Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Immunology and Infection

داء الليشمانيات الجلدي في الجلد الظهرية من الهامستر: نموذجا مفيدا لفحص المخدرات مضاد الليشمانيات

doi: 10.3791/3533 Published: April 21, 2012

Summary

تعظيم الاستفادة من نموذج الهامستر تجريبية لداء الليشمانيات الجلدي بواسطة الحقن داخل الأدمة لل

Abstract

تقليديا، يتم تلقيح هامستر تجريبيا في خطم أو قاطع الطريق و. لكن في هذه المواقع قرحة لا يحدث دائما، وقياس حجم الآفة هو إجراء الجاد والحيوانات تظهر صعوبة في تناول الطعام، وتتنفس وتتحرك بسبب الآفة. وجرى تقييم من أجل تحسين نموذج الهامستر لداء الليشمانيات الجلدي، والشباب البالغين من الذكور والإناث الهامستر الذهبي (Mesocricetus auratus) تم حقن intradermally في الجلد الظهري مع 1-1،5 س promastigotes 7 L0 أنواع الليشمانيا وتطور الآفات اللاحقة لمدة تصل إلى إصابة 16 أسبوعا آخر. وقد تم اختيار الهامستر الذهبي لأنها تعتبر كافية للالحيوي نموذج لتقييم العقاقير ضد الليشمانيا كما هي عرضة للإصابة بأنواع مختلفة. عدوى جلدية النتائج الهامستر في الآفات المزمنة ولكن تسيطر عليها، وتطور مع وجود علامات سريرية مشابهة لتلك التي لوحظت لدى البشر. ولذلك، فإن إنشاء سو مدى الإصابة عن طريق قياس حجم الآفة وفقا لمساحة من indurations والقرح هو ممكن عمليا. هذا النهج أثبت تنوعها وسهولة الإدارة خلال التلقيح، ومتابعة وتوصيف آفات نموذجي (القرحة)، وتطبيق العلاج من خلال طرق مختلفة، والحصول على عينات سريرية بعد العلاجات المختلفة. باستخدام هذه الطريقة نوعية الحياة الحيوانية فيما تنقل، والبحث عن الغذاء والماء، واللعب والأنشطة الاجتماعية isalso الحفاظ عليها.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. العدوى من الهامستر

1. الحيوانات

وتستخدم الفطرية الهامستر الذهبي الإناث والذكور (Mesocricetus auratus)، 6-8 أسابيع، وزنها 140-160 ز. ويقيم هؤلاء في منشأة حيوانية، في درجة الحرارة التي تسيطر عليها السكن، التي أطعمت غذاء القوارض معيار المجففة وتزود المياه libitum الإعلانية. تمت الموافقة على جميع الإجراءات التي تنطوي على الحيوانات من قبل اللجنة الأخلاقية المؤسسية للاستخدام على حيوانات التجارب. قبل أن يتم فقت عدوى تجريبية مع موجه للجلد الحيوانات طفيليات الليشمانيا، وضعت موازنة وفقا لإجراءات موحدة. لsexing، ويتم التفتيش عن الحيوانات السمات المميزة مثل تصور خط الثديية وقصيرة الشرج الأعضاء التناسلية للإناث في مسافة، أو تصور الخصيتين وزيادة المسافة بين فتحة الشرج والقلفة عند الذكور. ثم، وتتميز الحيوانات عن طريق ثقب الأذن أو عن طريق تلطيخ منطقة من الجلد مع مسحة غارقةفي حامض البكريك. لثقب الأذن، وبعد نظيفة مع الكحول 70٪ ومثقوب الأذن باستخدام لكمة الأذن للقوارض. ويجب تجنب المنطقة مع الأوعية الدموية. ويوصى تخدير أو تخدير مع 9:01 خليط من الكيتامين (50 ملغ / كلغ)، وXilacine (20 ملغ / كلغ) intraperitoneally في حجم الإبرة 25-260-G 300μl. أخيرا، يتم وزن الحيوانات عن طريق وضعها في فخ أو المربع الذي يشترط على توازن دقيق.

2. طفيليات

Promastigotes أنواع الليشمانيا موجه للجلد، مثل L. الأمازونية، تستزرع في ثنائي الطور نوفي-MacNeal-نيكول الثقافة المتوسطة (NNN) عند 26 درجة مئوية. promastigotes Metacyclic مرحلة (ثابت) (5 أيام) areused لتصيب الهامستر. غسلت لفترة وجيزة، ويتم حصاد الطفيليات، وذلك باستخدام المياه المالحة مرتين الفوسفات عازلة (PBS)، عد وتعديلها ل1 × 10 7 (للذكور) أو 1.5 × 10 7 (للإناث) طفيليات في برنامج تلفزيوني عن 0.1 مل بتلقيح ذكرا أو أنثى، على التوالي،ومع ذلك، قد حجم اللقاح تختلف وفقا لنوع الليشمانيا (الإجراء لا يظهر في شريط الفيديو).

