Celler spiller en instrumental og voksende rolle i forskningen, og opdagelsen og udviklingen af nye lægemidler. Med denne stigende behov for større antal celler, vi har brug for mere effektive måder til dyrkning og høst tilknytning afhængige celler. En multilagdelt kolben med de rigtige funktioner kan tjene dette formål.
Et stigende antal af celle-baserede applikationer kræver et stort antal celler. Brug af enkelt lag T-flasker, som er tilstrækkeligt stor i små ekspansion, kan blive besværlig, møjsommelig og tidskrævende når et stort antal celler er påkrævet. For at imødekomme dette behov, til udførelsen af en ny multi-lag cellekultur fartøj lette nemt skalere op af celler fra en enkelt lag T-kolber vil blive drøftet. Det testede kolber findes i 3 – og 5-lags-format og gøre det muligt for kultur og fuldstændig helbredelse af tre og fem gange så mange celler sammenlignet med T-175 kolber. Et centralt element i BD Multi-Kolbe er en blanding / ligevægt port, der giver mulighed for hurtige in-fartøj blanding samt ensartet fordeling af celler og reagenser inden for og mellem lag af hver beholder og producere ensartede celler, der kan dyrkes i et miljø, er kongruent til T-175 kolber.
Udformningen af disse Multi-Kolber giver også mulighed for Convenient pipette adgang til tilføjelse af reagenser og celler direkte i kolberne samt effektiv inddrivelse af værdifulde celler og reagenser og reducerer risikoen for forurening som følge af at hælde. Til applikationer, hvor hælde er foretrukket frem for pipettering tillader design for minimal residual væske retention, for at mindske spild af værdifulde celler og reagenser.
Den aktuelle undersøgelse viser stigningen i produktiviteten, at Multi-Kolbe design giver forskere. Selv om det er vigtigt at følge trinene ovenfor for optimal ydelse ved brug af Multi-Kolber, der er kun få kritiske skridt i denne protokol, der anses for mest essentielle. Disse omfatter (i) blanding af celler og reagenser ved hjælp af blandingen havn inden skibet (ii) transport af Multi-kolben på en 45 ° vinkel med uret efter partitionering væske ind i hver af de lag (iii) om Multi-Kolbe fladt indlæg opdele i kuvøse.
Korrekt brug af Multi-Kolbe fører til produktion af en homogen cellepopulation inden for hvert fartøj, der er dyrket i et miljø, der er kongruent til T-175 flasker (5). Disse fartøjer tilbyde 3 og 5 gange flere celler i et lignende fodaftryk, som T-175 kolbe. De 3 og 5-lags fartøj giver 525 og 875cm 2 af vækstområde, henholdsvis og tilbyder både plads og arbejdskraft savings til brugerne. Vævskultur Overfladebehandling er sammenlignelig med standard kolber således at opskalering uden behov for re-optimering af eksisterende kultur betingelser eller gå på kompromis med kvalitet, ensartethed eller udførelse af celler (6, 7). Dette giver også mulighed for sammenlignelighed med tidligere indsamlede data. Disse fartøjer kan også belagt med reagenser, såsom collagen, fibronektin, poly-D-lysin til at give et specialiseret substrat for vedhæftet fil, vækst og differentiering af visse celletyper, såsom hepatocytter 8, kertainocytes 9, stamceller dyrket i serum-frie medier formuleringer. Coating løsninger kan fjernes med minimal residual væske retention, for at mindske spild af værdifulde reagenser samt effektiv fjernelse af belægning opløsning før dyrkning af celler. Den anbefalede optimale medielydstyrken til kultur celler i Multi-kolber området fra 0,142 til 0,287 ml / cm 2, hvilket oversættes til 25-50 ml pr lag. I modsætning til et andet lag kolbe, tsit produkt byder på en blanding-havn i det fartøj, der gør det muligt hurtigt in-fartøj blanding samt ensartet fordeling af celler og reagenser inden for og mellem lag af hvert fartøj. Diverse cellelinjer, primære kulturer og stamceller er blevet skaleret op effektivt ved hjælp af Multi-kolber. Disse skibe er særlig fordelagtige i applikationer, der kræver et stort antal celler som i high throughput-screening, produktion af vacciner, viral vektor transfections og celleterapi.
Besparelser i tid, rum, arbejdskraft og reduceret affaldsproduktion er væsentlige gevinster af Multi-Kolbe versus konventionel kulturer i enkelt lag fartøjer. Vi kan kulturen omkring tre gange antallet af celler høstet fra 5, T-175 kolber i samme rum med 3, 5-lags Multi-kolber. Denne fordel i rummet besparelse er ikke begrænset til T-175, men kan også udvides til andre fartøjer: en standard, rulle flaske apparat, der passer til fælles laboratorium væksthuse huse ~ 4 rolLER flasker (2200 ml), som hver giver 850cm 2 overfladeareal. I samme område, kan ~ 20, 5-lags Multi-Kolber anbringes hvilket giver fem gange så væksten overfladen til kultur celler. Desuden, med en stigning i "Go-Green" bevidsthed, er muligheder for at reducere affaldsmængderne særdeles ønskeligt. I den henseende er der en 38% (5, T-175 flasker vejer ~ 640g, mens én, 5-lags Multi-kolbe vejer ~ 400g) fald i affaldsmængderne ved hjælp af Multi-Kolber sammenlignet med T-175 flasker, og disse fordele bly at falde i oplagring af affald og bortskaffelse omkostninger og resultere i økonomiske besparelser for brugeren.
The authors have nothing to disclose.
Name of the Reagent/Equipment | Company | Catalogue # | Comments |
3-layer Tissue Culture-treated 525cm2 | BD Biosciences | 353143 | BD Biosciences Cell Culture – BD Falcon Multi-Flasks |
5-layer Tissue Culture-treated 875cm2 | BD Biosciences | 353144 | |
100ml pipette | BD Biosciences | 357600 | |
10 ml pipette | BD Biosciences | 357551 | |
5 ml aspirating pipette | BD Biosciences | 357501 | |
50 ml Polypropylene conical tube | BD Biosciences | 352070 | |
T-175 flask Tissue Culture-treated | BD Biosciences | 353028 | |
Gram Crystal Violet | BD | 212525 | |
DMEM | Invitrogen | 11885 | |
GMEM | Sigma | G5154 | |
RPMI-1640 | ATCC | 30-2001 | |
MEM | ATCC | 30-2003 | |
Trypsin-EDTA | Lonza | CC-5012 | |
Fetal Bovine serum | Invitrogen | 16000-044 | |
Tryptose Phosphate Broth | Sigma | T8159 | |
BHK-21 cells | Sigma | 85011433 | |
Hep-G2, LnCAP | ATCC | ||
Ecopack 2-293 | Clontech | ||
Paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences | 15710 | |
Polystyrene Bead | PolySciences Inc. | 24628-20 | |
Bio-Profile Flex Analyzer | Nova BioMedical |