Summary
الخلايا تلعب دورا أساسيا ومتزايدا في البحث ، واكتشاف وتطوير علاجات جديدة. مع هذه الحاجة المتزايدة لعدد أكبر من الخلايا نحتاج طرقا أكثر كفاءة وفعالية لزراعة وحصاد الخلايا مرفق التابعة. ويمكن للقارورة متعددة المستويات مع ميزات حق خدمة هذا الغرض.
Abstract
هناك عدد متزايد من التطبيقات المستندة إلى خلية تتطلب أعدادا كبيرة من الخلايا. استخدام طبقة واحدة T - القوارير ، والتي هي كافية خلال توسيع نطاق صغير ، قد تصبح مرهقة ، مجهدة ومضيعة للوقت عندما يطلب أعداد كبيرة من الخلايا. وستناقش لتلبية هذه الحاجة ، وأداء جديد متعدد الطبقات الخلية سفينة الثقافة لتسهيل مقياس سهل مكونة من خلايا من الطبقات واحد T - القوارير. في قوارير اختبار متوفرة في 3 -- 5 وشكل طبقة وتمكين الثقافة واستكمال الانتعاش من ثلاثة وخمسة أضعاف عدد الخلايا على التوالي ، مقارنة ب T - 175 القوارير. ومن السمات الرئيسية للقارورة متعدد دينار بحريني هو منفذ مزيج / موازنة تسمح السريع في وعاء الخلط ، وكذلك توزيع موحد للخلايا والكواشف داخل وبين طبقات من كل سفينة ، وتنتج باستمرار الخلايا التي يمكن تربيتها في بيئة غير متطابقة إلى T - 175 القوارير.
تصميم هذه قوارير متعددة كما يسمح للجonvenient الوصول ماصة لإضافة الكواشف والخلايا مباشرة في قوارير ، وكذلك استرداد قيمة كفاءة الخلايا والكواشف ، ويقلل من خطر التلوث نتيجة لسكب. لتقديم الطلبات هو المفضل حيث تتدفق عبر pipetting ، وتصميم ليسمح الحد الأدنى من الاحتفاظ السائل المتبقية وذلك لتقليل الفاقد من الخلايا قيمة والكواشف.
Protocol
1. بروتوكول لاستخدام قوارير متعددة للثقافة الخلية
- إعداد السفن وإضافة تعليق خلية
- يعد نمو الخلايا المتوسطة حسب الحاجة.
- يصطف متعدد قارورة عموديا على جانبها مع غطاء مواجهة على سطح العمل (هود العقيمة تدفق الصفحي).
- هذه القوارير متوفرة في 3 و 5 تنسيقات طبقة واستخدام مماثلة لتدفق العمل ونمط قارورة T - 175.
- تخفيف وإزالة مباراة دولية. إضافة المبلغ المطلوب من قبل حرارة متوسطة إلى القارورة باستخدام ماصة مل 50 أو 100 أو عن طريق سكب.
- ماصات التي ≤ 10 مل يمكن ان تصل الى قاع السفينة عندما يتم وضع قوارير متعددة عموديا مع غطاء تواجه صعودا. يمكن ماصات ≥ 10ML تصل الى السفينة على الفور الماضية الشعار على قارورة متعددة ، وبالتالي توفير بوابة مناسبة لإضافة كميات أكبر من وسائل الإعلام إلى السفينة.
- لتجنب فقاعات المتوسطة ، والسماح لتيار السائل فلوريداآه على طول الجدار الداخلي للغطاء متعدد قارورة (شعار جنب).
- إضافة تعليق خلية من الخلايا تتركز في الأسهم المتوسطة النمو من خلال الطبقة العليا باستخدام 10 مل ماصة وقوارير الغطاء.
نصائح :
-- النقل متعدد قوارير على عربة لموقع الحاضنة وتنفيذ الخطوات المتبقية.
-- إن كثافة بذر الخلية تختلف تبعا لنوع من الخلايا والمتوسطة وثقافة الحاجة المدة. تبدأ كثافة البذر وحجم وسائل الإعلام لتلك المستخدمة في قوارير T - 175 القياسية وضرب من قبل 3 أو 5 اعتمادا على قارورة متعدد الشكل المستخدمة.