3. عدوى التجريبية

وحلق ذقنه ومنطقة الجلد قبل التلقيح. لفترة وجيزة، وتوضع الحيوانات في موقف المعرضة للتخدير وباستخدام مقص، وتتم إزالة الشعر بوصتين من قاعدة الذيل. بعد تنظيف منطقة حلق مع محلول ملحي معقم يتم حقن اللقاح طفيلي intradermally لحين تشكيل حطاطة.

4. السريرية متابعة

ويتم رصد الحيوانات كل 7 أيام حتى 4 - 6 أسابيع بعد التلقيح لظهور الآفة. قريبا، ويجمد الحيوانات في فخ وتحسس منطقة الجلد تلقيح. ثم، وحددت منطقة متصلبة من قرحة تشكيل ويتم قياس عرض وطول قرحة مع الفرجار الرقمية.

2. علاج الهامستر

1. مشرفistration من المركبات

الجدول الزمني للعلاج يبدأ عند الحيوانات قد وضعت آفات متقرحة (4-6 أسابيع بعد التلقيح). ويتم توزيع الحيوانات في مجموعات من 5-6 الحيوانات في كل مجمع لفحصها. يمكن أن تدار من قبل المركبات الموضعية، والطرق، عن طريق الفم أو الحقن العضلي داخل الآفة. قبل تطبيق المخدرات، جرذان الهامستر هي تخدير ويتم تنظيف منطقة الآفة باستخدام محلول ملحي أو برنامج تلفزيوني. عندما يتم تطبيق المجمع عبر موضعي أو داخل الآفة، وثبتوا على الهامستر في الفخاخ التي تسمح بتعريض المنطقة للعلاج في حين، عندما تتم إدارة المجمع من طريق الفم أو الحقن العضلي يتم تثبيتها بإحكام الهامستر من قاعدة العنق. تطبيق) الموضعية: مجمع isapplied على الآفة وبعد بضع دقائق وعاد الحيوان إلى cage.b) وبالنسبة للطريق الحقن العضلي، يتم حقن المخدرات (200 أقصى ميكرولتر) من خلال العضلات الوترية النصف غشائية النصف أو من الخلف. ج) بالنسبة ادارية عن طريق الفمtration، يتم توفير الدواء للحيوان (200 أقصى ميكرولتر) من خلال التحقيق ووادي الذهب 14G-المعدة متصلة حقنة 1 مل. د) للحقن داخل الآفة يتم حقن الدواء تدريجيا (100 أقصى ميكرولتر) في قاعدة القرحة باستخدام إبرة مقياس 26G مع شطبة وضعت أسفل. وتغطي المنطقة بأكملها من الآفة التي تناوب الإبرة. وتدار العلاجات يوميا خلال 10-20 يوما، وفقا لمخطط العلاجية المحددة.

2. السريرية متابعة

لأنه في هذا النموذج التجريبي يتم تحديد مدى فعالية مضاد الليشمانيات مركبات جديدة وفقا لتضميد الجراح والندوب من الآفات بعد العلاج، ويتم ذلك لرصد السريري كل حيوان الأسبوعية في نهاية تطبيق المجمع وتصل إلى ثلاثة أشهر بعد. خلال الرصد ويوصف نوع الآفة ويتم قياسها ومتصلبة ومنطقة قرحة مع الفرجار الرقمية. وجود الآفات في مناطق مختلفة فييوصف أيضا موقع التلقيح، فضلا عن ظهور حالات الانتكاس الآفة وتسجيلها. مرة كل أسبوعين، ويتم ترجيح الحيوانات والمصورة الآفات. ويلاحظ والحيوانات يوميا لرصد: مظهر) المادية (الشعر، والتنسيق، ودرجة الحرارة، والعيون، والموقف من الأذنين، والاستمالة، والتغوط، وجود سائل الاستسقاء، والتهيج والجفاف) وب) السلوك (، في حالة تأهب مستيقظا، غريبة، ويقظ ، يبقى مع الفريق، وتتطلع إلى الطعام والشراب، ويصعب اللحاق). ويلاحظ أيضا في موقع تطبيق المجمع عن وجود احتقان والالتهابات، وإزالة لاذعة والشعر.

الهامستر هي أيضا بليد في 45 يوما بعد نهاية العلاج لتحديد القيم الدموية والمصلية التي يمكن أن تترافق مع سمية من المركبات (انظر أدناه).

ويتم تقييم فعالية كل معاملة مقارنة أحجام آفة قبل وبعد العلاج، وذلك باستخدام SYST النتيجة التاليةم: الشفاء (الشفاء من المنطقة بنسبة 100٪ واختفاء كامل للآفة)؛ تحسن سريري (تقليل حجم الآفة في 50٪> في المنطقة)، وعدم السريرية (زيادة حجم الآفة)؛ الانتكاس على الآفة بعد العلاج). في نهاية الدراسة، يتم التضحية الحيوانات عن طريق استنشاق التخدير السابقة CO2. بعد الموت، ويتم أخذ العينات المطلوبة للتحليل الطفيلية والنسيجية والمصلية.

