमएल) मल्टी बोतल में तिरस्कृत माध्यम से जोड़ा गया है: (मनका निलंबन मीडिया मात्रा 1:10 है, खंड: खंड) और मिश्रित, संतुलन और विभाजन वर्णित प्रोटोकॉल का उपयोग कर कदम के द्वारा पीछा किया. मनका प्रत्येक परत (मध्यम प्रत्येक परत पर drilled छेद के माध्यम से पंप) से बरामद एकाग्रता कल्टर गणना पर पढ़ा थाएर और दर्ज की गई. नीचे दिखाई जाती हैं 3 में बराबर अंतर परत वितरण मनका - बोतल - बहु परत (n = 5 बोतल)
नीचे दिखाया गया है Ecopack 2-293 3 परत पूरक विकास मीडिया में मल्टी बोतल पर> 80% संगम हो गई कोशिकाओं के धुंधला पैटर्न के प्रतिनिधि छवियों हैं. सेल monolayers तय थे और दाग क्रिस्टल वायलेट के साथ और मल्टी फ्लास्क परतों तो काट रहे थे और छवियों को स्कैन (2 ). नोट: सेल patterning मल्टी फ्लास्क (Fig.4B) के सभी परतों पर समरूप किया गया था. एकाधिक सेल मूल्यांकन (नहीं दिखाया डेटा) प्रकार के साथ इसी तरह के परिणाम प्राप्त किया गया.
चित्रा 4B: यह आंकड़ा मल्टी बोतल की परतों के बीच सजातीय सेल के विकास को दिखाता है. Ecopack-2-293> 80% संगम 3 - परत मल्टी बोतल और T-175 में विकसित कोशिकाओं तय की और बैंगनी क्रिस्टल के साथ दाग थे. बहु - फ्लास्क वाहिकाओं में कटौती और प्रत्येक दाग परत स्कैन किया गया था.
5 मल्टी फ्लास्क में वायु आपूर्ति.
खर्च EcoPack2-293 96 घंटे के लिए संवर्धित कोशिकाओं से BioProfile फ्लेक्स (3,4) विश्लेषक (नोवा बायोमेडिकल) का उपयोग कर मीडिया के विश्लेषण से 5 परत मल्टी बोतल बनाम टी-175 बोतल (81.03 में विकसित कोशिकाओं की हवा संतृप्ति में कोई फर्क नहीं का पता चला ± 1.9 बनाम 83.4 ± 5.8% परिवेश 2 हे).
चित्रा 5: खर्च मीडिया के एयर संतृप्ति (% परिवेश हे 2) 5 - परत मल्टी बोतल बनाम टी-175 बोतल से पूर्व मिश्रित मीडिया में समान थे. EcoPack2-293 कोशिकाओं ३५००० कोशिकाओं / 2 सेमी की एक घनत्व पर वरीयता प्राप्त किया गया और मीडिया विश्लेषण (n = 3 बोतल) से पहले 96 घंटे के लिए सभ्य.
Discussion
वर्तमान अध्ययन है कि मल्टी फ्लास्क डिजाइन शोधकर्ताओं प्रदान करता है है उत्पादकता में वृद्धि को दर्शाता है. यह के रूप में करने के लिए अनुकूलतम प्रदर्शन के लिए ऊपर उल्लिखित जब मल्टी बोतल का उपयोग चरणों का पालन करें महत्वपूर्ण है, वहाँ है कि सबसे जरूरी माना जाता है इस प्रोटोकॉल में कुछ महत्वपूर्ण कदम हैं. ये (मैं) शामिल कोशिकाओं और अभिकर्मकों पोत (ii) एक 45 ° परतों के प्रत्येक (iii) मल्टी फ्लास्क फ्लैट में विभाजन पोस्ट बिछाने में तरल पदार्थ के विभाजन के बाद दक्षिणावर्त कोण पर मल्टी फ्लास्क परिवहन के भीतर मिश्रण बंदरगाह का उपयोग करने के मिश्रण इनक्यूबेटर.