- خلط الخلايا
- مزيج الموقف : امسك قارورة متعدد تستقيم مع شعار باتجاهك وبدوره عكس عقارب الساعة إلى 45 مع منفذ مزيج باتجاهك زاوية درجة.
- عقد في نفس الزاوية ، والميل بلطف متعدد قارورة من الأمام إلى الخلف (الرقبة بعيدا عنك) حتى السائل في الطبقة العليا المصارف downwar بالكاملس من خلال منفذ المزيج. المحور على مزيج من جانب الميناء.
- وبالمثل ، الصخرة متعددة قارورة برفق من الخلف إلى الأمام (نحو لكم الرقبة) حتى المتوسطة المصارف تماما من الطبقة السفلية باتجاه الأعلى من خلال منفذ المزيج. كرر الخطوات 1.2.2 1.2.3 واحد مزيد من الوقت لضمان خلط الصحيح.
- جلب موضوع متعدد قارورة مرة أخرى إلى موقف مزيج (الخطوة 1.2.1) ، والشروع في الخطوة 1.3
- بدلا من ذلك ، يمكن أن تكون على استعداد الخلية تعليق خارجيا من قارورة موضوع ويمكن إضافة تعليق خلية للسفينة باستخدام ماصة أو عن طريق سكب طيف.
- مزيج منفذ يسمح في وعاء خلط الخلايا مع وسائل الإعلام ويلغي الحاجة إلى تقديم كميات كبيرة من الخلايا تعليق خارجيا.
- كما يسمح تكافؤ وسائل الاعلام عبر طبقات متعددة قارورة
- موازنة السوائل
- بعد خلط / مضيفا التعليق الخلية ، مكان متعدد قارورة عموديا على سطح مستو العمل لتحقيق التعادل equa حجم السائلlly في جميع الطبقات.
- قسم السائل في كل طبقة
- عقد قارورة متعددة مع شعار باتجاهك وتحويل عقارب الساعة الى السائل زاوية 45 درجة لتقسيم في كل من طبقات.
نصيحة :
-- للحصول على أفضل النتائج ، من المهم لاستخدام سطح مستو لخطوات العمل 1،3-1،4
- عقد قارورة متعددة مع شعار باتجاهك وتحويل عقارب الساعة الى السائل زاوية 45 درجة لتقسيم في كل من طبقات.
- نقل
- بمجرد أن يتم تقسيم وسائل الإعلام التي تحتوي على التعليق الخلية ، والنقل المتعدد قارورة في 45 نفس ° زاوية (عقارب الساعة) كما في الخطوة 1.4.1 مع وسائل الاعلام بعيدا عن الميناء خلط في الحاضنة. هذا الموقف هو أيضا مناسبة عند إزالة قوارير من حاضنة للعرض على المجهر.
- وضع موضوع على الرف ، قارورة حاضنة
- عقد متعدد قارورة في زاوية 45 درجة (في اتجاه عقارب الساعة ، بعيدا عن الميناء مزيج) ، وتناوب عليه بلطف أفقيا على سطح الحاضنة (باستخدام الزاوية بعيدا عن الميناء بمثابة مزيجالمحور). وضع موضوع متعدد قارورة مع شعار مواجهة.
- الصقر متعددة قارورة تصميم يسمح مكدسة السفن ، ويحمل لهم في المكان من قبل ضلع قوي التراص.
- عقد متعدد قارورة في زاوية 45 درجة (في اتجاه عقارب الساعة ، بعيدا عن الميناء مزيج) ، وتناوب عليه بلطف أفقيا على سطح الحاضنة (باستخدام الزاوية بعيدا عن الميناء بمثابة مزيجالمحور). وضع موضوع متعدد قارورة مع شعار مواجهة.
- توزيع الخلايا والكواشف
- بعد وضع موضوع متعدد قارورة مسطحة على سطح العمل ، الصخرة بلطف ذهابا وإيابا ، وجنبا إلى جنب لتوزيع الخلايا بالتساوي على السطوح الثقافة مع الحرص على عدم تسرب السائل من كل طبقة. مكدس القوارير.