3. الطفيليات الامتحانات

وجود الليشمانيا في عينات من الجلد (آفة أو ندبة)، يتم تحديد الكبد والطحال والكلى مباشرة عن طريق فحص مسحات ملطخة بالغيمزا (1) وفحص الأنسجة من هذه الأنسجة (انظر أدناه).

ويقدر العبء طفيلي في موقع الآفة بواسطة الحد فحص تخفيف وفقا لتيتوس وزملاؤه (1985) 2. لفترة وجيزة، تتم إزالة قطعة صغيرة من النسيجمن كل حيوان، وزنه والمتجانس في حل PBS الباردة باستخدام محقنة الغطاس. يتم طرد تعليق الحصول على 600G لمدة 10 دقيقة في 4 درجة مئوية. بعد ذلك، يتم تجاهل supernatants ومعلق الكريات في المتوسط ​​1640 RPMI تستكمل مع المضادات الحيوية 1٪ و 10٪ مصل العجل الجنين. يتم نقل 100 ألف لتر من التعليق على كل من الآبار 96 إلى لوحة تحتوي على microtitre NNN مضافين المتوسطة مع 50 متوسطة شنايدر ميكرولتر وأبقى عند 26 درجة مئوية. ويتحدد عدد الطفيليات قابلة للحياة في كل عينة من أعلى في تخفيف التي يمكن اكتشافها عن طريق الفحص promastigotes تحت مجهر مقلوب كل اسبوع لمدة شهر واحد.

4. Histopathologic فحص من آفة الجلد (أو ندبة) والأنسجة الأخرى

يتم إصلاح قطعة الثالث من خزعة مأخوذة من الكبد والجلد والكلى في 10٪ من الفورمالين، وجزءا لا يتجزأ من parafin. ويمكن أيضا عينة من الطحال والقلب ومعالجتها. Fتم صبغ إيف أقسام ميكرون للأنسجة ثابت مع haemotoxilin-يوزين وفحصها تحت المجهر الضوئي باستخدام 200X، 400X 1000X أو غمر النفط لدراسة الهندسة المعمارية الدقيقة، خصائص الخلوية التسلل، ووجود أو عدم وجود طفيليات. تؤخذ Photomicrographs والتقاط الصور الرقمية.

5. تقييم سمية العلاج

ويستند النشاط السامة للمجمع على الحالة البدنية وسلوك الحيوانات وفقا لمعايير المراقبة السريرية خلال متابعة (انظر أعلاه). كما يتم تحديد سمية وفقا لمعايير الدم والتمثيل الغذائي في عينات الدم والتغيرات النسيجية المرضية التي لوحظت في قطاعات النسيج ملطخة haemotoxilin-يوزين على النحو المبين أعلاه.

وتؤخذ عينات من الدم من القلب، ويفضل أن يكون البطين. إلى اختبار الدم، يتم نقل الدم للأنابيب EDTA anticoagulated وتجهيزها وفقالتوحيد بروتوكولات لتعداد الدم الكامل. إلى اختبارات مصلية، يتم نقل الدم إلى قارورة إيبندورف 1.5 و طرد للحصول على مصل الدم للتحليل التمثيل الغذائي من مستويات الكرياتينين، ALT و BUN تقاس باستخدام كوداك Ektachemdry الكيمياء 3.

6. تحليل البيانات

وتتم مقارنة البيانات من الحيوانات المعالجة وغير المعالجة باستخدام اختبار أنوفا ل. تم تعيين دلالة على <ص 0.05.

4. ممثل النتائج

ملخص

تم تحسين نموذج الهامستر من داء الليشمانيات الجلدي مع الهدف من استخدام هذا النموذج في فحص فعالية الدواء. وتمت دراسة تطور الآفة والمعلمات الطفيلية على العدوى الأولية في الجلد عن طريق الجلد من الفئران البيضاء. تم حقن الفطرية الهامستر الذهبي الإناث والذكور (Mesocricetus auratus)، 6-8 أسابيع، مع intradermally 1 7 10 × (للذكور) أو 1.5 × 10 7 (للإناث) metacyclجيم (الطور الثابت) promastigotes من L. الأمازونية. وبدا العقيدات 20-35 يوما باي، مع تشكيل القرح بعد 4-6 أسابيع بعد باي تأسست عدوى، وevalauted فعالية الأنتيمون الخماسي التكافؤ (اكسيلسيور) على جرعتين. وكانت الفئران البيضاء العشوائية في ثلاث مجموعات من 5 الحيوانات كل وتعامل مع antimoniate meglumine في 80 أو 120 ملغ اكسيلسيور / كيلوغرام يوميا خلال 10 يوما من طريق الحقن العضلي. تمت معالجة المجموعة الثالثة العضل مع برنامج تلفزيوني كما وهمي. وكانت مجموعة من ثلاثة حيوانات غير المعالجة واستخدامها كوسيلة لمراقبة سلبية. وأعقب الاستجابة للعلاج كل 3 شهور حتى بعد انتهاء فترة العلاج.