मल्टी फ्लास्क के समुचित उपयोग प्रत्येक पोत के भीतर एक सजातीय सेल की आबादी है कि एक वातावरण है कि T-175 बोतल (5) के लिए अनुकूल है में सुसंस्कृत है के उत्पादन के लिए होता है. इन जहाजों में एक समान पदचिह्न टी-175 फ्लास्क के रूप में 3 और 5 गुना अधिक कोशिकाओं प्रदान करते हैं. 3 और 5 परत 525 पोत और 875cm विकास क्षेत्र के 2, क्रमशः प्रदान करता है और दोनों अंतरिक्ष और श्रम की पेशकशउपयोगकर्ताओं को avings. टिशू कल्चर भूतल उपचार मानक बोतल इस प्रकार की आवश्यकता के बिना पैमाने अप सक्षम करने के लिए तुलनीय है फिर से अनुकूलन मौजूदा संस्कृति शर्तों या गुणवत्ता, एकरूपता, या कोशिकाओं के प्रदर्शन (6, 7) समझौता. यह भी पहले से एकत्र आंकड़ों के साथ तुलनात्मकता के लिए प्रदान करता है. इन जहाजों को भी कोलेजन जैसे अभिकर्मकों के साथ लेपित किया जा सकता है है, fibronectin, लगाव, विकास, और 8 hepatocytes, 9 kertainocytes, सीरम मुक्त मीडिया में बड़े हो स्टेम कोशिकाओं के रूप में कुछ सेल प्रकार के भेदभाव के लिए एक विशेष बुनियाद प्रदान पाली डी lysine योगों. कोटिंग समाधान न्यूनतम अवशिष्ट तरल प्रतिधारण के साथ इतनी के रूप में मूल्यवान अभिकर्मकों के अपव्यय के रूप में के रूप में अच्छी तरह से कोटिंग के समाधान के प्रभावी हटाने को कम करने के लिए संवर्धन कोशिकाओं से पहले हटाया जा सकता है. सिफारिश मल्टी बोतल रेंज में इष्टतम मीडिया 0.142-0.287 मिलीलीटर / 2 सेमी जो परत प्रति 25-50 मिलीलीटर अनुवाद से संस्कृति कोशिकाओं मात्रा. दूसरे multilayered फ्लास्क, टी के विपरीतअपने उत्पाद पोत है कि पोत और कोशिकाओं के भीतर और प्रत्येक पोत की परतों के बीच अभिकर्मकों के समान वितरण के रूप में मिश्रण के रूप में अच्छी तरह से तेजी से की अनुमति देता है में एक मिश्रण बंदरगाह प्रदान करता है. विविध सेल लाइनों, प्राथमिक संस्कृतियों और स्टेम सेल कुशलता से किया गया है बढ़ाया मल्टी बोतल का उपयोग कर. इन जहाजों अनुप्रयोगों है कि उच्च throughput स्क्रीनिंग, टीका उत्पादन, वायरल वेक्टर transfections और सेल थेरेपी में इस तरह के रूप में कक्षों की एक बड़ी संख्या में मांग में विशेष रूप से लाभप्रद हैं.
समय, स्थान, श्रम, और कम पीढ़ी बर्बादी में बचत एकल स्तरित वाहिकाओं में पारंपरिक संस्कृतियों बनाम मल्टी फ्लास्क की कुंजी जीत रहे हैं. हम संस्कृति में लगभग तीन बार 5 से काटा कोशिकाओं की संख्या कर सकते हैं, एक ही अंतरिक्ष में T-175 बोतल 3 का उपयोग कर, 5 परत मल्टी बोतल. अंतरिक्ष की बचत में यह लाभ केवल T-175 तक ही सीमित नहीं है, लेकिन यह भी अन्य जहाजों के लिए बढ़ाया जा सकता है: एक मानक रोलर बोतल तंत्र है कि आम प्रयोगशाला इन्क्यूबेटरों घरों में फिट बैठता है ~~ 4 roller बोतलों (2200 एमएल) जिनमें से प्रत्येक 850cm 2 सतह क्षेत्र प्रदान करता है. एक ही क्षेत्र में, ~ 20, 5 - परत मल्टी बोतल इस प्रकार संस्कृति कोशिकाओं को पांच गुना वृद्धि की सतह प्रदान रखे जा सकता है. इसके अलावा, "जाओ ग्रीन" जागरूकता में वृद्धि के साथ, पीढ़ी बर्बादी को कम करने के लिए विकल्प उच्च वांछनीय है. उस संबंध में, वहाँ एक 38% है (5, T-175 बोतल, फ्लास्क मल्टी 5 परत 400g ~ वजन जबकि ~ 640g वजन) T-175 बोतल और इन फायदों की तुलना में मल्टी बोतल का उपयोग पीढ़ी बर्बादी में कमी का नेतृत्व अपशिष्ट भंडारण और निपटान लागत और उपयोगकर्ता के लिए आर्थिक बचत में परिणाम में कमी.