- يرصد هذا قارورة من مواد واضحة ويمكن بصريا على طبقة الخلايا التي يمكن مشاهدتها بسهولة على مشاركة المجهر.
- بعد وضع موضوع متعدد قارورة مسطحة على سطح العمل ، الصخرة بلطف ذهابا وإيابا ، وجنبا إلى جنب لتوزيع الخلايا بالتساوي على السطوح الثقافة مع الحرص على عدم تسرب السائل من كل طبقة. مكدس القوارير.
- تبادل وسائل الاعلام
- نضح في حين تميل القارورة موضوع إلى اليسار (مزيج من جانب الميناء) مع شعار باتجاهك.
- ثم الميل ، وقارورة متعددة للحق ، والاستمرار في جميع وسائل الإعلام نضح المتبقية.
- إضافة كمية مناسبة من وسائل الإعلام ومتابعة خطوات 1،3-1،7
2.حصاد الخلايا من قوارير ، متعدد
- لفصل الخلايا ، وتصطف قوارير متعددة رأسيا وجلب كل واحد لموقف ميكس (الخطوة 1.2.1). عكس القوارير بلطف مع الرقبة باتجاهك بحيث السماح لوسائل الإعلام لنزيف في الطبقة العليا من متعدد قارورة.
- اضافة الى وجود 5 أو 10 مل غيض من خلال الشفط الرقبة حتى تصل إلى مستوى السائل بالقرب من ميناء المزيج. نضح المتوسطة استنفدت.
- إضافة كاشف تفارق / غسل العازلة وتقديمهم إلى مزيج منصب في الخطوة 1.2.1 ، ثم المضي قدما واتباع الخطوات 1،3-1،7. تحييد مع متوسط نمو / وكيل وتصب تحييد تعليق الخلية في أنبوب المستقبلة أو عكس هذه القارورة أن الخلايا نزيف الطبقة العليا من السفينة وجمع الخلايا باستخدام ماصة 10 مل.
نصيحة : لتعزيز الانتعاش من الخلايا أو الكواشف ، وجلب متعدد قارورة لخلط الموقف (الخطوة 1.2.1) ، عكس اتجاه الرقبة مع المشغل للسماح الصرف كاملة من وسائل الإعلام من حي ل طبقات إلى طبقة أعلى. ثم ، والميل متعدد قارورة عقارب الساعة إلى زاوية 45 درجة (بعيدا عن الميناء مزيج) في حين لا يزال موضوع متعدد قارورة مقلوب. استخدام ماصة (1-10 مل) لجمع أي الكواشف المتبقية.
3. أوصى حجم العمل في قوارير متعددة فالكون
نمو وسائل الإعلام
3 طبقة : 75-150 مل لكل موضوع متعدد قارورة
5 - الطبقة : 125-250 مل لكل موضوع متعدد قارورة
تفارق الوكيل
3 طبقة : ≥ 15 مل لكل موضوع متعدد قارورة
5 طبقة : ≥ 25 مل لكل موضوع متعدد قارورة
نصيحة : بيغن مع حجم الوسيلة المستخدمة في قوارير T - 175 القياسية وضرب من قبل 3 أو 5 مرات اعتمادا على قارورة متعدد الشكل تقييمها بحيث مل في وحدة المساحة لا يزال هو نفسه.
4. ممثل النتائج :
1. تصميم قارورة متعدد فالكون
files/ftp_upload/3418/3418fig1.jpg "/>
. الشكل 1 : ثقافة خلية متعددة قارورة السفن متاحة في 3 -- 5 وطبقة تنسيق تكويم لمدة تصل النطاق من الخلايا توفير 525 و 875 سم 2 مساحة سطح النمو ، على التوالي. بالإضافة إلى ذلك يسهل الوصول ماصة وإزالة الخلايا والكواشف حيز والخروج من السفينة. وجود مزيج من الميناء يسمح للخلط في وعاء السريع وتكافؤ وسائل الاعلام في جميع طبقات متعددة قارورة.