1. السريرية بالطبع بعد L. الأمازونية العدوى من الهامستر الذهبي (Mesocricetus auratus)

الهامستر المصابة في الجلد الظهري تطوير باستمرار واضح سريريا تقرح في البشرة في 4-6 أسابيع بعد الإصابة. الآفات تبدأ مع عقيدات صغيرة وتقرحات إنهاء هذازيادة في حجم وفقا للوقت في مرحلة ما بعد الإصابة وتصل إلى ما كان يعتبر الحجم الأمثل لتقييم تأثير عقاقير تجريبية من 4 إلى 6 أسابيع بعد العدوى (18،99 إلى 54،7 ملم 2 في 4 أسابيع و 35،55 إلى 92،71 مم 2 في 6 أسابيع) (Figures1، 2). الآفات حافظت قرحة في وقت لاحق واضح لمدة تصل إلى 20 أسبوع بعد العدوى، في الوقت الذي تم إنهاء التجارب (Figure1).

إصابة ل. الأمازونية لا يؤثر على وزن الجسم من الفئران البيضاء التي تختلف من 104،9 إلى 124،69 غرام و 129،71 إلى 134،02 غرام في الهامستر غير المصاب والمصابة، على التوالي (P> 0.05، أنوفا). اكتسبت هذه الحيوانات في المتوسط ​​25،58 ± 5،98٪ من وزن الجسم خلال فترة الدراسة. وكانت القيم سيريتش من المعلمات الأمينية الكرياتينين وألانين ترانسفيراز (ALT) والصيغة الدموية مشابهة لقيم الإشارات في الهامستر المصابة وغير المصابة الليشمانيا. لم يكن سوى كعكة اليوريا النيتروجين (بون) مستوىugmented في 60٪ من الحيوانات المصابة.

تحليل الآفات التشريحية المرضية في الهامستر المصابين L. وأظهرت الأمازونية خلافات تتعلق تلك الحيوانات غير المصابة. بشكل عام، خزعات الجلد من الفئران البيضاء غير مصاب لا تظهر أي رد فعل التهابي أو أي تغيير النسيجية (الشكل 3A)، في حين أن المصابين ل. الأمازونية تطوير التهاب حبيبي وجود وفرة من الضامة التسلل الأدمة (الشكل 3B). الهستوباثولوجية تحليل للأنسجة الفئران البيضاء المصابين L. وأظهرت الأمازونية وتعامل مع antimoniate meglumine بجرعات من اكسيلسيور 80 و 120 ملغ / كغ / يوم خلال 10 يوما التغيرات المصاحبة لعملية العدوى مشابهة لتلك التي لوحظت في السيطرة على المجموعة (المصابة وغير المعالجة). بشكل عام، وأظهرت عينات من الجلد من الفئران البيضاء على مستوى طفيف من plasmocytes (20٪) وPMN (80٪) خلايا يرافقه تسلل المعتدلة من الخلايا الليمفاوية (80٪)، ومعتدل (20٪) أو الشديدة infiltr (80٪)أوجه الضامة (الجدول 2). هذه الملاحظات تتوافق مع تشخيص التهاب الحبيبي، وهو الحدث الذي يعرض للخطر التهاب الأدمة والعضلات تحتاني. هذه هي الآفة الرئيسية المرتبطة للعدوى، والذي يتوافق مع مظهر حاد من داء الليشمانيات الجلدي في جميع الحيوانات في الدراسة. ارتبط إحصائيا هذه الجمعية عندما. خي مربع من بيرسون، والتي أسفرت عن P <0.05 وأظهرت عينات الكلى من 60-100٪ من الحيوانات تضخم معتدل في القشرة الكلوية وglomerules يرافقه ضمور طفيف من الكليتين في 75٪ من الحيوانات. هذه الملاحظات تتفق مع glomerulonefritis غشاء التكاثري، التشخيص الذي ارتبط سابقا للإصابة عن طريق العدوى بواسطة أنواع الليشمانيا الأخرى. وكانت احصائية جمعية كبيرة مع مربع تشي ف بيرسون <0.05. وأظهرت الأكباد من 40-100٪ من الحيوانات في جميع الفئات فجوي التغييرات الطفيفة في خلايا الكبد، والتي قد تكون associatإد إلى العمليات الفيزيولوجية مثل تراكم hepatocytic من الجليكوجين. تشوهات أخرى أنسجة الكبد مثل انحطاط الدهنية، والتليف، واحتقان تتوافق مع عملية العدوى. لا ملاحظات اخرى مثل التغييرات فجوي في خلايا الكبد، cardiomegalies، وجود شوائب من eosinophiles داخل الهيولى، وكذلك تشكل الفجوات من الخلايا في الأنابيب الكلوية المرتبطة إحصائيا (P> 0.05) لتأثير سام للمجمع اختبارها ويرجح نتيجة لعملية الفسيولوجية في الفئران البيضاء.