Disclosures
सभी लेखकों Becton Dickinson, बायोसाइंसेज खंड, डिस्कवरी Labware यूनिट के कर्मचारी हैं.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 3-layer Tissue Culture-treated 525cm2 | BD Biosciences | 353143 | |
| 5-layer Tissue Culture-treated 875cm2 | BD Biosciences | 353144 | |
| 100ml pipette | BD Biosciences | 357600 | |
| 10 ml pipette | BD Biosciences | 357551 | |
| 5 ml aspirating pipette | BD Biosciences | 357501 | |
| 50 ml Polypropylene conical tube | BD Biosciences | 352070 | |
| T-175 flask Tissue Culture-treated | BD Biosciences | 353028 | |
| Gram Crystal Violet | BD Biosciences | 212525 | |
| DMEM | Invitrogen | 11885 | |
| GMEM | Sigma-Aldrich | G5154 | |
| RPMI-1640 | ATCC | 30-2001 | |
| MEM | ATCC | 30-2003 | |
| Trypsin-EDTA | Lonza Inc. | CC-5012 | |
| Fetal Bovine serum | Invitrogen | 16000-044 | |
| Tryptose Phosphate Broth | Sigma-Aldrich | T8159 | |
| BHK-21 cells | Sigma-Aldrich | 85011433 | |
| Hep-G2, LnCAP | ATCC | ||
| Ecopack 2-293 | Clontech Laboratories | ||
| Paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences | 15710 | |
| Polystyrene Bead | Polysciences, Inc. | 24628-20 | |
| Bio-Profile Flex Analyzer | Nova BioMedical |
References
- Szabo, S. E., Monroe, S. L., Fiorino, S., Bitzan, J., Loper, K. Evaluation of an automated instrument for viability and concentration mesurements of cryopreserved hematopoietic cells. Lab. Hematol. 10, 109-109 (2004).
- Bonnekoh, B., Wevers, A., Jugert, F., Merk, H., Mahrle, G. Colorimetric growth assay for epidermal cell cultures by their crystal violet binding capacity. Arch. Dermatol. Res. 281, 487-487 (1989).
- Sengupta, N., Rose, S. T., Morgan, J. A. Metabolic Flux analysis of CHO cell metabolism in the late non-growth phase. Biotechnol. Bioeng. 108, 83-83 (2010).
- Zhu, M. M., Goyal, A., Rank, D. L., Gupta, S. K. Effects of elevated pCO2 and osmolality on growth of cells and production of antibody–fusion protein B1: a case study. Biotechnol. Prog. 21, (2005).
- Ryan, J. M., Sharf, B. B., Cristofalo, J. The influence of culture medium volume on cell density and life-span of human diploid fibroblasts. Exp Cell Res. 91, 389-389 (2004).
- Flaherty, P. Tips and Techniques for enhancing your cell culture. , http://www.bdbiosciences.com/hotlines/webinars/ondemand/index.jsp (2009).
- Sanyal, S., Abraham, E. J., Slater, K., Cai, A., Lacey, B., Hartshorn, C., Flaherty, P., McHugh, B., Qian, S. Scaling up cells in BD Falcon Cell Culture Multi-Flasks. , http://www.bdbiosciences.com/documents/multiflasks-SBSposter.pdf (2011).
- DiPersio, C. M., Jackson, D. A., Zaret, K. S. The extracellular matrix coordinately modulates liver transcription factors and hepatocyte morphology. Mol. Cell. Biol. 11, 4405-4405 (1991).
- Grose, R., Hutter, C., Bloch, W., Thorey, I., Watt, F. M., Fassler, R., Brakebusch, W. S. A crucial role of β1 integrins for keratinocyte migration in vitro and during cutaneous wound repair. Dev. 129, 2303-2303 (2002).
