कक्ष अनुसंधान में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाई और बढ़ती भूमिका निभाते हैं, और खोज और नई चिकित्सा विज्ञान के विकास. हम लगाव निर्भर कक्षों के लिए बढ़ रही है और कटाई अधिक कुशल और प्रभावी तरीके की जरूरत कक्षों की एक बड़ी संख्या के लिए इस बढ़ती हुई आवश्यकता के साथ. सही सुविधाओं के साथ एक multilayered फ्लास्क इस उद्देश्य की सेवा कर सकते हैं.
सेल आधारित अनुप्रयोगों का एक बढ़ती संख्या कोशिकाओं की बड़ी संख्या की आवश्यकता है. एकल परत टी बोतल, कि छोटे पैमाने पर विस्तार के दौरान पर्याप्त कर रहे हैं का प्रयोग, बोझिल, श्रमसाध्य और समय लेने वाली हो जब कोशिकाओं की बड़ी संख्या की आवश्यकता हो सकता है. इस की जरूरत है पता करने के लिए, एक नया सेल बहुस्तरीय संस्कृति पोत के प्रदर्शन आसान पैमाने को सुविधाजनक बनाने के लिए एकल स्तरित टी बोतल से कोशिकाओं की चर्चा की जाएगी. परीक्षण बोतल 3 में उपलब्ध हैं – और 5 परत प्रारूप और तीन की संस्कृति और पूरी वसूली और पांच बार कोशिकाओं की संख्या क्रमशः सक्षम T-175 बोतल के लिए तुलना में. बी.डी. फ्लास्क मल्टी की एक प्रमुख विशेषता एक बंदरगाह / मिश्रण संतुलन है कि तेजी से पोत की अनुमति देता है और कोशिकाओं के भीतर और प्रत्येक पोत की परतों के बीच अभिकर्मकों के समान वितरण के रूप में मिश्रण के रूप में अच्छी तरह से और लगातार कोशिकाओं है कि एक वातावरण है कि में संवर्धित किया जा सकता है है उत्पादन T-175 बोतल के लिए अनुकूल है.
इन मल्टी बोतल के डिजाइन भी ग के लिए अनुमति देता हैबोतल में सीधे जोड़ने अभिकर्मकों और कोशिकाओं के रूप में के रूप में अच्छी तरह से मूल्यवान कोशिकाओं और अभिकर्मकों के कुशल वसूली के लिए onvenient पिपेट का उपयोग करने के लिए और डालने का कार्य करने के लिए कारण संदूषण का जोखिम कम कर देता है. अनुप्रयोगों में जहां डालने के लिये pipetting अधिक पसंद है के लिए, डिजाइन न्यूनतम अवशिष्ट तरल बनाए रखने के लिए इतनी के रूप में मूल्यवान कोशिकाओं और अभिकर्मकों के अपव्यय को कम करने के लिए अनुमति देता है.
वर्तमान अध्ययन है कि मल्टी फ्लास्क डिजाइन शोधकर्ताओं प्रदान करता है है उत्पादकता में वृद्धि को दर्शाता है. यह के रूप में करने के लिए अनुकूलतम प्रदर्शन के लिए ऊपर उल्लिखित जब मल्टी बोतल का उपयोग चरणों का पालन करें महत्वपूर्ण है, वहाँ है कि सबसे जरूरी माना जाता है इस प्रोटोकॉल में कुछ महत्वपूर्ण कदम हैं. ये (मैं) शामिल कोशिकाओं और अभिकर्मकों पोत (ii) एक 45 ° परतों के प्रत्येक (iii) मल्टी फ्लास्क फ्लैट में विभाजन पोस्ट बिछाने में तरल पदार्थ के विभाजन के बाद दक्षिणावर्त कोण पर मल्टी फ्लास्क परिवहन के भीतर मिश्रण बंदरगाह का उपयोग करने के मिश्रण इनक्यूबेटर.