2. علاجي فعالية من antimoniate meglumine في النموذج الهامستر

وتتلخص النمط الظاهري السريرية للهامستر المصاب في نقاط زمنية مختلفة بعد العلاج في الجدول رقم 1. وكان العلاج مع antimoniate meglumine العضلي بجرعة 120 ملغ اكسيلسيور / كغ / يوم خلال الأيام ال 10 الوزن فعالة للغاية الانحدار حمل كاملة من L. الأمازونية الآفات في جميع الحيوانات (الشكل 4). كانت نسبة الشفاء 100٪ في 2 و 8 أسابيع فترة ما بعد العلاج. ومع ذلك، بعد ثلاثة أشهر لوحظ في انتكاس الآفة في 20٪ من الفئران البيضاء. وعندما كانت تدار meglumine antimoniate على 80 ملغ من وزن الجسم اكسيلسيور / كغم، لوحظ الشفاء التام فقط في 3 الحيوانات. في الحيوانات الآخران انخفضت الآفة بواسطة 33،9٪ و 69،0 على التوالي (الشكل 5). بعد ثلاثة أشهر، L. بقي الأمازونية موجودة في الجلد من كل الحيوانات تعامل مع antimoniate meglumine بجرعة اكسيلسيور 80 ملغ / كغ / يوم واحد فقط من الحيوانات تعامل مع اكسيلسيور 120 ملغ / كغ / يوم من antimoniate meglumine. والجرعة العلاجية من العضل 120 ملغ تم تحديد اكسيلسيور / كغ / يوم خلال 10 يوما.

استخدام فحص تخفيف الحد، وأظهرت ويقدر عدد الطفيليات خفض كبير للتعامل مع مجموعة antimoniate meglumine بالمقارنة مع التحكم (غير المعالجة) السلبية ومركبة (وهمي) المجموعة التي تلقت العلاج (ف <0.001). قابلة للحياة الطفيليات (0،4-1 ، تم الكشف عن الطفيليات في 6 ملغ من أنسجة الجلد) في موقع الآفة من الحيوانات غير المعالجة، وتعامل مع تلك PBS. تم عزل طفيليات فقط من تلك الحيوانات التي لا تستجيب للعلاج مع antimoniate meglumine: حيوان واحد تعامل مع 120 ملغ / كغ / يوم (الشكل 5B) واثنين من هامستر تعامل مع 80 ملغ / كغ / يوم (الشكل 5C). لم يلاحظ أي فرق في حمل الطفيلي من الهامستر الذي لا شفاء بعد تلقيه meglumine antimonite بالمقارنة مع تلك الحيوانات غير المعالجة أو المعالجة مع برنامج تلفزيوني.

في التشريح المرضي من خزعات الجلد من هامستر تعامل مع العضلي meglumine antimoniate في اكسيلسيور 120 ملغ / كغ / يوم أي طفيليات ويلاحظ، وينظر بعض الضامة والخلايا اللمفية التسلل الأدمة (الشكل 6A، 6B). على العكس من ذلك، عندما تم علاج الفئران البيضاء مع antimoniate meglumine في اكسيلسيور 80 ملغ / كغ / يوم، مع وجود التهاب الحبيبي وفيرة من الضامة التسلل الأدمة على نطاق واسع لوحظ (الشكل 6C، 6D).

الطبقة = "jove_step"> 3. سمية

باستخدام نفس البرنامج العلاجي لدراسة فعالية وسمية antimoniate meglumine في 80 و 120 ملغ من وزن الجسم اكسيلسيور / كغ وتقييمها. وتم رصد الحالة الصحية العامة ووزن الجسم تصل إلى 3 أشهر بعد الجرعات الماضي. ولم المعاملة مع لا يؤثر على وزن الجسم من الفئران البيضاء التي تختلف من 104،9 إلى 124،69 غرام و 129،71 إلى 134،02 غرام في الهامستر غير المصاب والمصابة، على التوالي. اكتسبت هذه الحيوانات في المتوسط ​​27،59 ± 4،22٪ من وزن الجسم خلال فترة العلاج و28،74 ± 2،26٪ خلال المتابعة (P> 0.05، أنوفا). لم يكن لوحظ فقدان الوزن في أي مجموعة من العلاج (لا تظهر البيانات). وكانت القيم سيريتش من المعلمات الأمينية الكرياتينين وألانين ترانسفيراز (ALT) والصيغة الدموية مشابهة لقيم الإشارات في الهامستر antimoniate غير المعالجة وmeglumine المعالجة. فقط تم تعزيزه من اليوريا كعكة النيتروجين (بون) في مستوى 20٪ من معاملة الحيوانات.

Histopat hological تحليل للأنسجة الفئران البيضاء المصابين ل. الأمازونية وتعامل مع antimoniate meglumine في جرعة من 80 و 120 ملغ أظهرت اكسيلسيور / كغ / يوم خلال 10 يوما أي تغييرات المرتبطة سمية الدواء.

