الخلايا تلعب دورا أساسيا ومتزايدا في البحث ، واكتشاف وتطوير علاجات جديدة. مع هذه الحاجة المتزايدة لعدد أكبر من الخلايا نحتاج طرقا أكثر كفاءة وفعالية لزراعة وحصاد الخلايا مرفق التابعة. ويمكن للقارورة متعددة المستويات مع ميزات حق خدمة هذا الغرض.
هناك عدد متزايد من التطبيقات المستندة إلى خلية تتطلب أعدادا كبيرة من الخلايا. استخدام طبقة واحدة T – القوارير ، والتي هي كافية خلال توسيع نطاق صغير ، قد تصبح مرهقة ، مجهدة ومضيعة للوقت عندما يطلب أعداد كبيرة من الخلايا. وستناقش لتلبية هذه الحاجة ، وأداء جديد متعدد الطبقات الخلية سفينة الثقافة لتسهيل مقياس سهل مكونة من خلايا من الطبقات واحد T – القوارير. في قوارير اختبار متوفرة في 3 — 5 وشكل طبقة وتمكين الثقافة واستكمال الانتعاش من ثلاثة وخمسة أضعاف عدد الخلايا على التوالي ، مقارنة ب T – 175 القوارير. ومن السمات الرئيسية للقارورة متعدد دينار بحريني هو منفذ مزيج / موازنة تسمح السريع في وعاء الخلط ، وكذلك توزيع موحد للخلايا والكواشف داخل وبين طبقات من كل سفينة ، وتنتج باستمرار الخلايا التي يمكن تربيتها في بيئة غير متطابقة إلى T – 175 القوارير.
تصميم هذه قوارير متعددة كما يسمح للجonvenient الوصول ماصة لإضافة الكواشف والخلايا مباشرة في قوارير ، وكذلك استرداد قيمة كفاءة الخلايا والكواشف ، ويقلل من خطر التلوث نتيجة لسكب. لتقديم الطلبات هو المفضل حيث تتدفق عبر pipetting ، وتصميم ليسمح الحد الأدنى من الاحتفاظ السائل المتبقية وذلك لتقليل الفاقد من الخلايا قيمة والكواشف.
الدراسة الحالية يدل على زيادة في الإنتاجية التي القارورة موضوع تصميم عروض الباحثين. في حين أنه من المهم أن تتبع الخطوات المذكورة أعلاه للحصول على الأداء الأمثل عند استخدام قوارير متعددة ، وهناك بضع خطوات حاسمة في هذا البروتوكول التي تعتبر الأكثر أهمية. وتشمل هذه (ط) من الخلايا وخلط الكواشف باستخدام مزيج داخل الميناء الباخرة (ب) نقل متعدد قارورة بزاوية 45 درجة في اتجاه عقارب الساعة بعد تقسيم السوائل في كل من طبقات (ج) وضع موضوع متعدد قارورة آخر شقة في التقسيم الحاضنة.
الاستخدام السليم للموضوع متعدد قارورة يؤدي إلى إنتاج مجموعة من السكان داخل كل خلية متجانسة السفينة التي تربيتها في بيئة غير متطابقة إلى T – 175 قوارير (5). هذه السفن توفير خلايا 3 و 5 مرات اكثر في بصمة مشابهة لالقارورة T – 175. السفينة 3 و 5 طبقة يوفر 525 و 875cm 2 من مجالات النمو ، على التوالي ، وتقدم كل من الفضاء وق العملavings للمستخدمين. علاج الأنسجة السطحية الثقافة هي مماثلة لقوارير القياسية مما الحجم من دون الحاجة إلى إعادة تحسين ظروف الثقافة القائمة أو المساومة على جودة ، والتجانس أو أداء الخلايا (6 ، 7). وهذا يوفر أيضا المقارنة مع البيانات التي تم جمعها سابقا. يمكن أن تكون هذه السفن المطلية أيضا مع الكواشف مثل الكولاجين ، فبرونيكتين ، وبولي – D – يسين لتوفير التحتية المتخصصة لتحقيق النمو ، والتمايز مرفق من أنواع الخلايا مثل خلايا الكبد بعض 8 ، 9 kertainocytes ، والخلايا الجذعية التي تزرع في المصل خالية من وسائل الإعلام المستحضرات. ويمكن إزالة الطلاء حلول مع الحد الأدنى من الاحتفاظ السائل المتبقية ، وذلك لتقليل الفاقد من قيمة الكواشف وكذلك إزالة الحل الفعال للطلاء قبل استنبات الخلايا. الموصى بها وسائل الإعلام الأمثل لحجم الخلايا الثقافة في قوارير متعددة تتراوح 0،142-0،287 مل / سم 2 والتي تترجم إلى 25-50 مل لكل طبقة. خلافا آخر قارورة متعدد الطبقات ، رمنتج له مزيجا الميناء في السفينة التي يسمح السريع في وعاء الخلط ، وكذلك توزيع موحد للخلايا والكواشف داخل وبين طبقات من كل سفينة. تم تحجيم خطوط الخلايا المتنوعة والثقافات والخلايا الجذعية الأولية تصل بكفاءة استخدام قوارير متعددة. هذه السفن هي مفيدة بشكل خاص في التطبيقات التي تتطلب عددا كبيرا من الخلايا مثل ارتفاع في الإنتاجية والفرز ، وإنتاج لقاح ، transfections النواقل الفيروسية والعلاج بالخلايا.