मल्टी फ्लास्क के समुचित उपयोग प्रत्येक पोत के भीतर एक सजातीय सेल की आबादी है कि एक वातावरण है कि T-175 बोतल (5) के लिए अनुकूल है में सुसंस्कृत है के उत्पादन के लिए होता है. इन जहाजों में एक समान पदचिह्न टी-175 फ्लास्क के रूप में 3 और 5 गुना अधिक कोशिकाओं प्रदान करते हैं. 3 और 5 परत 525 पोत और 875cm विकास क्षेत्र के 2, क्रमशः प्रदान करता है और दोनों अंतरिक्ष और श्रम की पेशकशउपयोगकर्ताओं को avings. टिशू कल्चर भूतल उपचार मानक बोतल इस प्रकार की आवश्यकता के बिना पैमाने अप सक्षम करने के लिए तुलनीय है फिर से अनुकूलन मौजूदा संस्कृति शर्तों या गुणवत्ता, एकरूपता, या कोशिकाओं के प्रदर्शन (6, 7) समझौता. यह भी पहले से एकत्र आंकड़ों के साथ तुलनात्मकता के लिए प्रदान करता है. इन जहाजों को भी कोलेजन जैसे अभिकर्मकों के साथ लेपित किया जा सकता है है, fibronectin, लगाव, विकास, और 8 hepatocytes, 9 kertainocytes, सीरम मुक्त मीडिया में बड़े हो स्टेम कोशिकाओं के रूप में कुछ सेल प्रकार के भेदभाव के लिए एक विशेष बुनियाद प्रदान पाली डी lysine योगों. कोटिंग समाधान न्यूनतम अवशिष्ट तरल प्रतिधारण के साथ इतनी के रूप में मूल्यवान अभिकर्मकों के अपव्यय के रूप में के रूप में अच्छी तरह से कोटिंग के समाधान के प्रभावी हटाने को कम करने के लिए संवर्धन कोशिकाओं से पहले हटाया जा सकता है. सिफारिश मल्टी बोतल रेंज में इष्टतम मीडिया 0.142-0.287 मिलीलीटर / 2 सेमी जो परत प्रति 25-50 मिलीलीटर अनुवाद से संस्कृति कोशिकाओं मात्रा. दूसरे multilayered फ्लास्क, टी के विपरीतअपने उत्पाद पोत है कि पोत और कोशिकाओं के भीतर और प्रत्येक पोत की परतों के बीच अभिकर्मकों के समान वितरण के रूप में मिश्रण के रूप में अच्छी तरह से तेजी से की अनुमति देता है में एक मिश्रण बंदरगाह प्रदान करता है. विविध सेल लाइनों, प्राथमिक संस्कृतियों और स्टेम सेल कुशलता से किया गया है बढ़ाया मल्टी बोतल का उपयोग कर. इन जहाजों अनुप्रयोगों है कि उच्च throughput स्क्रीनिंग, टीका उत्पादन, वायरल वेक्टर transfections और सेल थेरेपी में इस तरह के रूप में कक्षों की एक बड़ी संख्या में मांग में विशेष रूप से लाभप्रद हैं.
समय, स्थान, श्रम, और कम पीढ़ी बर्बादी में बचत एकल स्तरित वाहिकाओं में पारंपरिक संस्कृतियों बनाम मल्टी फ्लास्क की कुंजी जीत रहे हैं. हम संस्कृति में लगभग तीन बार 5 से काटा कोशिकाओं की संख्या कर सकते हैं, एक ही अंतरिक्ष में T-175 बोतल 3 का उपयोग कर, 5 परत मल्टी बोतल. अंतरिक्ष की बचत में यह लाभ केवल T-175 तक ही सीमित नहीं है, लेकिन यह भी अन्य जहाजों के लिए बढ़ाया जा सकता है: एक मानक रोलर बोतल तंत्र है कि आम प्रयोगशाला इन्क्यूबेटरों घरों में फिट बैठता है ~~ 4 roller बोतलों (2200 एमएल) जिनमें से प्रत्येक 850cm 2 सतह क्षेत्र प्रदान करता है. एक ही क्षेत्र में, ~ 20, 5 – परत मल्टी बोतल इस प्रकार संस्कृति कोशिकाओं को पांच गुना वृद्धि की सतह प्रदान रखे जा सकता है. इसके अलावा, "जाओ ग्रीन" जागरूकता में वृद्धि के साथ, पीढ़ी बर्बादी को कम करने के लिए विकल्प उच्च वांछनीय है. उस संबंध में, वहाँ एक 38% है (5, T-175 बोतल, फ्लास्क मल्टी 5 परत 400g ~ वजन जबकि ~ 640g वजन) T-175 बोतल और इन फायदों की तुलना में मल्टी बोतल का उपयोग पीढ़ी बर्बादी में कमी का नेतृत्व अपशिष्ट भंडारण और निपटान लागत और उपयोगकर्ता के लिए आर्थिक बचत में परिणाम में कमी.
The authors have nothing to disclose.
Name of the Reagent/Equipment | Company | Catalogue # | Comments |
3-layer Tissue Culture-treated 525cm2 | BD Biosciences | 353143 | BD Biosciences Cell Culture – BD Falcon Multi-Flasks |
5-layer Tissue Culture-treated 875cm2 | BD Biosciences | 353144 | |
100ml pipette | BD Biosciences | 357600 | |
10 ml pipette | BD Biosciences | 357551 | |
5 ml aspirating pipette | BD Biosciences | 357501 | |
50 ml Polypropylene conical tube | BD Biosciences | 352070 | |
T-175 flask Tissue Culture-treated | BD Biosciences | 353028 | |
Gram Crystal Violet | BD | 212525 | |
DMEM | Invitrogen | 11885 | |
GMEM | Sigma | G5154 | |
RPMI-1640 | ATCC | 30-2001 | |
MEM | ATCC | 30-2003 | |
Trypsin-EDTA | Lonza | CC-5012 | |
Fetal Bovine serum | Invitrogen | 16000-044 | |
Tryptose Phosphate Broth | Sigma | T8159 | |
BHK-21 cells | Sigma | 85011433 | |
Hep-G2, LnCAP | ATCC | ||
Ecopack 2-293 | Clontech | ||
Paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences | 15710 | |
Polystyrene Bead | PolySciences Inc. | 24628-20 | |
Bio-Profile Flex Analyzer | Nova BioMedical |