الجدول 1
منطقة عازلة الفوسفات المالحة، أيام بعد العلاج ب.
الجدول رقم 1. النمط الظاهري السريرية للام الأمازونية المصابة تجريبيا الهامستر بعد العلاج مع antimoniate meglumine

وجرى تقييم فعالية كل معاملة مقارنة أحجام آفة قبل وبعد العلاج، وذلك باستخدام نظام النقاط التالية: علاج (الشفاء من المنطقة بنسبة 100٪ واختفاء كامل للآفة)؛ تحسن سريري (تقليل حجم الآفة في 50٪> في المنطقة)، وعدم السريرية (زيادة حجم الآفة)؛ الانتكاس (تنشيط آفة بعد العلاج).

= "jove_content"> الجدول 2
ج: علامة موجودة؛ NA: لا ينطبق؛ م: معتدل، M: معتدل؛ S: شديد؛ PMN: العدلات النوى، قانون الأمن القومي: لا آفة كبيرة؛ GDM: التهاب الجلد والعضلات الحبيبي؛ PGD: التهاب الجلد Pyogranulomatous. 1. توسع الأوعية اللمفية، 2. بالمعادن مثل المواد.
الجدول 2. التشريح المرضي للجلد من الفئران البيضاء في المختبر بفيروس ل. الأمازونية وتعامل مع antimoniate meglumine

الشكل 1
الشكل 1. مسار التنمية الآفة الجلدية بعد إصابة في تلقيح الفئران البيضاء intradermally مع 1-1،5 س ل 7 10 metacyclic الأمازونية (الطور الثابت) promastigotes خلال 20 أسبوعا. المحور ص يمثل منطقة قرحة في مم.

الشكل 2
الشكل 2. Photogتاريخ raphyic تطور آفة متقرح في الجلد الظهري من الهامستر الذهبي بعد تلقيح داخل الأدمة من 10 × 10 7 2 أسابيع في (أ) و 4 أسابيع (ب) و 6 أسابيع (ج).

الشكل (3)
الشكل 3 خزعة الجلد من (أ) الهامستر غير مصاب وغير المعالجة: يتم رصد أي رد فعل للالتهابات لا تغيير النسيجي الكبير، (ب) الهامستر المصابة وغير المعالجة: التهاب الجلد الحبيبي مع وجود خلايا عملاقة multinucleated (السهم زائد النجمة) والطفيليات وفيرة (أسود سهام) والضامة (السهام البيضاء) بالتسلل إلى الأدمة. هيماتوكسيلين-400X يوزين وصمة عار.

الشكل 4
الشكل 4. التاريخ المصور للاستجابة السريرية للهامستر المصابين ل. الأمازونية وتعامل مع العضلي meglumine antimoniate في اكسيلسيور 120 ملغ / كغ / يوم الزيتو ز 10 يوما. الصور توضح ظهور الآفة قبل العلاج (أ)، في نهاية العلاج (يوم 10) (ب)، وأثناء المتابعة: لمدة 30 يوما (ج) و 60 (د) و 90 (ه) بعد علاج.

الشكل 5
الشكل 5. فعالية antimoniate meglumine في علاج داء الليشمانيات الجلدي في الفئران البيضاء. أصيب الهامستر الذهبي مع L. الأمازونية في الجلد الظهري. بعد 6 أسابيع من العدوى كانوا غير المعالجة (أ) أو علاجها عضليا خلال عشرة أيام مع وحده في برنامج تلفزيوني (ب)، meglumine antimoniate 120 ملغ اكسيلسيور / كغ / يوم (ج) أو 80 ملغ اكسيلسيور / كغ / يوم (د). الرسوم البيانية تظهر النسبة المئوية للانخفاض في حجم الآفة في نهاية العلاج (يوم 0)، وفي أيام 15، 30، 60 و 90 من المتابعة بعد نهاية العلاج. P <0.001 مقابل 120 أو 80 ملغ اكسيلسيور / كغ / يوم العلاج مقابل السيارة وليس.

"/>
الشكل 6. خزعة الجلد من الفئران البيضاء المصابة وعلاجها مع antinmoniate megumine العضلي في اكسيلسيور 120 ملغ / كغ / يوم (أ، ب) و 80 ملغ اكسيلسيور / كغ / يوم (ج، د). وجود الضامة النادرة والخلايا اللمفية التسلل الأدمة. لم يلاحظ أي طفيليات. هيماتوكسيلين-200X Eosine صمة عار (أ)، 1000x (ج) والتهاب الجلد الحبيبي مع وجود وفرة من الضامة التسلل الأدمة على نطاق واسع (ج)؛. الضامة مزبدة مع طفيليات phagocyted. هيماتوكسيلين-200X Eosine صمة عار (ب)، 1000x (د).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

داء اللايشمانيا الجلدي متوطن في المناطق الاستوائية والمناطق شبه المدارية. وغالبا ما يشار إليها باسم مجموعة من الأمراض بسبب هذا الطيف المتنوع من المظاهر السريرية، والتي تتراوح ما بين عقيدات جلدية صغيرة لإجمالي تدمير الأنسجة المخاطية. أكثر الأدوية المتاحة هي مكلفة وتتطلب علاجية طويلة واصبحت غير فعالة بشكل متزايد، مما يحتم اكتشاف أدوية جديدة.