2 الربح باستخدام خلية متعددة قارورة :
هذه السفن موجودة في طبقة - 3 - 5 والأشكال التي تتوافق مع طبقة 3 و 5 أضعاف مساحة سطح T - 175 القوارير. تبعا لذلك ، ≥ 3 و 5 مرات (130 ± 6.8 × 10 6 و 218 ± 23.6 × 10 6 خلايا ، على التوالي) عدد BHK - 21 (طفل الهامستر الكلى) ونمت الخلايا وتعافى من متعددة قارورة مقابل T - 175 قوارير (43.2 ± 3.5 × 10 6 خلايا ؛ Fig.2A). العائد لكل خلية شوكان أحمق مساحة تعادل في 3 -- 5 ، وطبقة وقوارير متعددة T - 175 لقوارير BHK - 21 ، LnCAP (خلية غدية الإنسان البروستاتا الخط) ، والتهاب الكبد - G2 (خط الخلية البشرية سرطانة الكبد) ، EcoPack 2-293 (البشرية الكلى خط الخلية) مثقف لمدة 96h - 48 (Fig.2B) في وسائط النمو (35 مل لكل طبقة) على النحو الموصى به من قبل البائع الخلية (آي تي سي سي ، سيغما و / أو Clontech). وتعداد الخلايا في عداد السادس - CELL الآلي (1).
وقد نمت ثلاثة وخمسة أضعاف عدد الخلايا BHK - 21 وتعافى من 3 -- 5 ، وطبقة موضوع متعدد قوارير مقابل T - 175 قوارير : الشكل 2A. تم تحديد العائد المتوقع باستخدام الخلايا يعني العائد من السيطرة T - 175 قوارير مضروبا ثلاث وخمس مرات عن 3 -- وقوارير موضوع - 5 - طبقة على التوالي (ن = 4 قوارير / الشكل).
2B الشكل : الخليوي العائد لكل سم 2 وتعادل في 3 -- 5 ، وطبقة وقوارير متعددة T - 175 لقوارير BHK - 21 ، LnCAP ، وخلايا HepG2 EcoPack2 - 293. ويمثل كل شريط يعني من 4 الى 6 قوارير. ومثقف ومثقف خلايا BHK - 21 (11،000 cells/cm2) لمدة 72 ساعة ، وخلايا LnCAP (20،000 cells/cm2) والخلايا EcoPack2 - 293 (~ cells/cm2 35000) لمدة 96 ساعة وHepG2 الخلايا (25000 خلية / سم 2 ومثقف) لمدة 48 ساعة قبل الحصاد.
3. التوزيع بين الطبقات وسائل الإعلام المتعددة قارورة
وأضيف إلى 5 طبقات ، متعدد قوارير (250 سفينة mL/5-layer) وتقسيمه إلى طبقات وفقا للبروتوكول المبينة أعلاه ؛ مستنبت الخلية (Invitrogen DMEM). وتم قياس توزيع وسائل الاعلام من خلال حفر ثقوب في كل طبقة وسائل الإعلام التي تضخ من الطبقات الفردية. تم العثور على الوزن من السوائل المستخرجة من كل طبقة لتكون موحدة نسبيا من طبقة الى طبقة كما هو موضح في الشكل رقم 3. وهم على النحو التالي : 510.8 ± 0.73 ، 50.3 ± 0.58 ، 50.21 ± 0.13 ، 49.88 ± 0.35 ، 49.45 ± 0.37 (جم).
الشكل 3. الموحدة وسائل الاعلام توزيع في كل من خمس طبقات قارورة موضوع - 5 - طبقة. وأضيف إلى خلية مستنبت متعدد قوارير (250 سفينة ml/5-layer) ، ومعايرتها المقسمة إلى طبقات الفردية. تم ضخها في وسائل الاعلام من خلال حفر ثقوب في طبقات الفردية والوزن السائل تم تسجيلها من كل طبقة (ن = 6 قوارير).