وفورات في ، وقت العمل ، والفضاء وخفض توليد النفايات هي المكاسب الرئيسية للقارورة متعدد الثقافات التقليدية في مقابل واحد الطبقات السفن. يمكننا الثقافة حوالي ثلاثة أضعاف عدد الخلايا التي تحصد من 5 ، T – 175 القوارير في نفس المساحة باستخدام 3 و 5 طبقات متعددة قوارير. ولا تقتصر هذه الميزة في توفير مساحة فقط إلى T – 175 ولكن يمكن أيضا أن تمتد إلى سفن أخرى : زجاجة الأسطوانة القياسية التي تناسبها في الأجهزة المشتركة مختبر الحاضنات المنازل ~ 4 رولزجاجات لير (2200 مل) كل منها يوفر مساحة 850cm 2. في نفس المنطقة ، يمكن أن يضم ~ 20 ، 5 طبقات متعددة قوارير وبالتالي توفير خمس مرات على سطح الخلايا لنمو الثقافة. علاوة على ذلك ، مع زيادة في الوعي "الذهاب الخضراء" ، وخيارات لخفض توليد النفايات غير مرغوب فيه للغاية. في هذا الصدد ، هناك 38 ٪ (5 ، T – 175 ~ 640g تزن القوارير في حين واحد ، 5 طبقات متعددة قارورة يزن 400g ~) النقص في توليد النفايات باستخدام قوارير متعددة مقارنة قوارير T – 175 وهذه المزايا تؤدي إلى انخفاض في تخزين النفايات وتكاليف التخلص منها وتحقيق وفورات اقتصادية للمستخدم.
The authors have nothing to disclose.
Name of the Reagent/Equipment | Company | Catalogue # | Comments |
3-layer Tissue Culture-treated 525cm2 | BD Biosciences | 353143 | BD Biosciences Cell Culture – BD Falcon Multi-Flasks |
5-layer Tissue Culture-treated 875cm2 | BD Biosciences | 353144 | |
100ml pipette | BD Biosciences | 357600 | |
10 ml pipette | BD Biosciences | 357551 | |
5 ml aspirating pipette | BD Biosciences | 357501 | |
50 ml Polypropylene conical tube | BD Biosciences | 352070 | |
T-175 flask Tissue Culture-treated | BD Biosciences | 353028 | |
Gram Crystal Violet | BD | 212525 | |
DMEM | Invitrogen | 11885 | |
GMEM | Sigma | G5154 | |
RPMI-1640 | ATCC | 30-2001 | |
MEM | ATCC | 30-2003 | |
Trypsin-EDTA | Lonza | CC-5012 | |
Fetal Bovine serum | Invitrogen | 16000-044 | |
Tryptose Phosphate Broth | Sigma | T8159 | |
BHK-21 cells | Sigma | 85011433 | |
Hep-G2, LnCAP | ATCC | ||
Ecopack 2-293 | Clontech | ||
Paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences | 15710 | |
Polystyrene Bead | PolySciences Inc. | 24628-20 | |
Bio-Profile Flex Analyzer | Nova BioMedical |