ويستخدم على نطاق واسع في نموذج الفأر ولكن لديه بعض العيوب. وهكذا على سبيل المثال، على أساس من الآفة التي وضعت بعد الحقن داخل الأدمة للpromastigotes أنواع الليشمانيا موجه للجلد، يمكن تقسيم الفئران إلى ثلاث مجموعات: أ عرضة للعدوى المستمرة التي تتميز آفة 1 متقرحة التوسع كما رأينا في BALB / ج و ديسيبل / 2، ديسيبل / 3 الفئران، مجموعة مقاومة الآفات نسبيا حيث قد حل في غضون 8 أسابيع، كما ينظر في CBA / H، C3H/He وألف J / ومجموعة شديدة المقاومة التي لا آفة حقيقية typiكال من داء الليشمانيات الجلدي في حقن كما رأينا في NZB وC57BL / 4 6 الفئران. وعلى النقيض من نموذج الفئران من داء الليشمانيات الجلدي حيث مسار المرض تختلف بشكل ملحوظ بين مختلف مشترك سلالات الفئران والأنواع الفطرية الليشمانيا، الهامستر الذهبي، ويعتبر Mesocricetus auratus وكاف الحيوي نموذج لتقييم العقاقير ضد الأنواع الليشمانيا كما هي عرضة للإصابة بأنواع مختلفة من الليشمانيا. 5،6،7،8،9،10،11،12،13،14. تلقيح promastigotes (الطور الثابت) metacyclic من أي من أنواع الليشمانيا موجه للجلد هي قادرة على أن تسبب آفات جلدية بين واحد وشهرين تطعيم آخر. الآفات تصبح واضحة 20 يوما باي بشكل حطاطات التي تطورت لاحقا والعقيدات، إلى قرحة. تبعا لموقع الإصابة (PE الخطم، foodpad، الأذن أو الذيل قاعدة) الهامستر يعرض تطور مرض يمكن التنبؤ به بعد الإصابة التجريبية، فإن معظم اله وقت يتسم وضع الآفة المزمنة المحلية متقرح مماثلة لتلك التي لوحظت في البشر مع داء اللايشمانيا الجلدي. لكن، وكما في البشر، والآفات في أحجام متنوعة تبعا لحالة جهاز المناعة لكل فرد، وبالتالي، في بعض الفئران البيضاء ويمكن ملاحظة محاولة لإيجاد حل الآفة والحد بالتالي من حجم الآفة.

على الرغم من أن توضح هذه المقالة عدوى تجريبية في جلد ظهري من الهامستر باستخدام promastigotes من L. amazonesis، هذا النموذج هو أيضا ممكنا بالنسبة لغيرها من الأنواع الليشمانيا موجه للجلد، وتغيير فقط في حجم اللقاح. وباختصار، فإن نهج من الحقن داخل الأدمة للpromastigotes الى جلد ظهري يدل على أن ملامح عيادة والمرضية لداء اللايشمانيا الجلدي الناجم في الجلد الظهري من الهامستر تتشابه إلى الأمراض التي تصيب البشر. بالإضافة إلى ذلك، السريرية متابعة القرحة بعد العلاج مع مركبات معينة أو دومما يسهل البسط في هذا النموذج من CL التي يسببها في جلد ظهري. ويحدد بسهولة تطور الآفات من خلال مقارنة حجم الآفة التي تم الحصول عليها قبل وبعد العلاج. ويتبع بسهولة الاستجابة السريرية من حيث العلاج وفقا لإعادة الاندمال بتشكل النسيج الظهاري (كما رأينا في الشكل 4). نخلص إلى أن العدوى التجريبية في الجلد الظهري من الهامستر مع أنواع الليشمانيا يمثل نموذجا مفيدا للتحقق من صحة المحتملة من المركبات التي مرشحون للأدوية مضاد الليشمانيات.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Acknowledgments

وأيد هذه الدراسة من المنح المقدمة من لجنة البحوث في جامعة انتيوكيا (CODI)، والمعهد الكولومبي للتنمية للعلوم والتكنولوجيا - COLCIENCIAS ومركز تطوير المنتجات ضد أمراض المناطق المدارية - CIDEPRO.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Ketamine Reagent Holliday –Scott S.A
Xilacine Reagent Synthesis
PBS Reagent GIBCO, by Life Technologies 14190-136
Digital caliper Equipment Fisher Scientific 15-077-958
Giemsa Reagent Sigma-Aldrich GS1L-1L
Formalin Reagent Nova lab 11273
Paraffin Reagent Pechiney Plastic Packaging PM-996
Haemotoxilin Reagent Nova lab 10870103
Eosin Nova lab 10870203
Kodak Ektachem dry chemistry Equipment Kodak Ektachem DT-60
meglumine antimoniate Reagent Aventis
Microscopy Equipment Nikon Instruments YS2-T