4. التوزيع بين طبقات الخلايا المتعددة قارورة
يمكن إضافة الخلايا والمختلطة داخل قارورة موضوع. نحن محاكاة التوزيع بين طبقات من الخلايا المتعددة قارورة باستخدام الخرز (10μm ؛ PolySciences شركة) مماثلة في الحجم إلى الخلايا. وأضاف في تعليق حبة قارورة موضوع السفينة التي تستخدم ماصة 10 مل من خلال الطبقة العليا والمختلطة مع وسائل الإعلام في السفينة كما تنازلياribed في البروتوكول أعلاه. وتم قياس توزيع حبة بواسطة حفر ثقوب في كل طبقة والسوائل التي تحتوي على تعليق تم ضخها خارج حبة من طبقات الفردية. وقد قرأ تركيز حبة تعافى من كل طبقة على مكافحة كولتر وتسجيلها. المبينة أدناه هي ما يعادل ما بين طبقة طبقة في التوزيعات حبة - 3 - قوارير موضوع (Fig.4A). مزيج منفذ توزيع متجانس تمكن من الخلايا والكواشف بين طبقات متعددة قارورة.
الشكل 4A : توزيع في كل حبة من ثلاث طبقات من قارورة موضوع - 3 - طبقة. وأضيف تعليق الخرز (3.6 X10 6 / مل) والمتوسطة الاستغناء في قوارير متعددة (حبة تعليق : وسائل الإعلام هو حجم 01:10 ، المجلد : المجلد الأول) ، والمختلطة ، تليها موازنة وخطوات التقسيم باستخدام بروتوكول صفها. وقد قرأ تركيز حبة تعافى من كل طبقة (وسط ضخه عبر حفر ثقوب في كل طبقة) على عدد كولترإيه وتسجيلها. المبينة أدناه هي ما يعادل ما بين طبقة التوزيع في حبة 3 -- طبقة متعددة قوارير (ن = 5 قوارير)
المبينة أدناه هي الصور ممثل أنماط Ecopack تلطيخ 2-293 من الخلايا المزروعة لالتقاء> 80 ٪ على قوارير موضوع - 3 - طبقة النمو في وسائل الإعلام تستكمل. تم إصلاح monolayers الخلية وملطخة البنفسجي الكريستال وانقطعت بعد ذلك متعدد الطبقات وقارورة الصور الممسوحة ضوئيا (2). وقد لاحظ الزخرفة الخلية ، متجانسة في جميع طبقات قارورة ، موضوع (Fig.4B). وتم الحصول على نتائج مماثلة مع العديد من أنواع الخلايا تقييمها (لا تظهر البيانات).
الشكل 4B : هذا الرقم يوضح نمو الخلايا متجانسة بين الطبقات المتعددة قوارير. تم إصلاح Ecopack - 2-293 الخلايا المزروعة لالتقاء> 80 ٪ في 3 طبقة قوارير - T 175 موضوع ووملطخة البنفسجي الكريستال. وقطعت متعددة قارورة السفن وتفحص كل طبقة الملون.
5 امداد الهواء في قارورة ، موضوع :
وكشف تحليل وسائل الاعلام قضى به BioProfile FLEX محلل (3،4) (نوفا الطبية الحيوية) من EcoPack2 - 293 مثقف الخلايا لمدة 96 ساعة لا فرق في تشبع الهواء من الخلايا المزروعة في 5 طبقات متعددة قوارير قوارير T - 175 مقابل (81.03 ± 1.9 مقابل 83.4 ± 5.8 ٪ المحيطة O 2).
وكانت طيران التشبع (٪ المحيطة O 2) وسائل الإعلام أمضى مماثلة في مرحلة ما قبل وسائل الإعلام مختلطة من 5 طبقات متعددة قوارير قوارير مقابل T - 175 : الشكل 5. وكانت المصنفة EcoPack2 - 293 خلايا في مناطق ذات كثافة من 35000 خلية / سم 2 وتربيتها لمدة 96 ساعة قبل لتحليل وسائل الاعلام (ن = 3 قوارير).
Discussion
الدراسة الحالية يدل على زيادة في الإنتاجية التي القارورة موضوع تصميم عروض الباحثين. في حين أنه من المهم أن تتبع الخطوات المذكورة أعلاه للحصول على الأداء الأمثل عند استخدام قوارير متعددة ، وهناك بضع خطوات حاسمة في هذا البروتوكول التي تعتبر الأكثر أهمية. وتشمل هذه (ط) من الخلايا وخلط الكواشف باستخدام مزيج داخل الميناء الباخرة (ب) نقل متعدد قارورة بزاوية 45 درجة في اتجاه عقارب الساعة بعد تقسيم السوائل في كل من طبقات (ج) وضع موضوع متعدد قارورة آخر شقة في التقسيم الحاضنة.
الاستخدام السليم للموضوع متعدد قارورة يؤدي إلى إنتاج مجموعة من السكان داخل كل خلية متجانسة السفينة التي تربيتها في بيئة غير متطابقة إلى T - 175 قوارير (5). هذه السفن توفير خلايا 3 و 5 مرات اكثر في بصمة مشابهة لالقارورة T - 175. السفينة 3 و 5 طبقة يوفر 525 و 875cm 2 من مجالات النمو ، على التوالي ، وتقدم كل من الفضاء وق العملavings للمستخدمين. علاج الأنسجة السطحية الثقافة هي مماثلة لقوارير القياسية مما الحجم من دون الحاجة إلى إعادة تحسين ظروف الثقافة القائمة أو المساومة على جودة ، والتجانس أو أداء الخلايا (6 ، 7). وهذا يوفر أيضا المقارنة مع البيانات التي تم جمعها سابقا. يمكن أن تكون هذه السفن المطلية أيضا مع الكواشف مثل الكولاجين ، فبرونيكتين ، وبولي - D - يسين لتوفير التحتية المتخصصة لتحقيق النمو ، والتمايز مرفق من أنواع الخلايا مثل خلايا الكبد بعض 8 ، 9 kertainocytes ، والخلايا الجذعية التي تزرع في المصل خالية من وسائل الإعلام المستحضرات. ويمكن إزالة الطلاء حلول مع الحد الأدنى من الاحتفاظ السائل المتبقية ، وذلك لتقليل الفاقد من قيمة الكواشف وكذلك إزالة الحل الفعال للطلاء قبل استنبات الخلايا. الموصى بها وسائل الإعلام الأمثل لحجم الخلايا الثقافة في قوارير متعددة تتراوح 0،142-0،287 مل / سم 2 والتي تترجم إلى 25-50 مل لكل طبقة. خلافا آخر قارورة متعدد الطبقات ، رمنتج له مزيجا الميناء في السفينة التي يسمح السريع في وعاء الخلط ، وكذلك توزيع موحد للخلايا والكواشف داخل وبين طبقات من كل سفينة. تم تحجيم خطوط الخلايا المتنوعة والثقافات والخلايا الجذعية الأولية تصل بكفاءة استخدام قوارير متعددة. هذه السفن هي مفيدة بشكل خاص في التطبيقات التي تتطلب عددا كبيرا من الخلايا مثل ارتفاع في الإنتاجية والفرز ، وإنتاج لقاح ، transfections النواقل الفيروسية والعلاج بالخلايا.
وفورات في ، وقت العمل ، والفضاء وخفض توليد النفايات هي المكاسب الرئيسية للقارورة متعدد الثقافات التقليدية في مقابل واحد الطبقات السفن. يمكننا الثقافة حوالي ثلاثة أضعاف عدد الخلايا التي تحصد من 5 ، T - 175 القوارير في نفس المساحة باستخدام 3 و 5 طبقات متعددة قوارير. ولا تقتصر هذه الميزة في توفير مساحة فقط إلى T - 175 ولكن يمكن أيضا أن تمتد إلى سفن أخرى : زجاجة الأسطوانة القياسية التي تناسبها في الأجهزة المشتركة مختبر الحاضنات المنازل ~ 4 رولزجاجات لير (2200 مل) كل منها يوفر مساحة 850cm 2. في نفس المنطقة ، يمكن أن يضم ~ 20 ، 5 طبقات متعددة قوارير وبالتالي توفير خمس مرات على سطح الخلايا لنمو الثقافة. علاوة على ذلك ، مع زيادة في الوعي "الذهاب الخضراء" ، وخيارات لخفض توليد النفايات غير مرغوب فيه للغاية. في هذا الصدد ، هناك 38 ٪ (5 ، T - 175 ~ 640g تزن القوارير في حين واحد ، 5 طبقات متعددة قارورة يزن 400g ~) النقص في توليد النفايات باستخدام قوارير متعددة مقارنة قوارير T - 175 وهذه المزايا تؤدي إلى انخفاض في تخزين النفايات وتكاليف التخلص منها وتحقيق وفورات اقتصادية للمستخدم.
Disclosures
جميع المؤلفين والعاملين في ديكنسون بيكتون ، الجزء العلوم البيولوجية ، وحدة المختبرات الطبية ديسكفري.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 3-layer Tissue Culture-treated 525cm2 | BD Biosciences | 353143 | |
| 5-layer Tissue Culture-treated 875cm2 | BD Biosciences | 353144 | |
| 100ml pipette | BD Biosciences | 357600 | |
| 10 ml pipette | BD Biosciences | 357551 | |
| 5 ml aspirating pipette | BD Biosciences | 357501 | |
| 50 ml Polypropylene conical tube | BD Biosciences | 352070 | |
| T-175 flask Tissue Culture-treated | BD Biosciences | 353028 | |
| Gram Crystal Violet | BD Biosciences | 212525 | |
| DMEM | Invitrogen | 11885 | |
| GMEM | Sigma-Aldrich | G5154 | |
| RPMI-1640 | ATCC | 30-2001 | |
| MEM | ATCC | 30-2003 | |
| Trypsin-EDTA | Lonza Inc. | CC-5012 | |
| Fetal Bovine serum | Invitrogen | 16000-044 | |
| Tryptose Phosphate Broth | Sigma-Aldrich | T8159 | |
| BHK-21 cells | Sigma-Aldrich | 85011433 | |
| Hep-G2, LnCAP | ATCC | ||
| Ecopack 2-293 | Clontech Laboratories | ||
| Paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences | 15710 | |
| Polystyrene Bead | Polysciences, Inc. | 24628-20 | |
| Bio-Profile Flex Analyzer | Nova BioMedical |
References
- Szabo, S. E., Monroe, S. L., Fiorino, S., Bitzan, J., Loper, K. Evaluation of an automated instrument for viability and concentration mesurements of cryopreserved hematopoietic cells. Lab. Hematol. 10, 109-109 (2004).
- Bonnekoh, B., Wevers, A., Jugert, F., Merk, H., Mahrle, G. Colorimetric growth assay for epidermal cell cultures by their crystal violet binding capacity. Arch. Dermatol. Res. 281, 487-487 (1989).
- Sengupta, N., Rose, S. T., Morgan, J. A. Metabolic Flux analysis of CHO cell metabolism in the late non-growth phase. Biotechnol. Bioeng. 108, 83-83 (2010).
- Zhu, M. M., Goyal, A., Rank, D. L., Gupta, S. K. Effects of elevated pCO2 and osmolality on growth of cells and production of antibody–fusion protein B1: a case study. Biotechnol. Prog. 21, (2005).
- Ryan, J. M., Sharf, B. B., Cristofalo, J. The influence of culture medium volume on cell density and life-span of human diploid fibroblasts. Exp Cell Res. 91, 389-389 (2004).
- Flaherty, P. Tips and Techniques for enhancing your cell culture. , http://www.bdbiosciences.com/hotlines/webinars/ondemand/index.jsp (2009).
- Sanyal, S., Abraham, E. J., Slater, K., Cai, A., Lacey, B., Hartshorn, C., Flaherty, P., McHugh, B., Qian, S. Scaling up cells in BD Falcon Cell Culture Multi-Flasks. , http://www.bdbiosciences.com/documents/multiflasks-SBSposter.pdf (2011).
- DiPersio, C. M., Jackson, D. A., Zaret, K. S. The extracellular matrix coordinately modulates liver transcription factors and hepatocyte morphology. Mol. Cell. Biol. 11, 4405-4405 (1991).
- Grose, R., Hutter, C., Bloch, W., Thorey, I., Watt, F. M., Fassler, R., Brakebusch, W. S. A crucial role of β1 integrins for keratinocyte migration in vitro and during cutaneous wound repair. Dev. 129, 2303-2303 (2002).