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. WHO. Control of the leishmaniasis. Report of a Meeting of the WHO Expert Committee on the Control of Leishmaniasis WHO. 949, (2010).
  2. Titus, R. G., Marchand, M., Boon, T., Louis, J. A. A limiting dilution assay for quantifying Leishmania major in tissues of infected mice. Parasite Immunol. 7, 545-555 (1985).
  3. Reynolds, K. M. The Kodak Ektachem dry layer technology for clinical chemistry. Upsala. J. Med. Sci. 91, 143-146 (1986).
  4. Handman, E., Ceredig, R., Mitchell, G. F. Murine cutaneous leishmaniasis: disease patterns in intact and nude mice of various genotypes and examination of some differences between normal and infected macrophages. Australian J. Exp. Biol. Med. Sci. 57, 9-29 (1979).
  5. Hanson, W., Chapman, W., Waits, V., Lovelace, J. Development of Leishmania (Viannia) panamensis lesions and relationship of numbers of amastigotes to lesion area antimony-treated and untreated hamsters. J. Parasitol. 77, 780-783 (1991).
  6. Henao, H. H., Osorio, Y., Saravia, N. G., Gómez, A., Travi, B. Efficacy and toxicity of pentavalentantimonials (Glucantime and Pentostam) in an American cutaneous leishmaniasis animal model: luminometry application. Biomédica. 24, 393-402 (2004).
  7. Travi, B. L., Martinez, J. E., Zea, A. Antimonial treatment of hamsters infected with Leishmania (Viannia) panamensis: assessment of parasitological cure with different therapeutic schedules. Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 87, 567-569 (1993).
  8. Hommel, M., jaffe, C. L., Travi, B., Milon, G. Experimental models for leishmaniasis and for testing anti-leishmanial vaccines. Ann. Trop. Med. Parasitol. 89, 55-73 (1995).
  9. Travi, B. L., Osorio, Y., Saravia, N. G. The inflammatory response promotes cutaneous metastasis in hamsters infected with Leishmania (Viannia) panamensis. J. Parasitol. 82, 454-457 (1996).
  10. Travi, B. L., Osorio, Y. Failure of Albendazole as an alternative treatment of cutaneous Leishmaniasis in the hamster model. Memorias Instituto Oswaldo. 93, 515 (1998).
  11. Travi, B. L., Osorio, Y., Melby, P. C., Chandrasekar, B., Arteaga, L., Saravia, N. G. Gender is a major determinant of the clinical evolution and immune response in hamsters infected with Leishmania spp. Infect Immun. 70, 2288-2296 (2002).
  12. Osorio, Y., Melby, P. C., Pirmez, C., Chandrasekar, B., Guarín, N., Travi, B. L. The site of cutaneous infection influences the immunological response and clinical outcome of hamsters infected with Leishmania panamensis. Parasite Immunol. 25, 139-148 (2003).
  13. Osorio, Y., Bonilla, D. L., Peniche, A. G., Melby, P. C., Travi, B. L. Pregnancy enhances the innate immune response in experimental cutaneous leishmaniasis through hormone-modulated nitric oxide production. J. Leukoc. Biol. 83, 1413-1422 (2008).
  14. Espitia, C. M., Zhao, W., Saldarriaga, O., Osorio, Y., Harrison, L. M., Cappello, M., Travi, B. L., Melby, P. C. Duplex real-time reverse transcriptase PCR to determine cytokine mRNA expression in a hamster model of New World cutaneous leishmaniasis. BMC Immunol. 22, 11-31 (2010).
داء الليشمانيات الجلدي في الجلد الظهرية من الهامستر: نموذجا مفيدا لفحص المخدرات مضاد الليشمانيات
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Robledo, S. M., Carrillo, L. M., Daza, A., Restrepo, A. M., Muñoz, D. L., Tobón, J., Murillo, J. D., López, A., Ríos, C., Mesa, C. V., Upegui, Y. A., Valencia-Tobón, A., Mondragón-Shem, K., RodrÍguez, B., Vélez, I. D. Cutaneous Leishmaniasis in the Dorsal Skin of Hamsters: a Useful Model for the Screening of Antileishmanial Drugs. J. Vis. Exp. (62), e3533, doi:10.3791/3533 (2012).More

Robledo, S. M., Carrillo, L. M., Daza, A., Restrepo, A. M., Muñoz, D. L., Tobón, J., Murillo, J. D., López, A., Ríos, C., Mesa, C. V., Upegui, Y. A., Valencia-Tobón, A., Mondragón-Shem, K., RodrÍguez, B., Vélez, I. D. Cutaneous Leishmaniasis in the Dorsal Skin of Hamsters: a Useful Model for the Screening of Antileishmanial Drugs. J. Vis. Exp. (62), e3533, doi:10.3791/3533 (2012).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter