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Immunology and Infection

햄스터의 지느러미 피부에 피부 Leishmaniasis : Antileishmanial 약물의 상영을위한 유용한 모델

doi: 10.3791/3533 Published: April 21, 2012

Summary

의 intradermal 주입하여 피부 leishmaniasis에 대한 실험 햄스터 모델의 최적화

Abstract

전통적으로, 햄스터는 실험적으로 주둥이이나 노상 강도에 주사한다. 그러나 이들 사이트에 궤양이 항상 발생하지, 병변 크기의 측정이 어려운 절차이며 동물 때문에 병변으로 인해 먹고 호흡하며 이동하기 어려움을 보여줍니다. 피부 leishmaniasis, 젊은 성인 남성과 여성의 골든 햄스터를위한 햄스터 모델을 최적화하기 위해서는 (Mesocricetus auratus) 1-1.5 X L0 7 Leishmania 종의 promastigotes 이후 병변의 진행과 함께 지느러미 피부에 intradermally 주입되었다이 최대에 대한 평가되었다 16주 게시물 감염. 그들은 다른 종족에 의해 감염에 감염될만큼 그것이 Leishmania 상대로 마약을 평가할 바이오 모델이 적절한 것으로 간주되기 때문에 골든 햄스터가 선택되었다. 만성하지만 제어 병변, 그리고 인간에서 관찰 이들과 유사한 증상과 임상 진화의 햄스터 결과의 피부 감염. 따라서 식당 Oindurations 및 궤양의 면적에 따라 병변의 크기를 측정하여 감염의 F 정도는 가능합니다. 이러한 접근 방식은 접종시의 다양성과 쉬운 관리를 입증되었습니다 다른 치료 후 임상 샘플을 다른 방법과 취득을 통해 전형적인 병변 (궤양), 트리 트먼트의 응용 프로그램을 후속 조치 및 특성. 이 방법은 운동과 관련하여 동물의 삶의 질, 음식, 물, 놀이와 isalso가 보존 사회 활동에 대한 검색을 사용함으로써.

Protocol

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1. 햄스터의 감염

1. 동물

1백40-1백60g 무게 탐욕 암컷과 수컷 골든 햄스터 (Mesocricetus auratus), 6-8 주 동안 사용됩니다. 그들은 표준 설치류 말린 음식을 먹지 않나와 물 광고 libitum 함께 제공, 온도 제어 숙소에서 동물 시설에서 지내게됩니다. 동물과 관련된 모든 절차는 실험 동물의 이용 기관 윤리위원회의 승인을하고 있습니다. dermotropic Leishmania의 기생충 동물과 실험적인 감염이 sexed되기 전에, 표시 및 표준화된 절차에 따라 가중치를. sexing 들어, 동물 등 mammary 라인과 여성의 짧은 ano-생식기 거리 시각화, 또는 고환과 남성의 항문과 포피 사이에 큰 거리의 시각화와 같은 고유한 특징에 대해 검사되었습니다. 그런 다음, 동물 귀 피어싱이나 배어 면봉으로 피부의 면적을 더럽히는 것에 의해 표시됩니다피크르산 인치 고막 천공의 경우 70 % 알코올로 세척 후 청력은 설치류 동물을위한 귀 펀치를 사용하여 뚫었있다. 혈관이있는 지역은 피해야한다. 케타민을 (50 밀리그램 / ㎏)과 Xilacine (20 밀리그램 / ㎏) 260-300μl 25-G 바늘의 볼륨에 intraperitoneally의 혼합 9시 1분과 진정 작용이나 마취 권장합니다. 마지막으로, 동물 정밀 균형을 조건으로하는 트랩이나 상자에 그들을 배치하여 무게가있다.

2. 기생충

같은 L. 같은 dermotropic Leishmania 종의 Promastigotes, amazonensis는, 26에서 biphasic Novy-MacNeal-Nicolle (NNN) 배지에서 배양해있다 ° C. Metacyclic (고정) 위상 promastigotes이 (5 일) 햄스터를 감염 areused. 간단히, 기생충이 수확되고, 두 남녀 각각 inoculating위한 계산 및 0.1 ML PBS 1 × 10 7 (남성의 경우) 또는 1.5 × 10 7 (암컷)을 기생충으로 조정 인산염 완충 식염수 (PBS)를 사용하여 세척하지그러나 inoculums 크기는 Leishmania 종 (프로 시저 동영상에 표시되지 않음)에 따라 다를 수 있습니다.

3. 실험 감염

피부 지역은 접종 전에 면도있다. 간단히, anesthetized 동물 발생하기 쉬운 위치에 배치하고 가위를 사용하고, 머리 꼬리 기지에서 두 인치 제거됩니다. 구진이 형성되기 전까지 멸균 생리 식염수로 면도 면적을 정리하면 기생충의 inoculum는 intradermally 주입됩니다.

4. 임상은 후속

동물은 4 개까지 칠일마다 모니터링 - 6 주 병변의 모양에 대한 접종 후. 곧, 동물 트랩에서 고정화되고 주사 피부 영역 palpated 있습니다. 그런 다음, 형성 궤양의 단단하게 됨 영역 delineated되고 넓이와 궤양의 길이는 디지털 캘리퍼스로 측정합니다.

2. 햄스터의 치료

1. 관리자화합물의 istration

동물 ulcerated 병변 (4-6주 후 접종)를 개발하면 치료 일정이 시작됩니다. 동물 테스트를 각 화합물에 대해 5-6 동물의 그룹으로 배포됩니다. 화합물은 국소, 경구, 근육내 또는 intralesional 노선에서 관리하실 수 있습니다. 약품의 신청 전에 햄스터가 anesthetized이며 병변 지역은 생리 식염수 또는 PBS를 사용하여 청소합니다. 화합물은 국소 또는 intralesional 통해 적용되면 햄스터는 화합물은 구두 또는 근육내 노선에서 관리하면 햄스터가 안전하게 목 기지에 의해 착용하고있는 동안 치료 영역에 노출 해주 트랩 꼼짝 못하고있다. ) 연고제 응용 : 화합물 병변에 isapplied하고 몇 분 후에 동물 근육내 주사의 경우) cage.b에 반환되는 약물은 엉덩이쪽에의 semitendinous 또는 semimembranous 근육을 통해 (200 μl 최대) 주입하고 있습니다. C) 구두 adminis 위해tration은 약물은 한 ML의 주사기에 연결된 오로 - 위산이 프로브 14G 통해 동물 (200 μl 최대)로 제공됩니다. D) intralesional 주입의 경우 약물 (100 μl 최대)이 점차 아래로 배치 베벨과 26G 게이지 바늘을 사용하여 궤양의 기지에 주입된다. 병변의 전체 면적은 바늘의 회전에 의해 덮여있다. 트리 트먼트는 정의된 치료 계획에 따르면 10-20 일 동안 매일 실시하고 있습니다.

2. 임상은 후속

이 실험 모델에서 새로운 antileishmanial 화합물의 효과는 치료 후 병변의 치유와 흉터에 따라 결정되기 때문에, 각 동물의 임상 모니터링 후 화합물 및 최대 3 개월 신청의 끝에 주간 이루어집니다. 모니터링하는 동안 디지털 캘리퍼스로 병변의 종류가 설명되고 단단하게 됨 및 궤양 영역이 측정됩니다. 로 다른 지역에서 병변의 존재접종 사이트뿐만 아니라 병변의 relapses의 모양도 설명하고 등록됩니다. 매 2 주 동물 가중치를하고 병변이 사진에 있습니다. 동물을 모니터링하기 위해 매일 관찰됩니다) 신체적인 외모 (귀의 머리, 조정, 온도, 눈, 위치, 정리, 깨끗하게 함, ascitic 유체의 존재, 교반 및 탈수)와 b) 행동 (정신, 경보, 호기심, 세심한 ,), 그룹과 유지 잡는 음식과 음료, 그리고 하드를 기대 보인다. 화합물의 응용 프로그램의 사이트는 또한 충혈, 염증, 그리고 공격적인 헤어 제거의 존재를 관찰한다.

햄스터는 화합물의 독성 (아래)과 관련된 수 hematological 및 serological 가치를 결정하기 위해 치료가 끝난 후에도 일 45도 없어져야합니다.

각 치료의 효과는 다음과 같은 점수 syst를 사용하여 병변 크기 사전 및 치료 후 비교 평가하고 있습니다그놈 : (100 % 지역과 병변의 완전한 실종의 치료) 치료, 임상 개선 (영역의> 50 %에서 병변의 크기를 줄이는), 임상 실패 (병변의 크기를 증가), 재발 병변의에 치료 후). 연구의 끝에서 동물 이산화탄소 이전 마취의 흡입에 의해 희생된다. 죽은 후에, parasitological histological 및 serological 분석에 필요한 시료 찍습니다.

3. Parasitological 시험

피부 (병변 또는 흉터)에서 샘플에 Leishmania의 존재는, 간, 비장 및 신장은 Giemsa 1과 이들 조직의 histopathological 심사 (아래) 물들일 얼룩을 검사하여 직접 결정됩니다.

병변 사이트의 기생충 부담은 딛 및 동료 (1985) 2에 따라 제한 희석 분석에 의해 추정된다. 간단히, 조직의 작은 조각이 제거됩니다각 동물에서 무게와 주사기 플런저를 사용하여 차가운 PBS 용액으로 균질. 얻은 현탁액은 4 ° C.에 10 분 동안 600g에 centrifuged합니다 이후 supernatants은 폐기되고 쥐똥이 1 % 항생제와 10 % 태아 송아지 혈청 보충 RPMI 1640 배지에 resuspended됩니다. 정지 백 나는 50 μl 슈나이더의 매체로 NNN 중간 오버레이를 포함 microtitre 접시에 96 우물 각각에 양도 26으로 유지됩니다 ° C. 각 샘플에서 가능한 기생충의 수는 promastigotes는 한 달 동안 매주 거꾸로 현미경 검사에 의해 감지 수되는 최고 희석으로 결정됩니다.

4. Histopathologic 피부 병변의 심사 (또는 흉터) 및 기타 조직

피부, 간 및 신장에서 가져온 생검 표본의 3 분의 1 조각은 포르말린 10 %로 고정되어 parafin에 모두 담겨있다. 비장과 심장의 시료도 처리할 수 있습니다. F고정 조직의 필자 마이크론 섹션은 haemotoxilin-eosin 물들일와 마이크로 아키텍처 침투해 세포의 특성, 그리고 기생충의 유무를 공부 200X, 400X 또는 1000X 기름 침지를 사용하여 광학 현미경으로 조사되었다. Photomicrographs이 촬영한 디지털 이미지를 캡처합니다.

5. 치료 독성 평가

화합물의 독성 활동 (위 참조) 후속 임상 기간 동안 모니터링 매개 변수에 따라 동물의 신체 및 행동 상태에 따라 달라집니다. 독성은 또한 혈액 샘플을하고 위에서 설명한 haemotoxilin-eosin 물들일 조직 섹션에서 관찰 histopathological 변경 hematological과 신진 대사 매개 변수에 따라 결정됩니다.

혈액 샘플은 심장, 기왕이면 뇌실에서 가져옵니다. hematological 시험, 혈액은 EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) anticoagulated 튜브로 전송하고 따라 처리됩니다완전한 혈액 검사를위한 프로토콜을 표준화합니다. serological 테스트하려면, 혈액은 1.5 eppendorf 튜브로 전송하고 코닥 Ektachemdry 화학 3을 사용하여 측정한 크레아티닌, Alt와 롤빵 수준의 신진 대사 분석을 위해 혈청을 얻기 위해 centrifuged있다.

6. 데이터 분석

치료 및 치료 동물로부터 데이터가 ANOVA의 시험을 사용하여 비교하​​고 있습니다. 의의는 P <0.05로 설정됩니다.

4. 대표 결과

개요

피부 leishmaniasis의 햄스터 모델은 약물 효능 검사에서이 모델을 사용하는 목적으로 향상되었다. 병변 개발 및 parasitological 매개 변수는 햄스터의 피부 피부에 일차 감염시 공부했다. 탐욕 암컷과 수컷 골든 햄스터 (Mesocricetus auratus), 6-8 주 동안, 1 × 10 7 (남성의 경우) 또는 1.5 × 10 7 (암컷)을 metacycl로 intradermally 주입되었다L.의 IC (고정 상) promastigotes amazonensis. Nodules 20 등장 - 35일 PI, 감염이 설립되면 두 개의 복용시 pentavalent 안티몬 (SbV)의 효능이 evalauted되었다 파이 4-6주 후에 형성 궤양과 함께. 햄스터는 5 동물 각각의 세 그룹으로 무작위 있었고, 근육내 경로로 10 일 동안 80 또는 120 밀리그램 SbV / kg 일상에서 meglumine의 antimoniate로 치료. 세 번째 그룹은 위약으로 PBS로 intramuscularly 취급합니다. 세 동물들의 그룹 치료와 부정적인 제어로 사용했다. 각 치료에 대한 반응은 3 개월 치료 기간이 종료된 후에 다음되었다.

1. L. 후 임상 과정 골든 햄스터 (Mesocricetus auratus)의 amazonensis 감염

등 부분의 피부에 감염된 햄스터가 지속 감염 후 4~6주에서 표피의 임상 분명 ulceration을 개발합니다. 조직 손상이 작은 nodules 및 종료 궤양으로 시작하는시간 이후의 감염에 따라 크기가 증가하며 (4 주일 18,99까지 54,7 mm 2 및 사후 감염 여섯째 주일 번째로 실험적 약물의 효과 평가를위한 최적의 크기는 고려했는지 도달 6주에서 35,55로 92,71 mm 2) (Figures1, 2). 병변은 이후 실험이 종료되었다 어떤 시간에 최대 20 주 이후의 감염에 대한 분명 위궤양, (Figure1)을 유지했습니다.

L.에 의한 감염 amazonensis은 104,9에서 각각 124,69 GR과 감염되지 않은 그리고 감염된 햄스터에서 129,71로 134,02 GR (P> 0.05, Anova)에 다양한 햄스터의 체중에 영향을주지 않습니다. 동물 연구 중에 25,58의 평균 ± 몸무게의 5,98 %를 얻었다. 크레아티닌과 알라닌 아미노 transferase (ALT) 및 hemogram 매개 변수의 seric 값은 감염되지 않은 그리고 Leishmania 감염된 햄스터의 참고 문헌 값과 유사했다. 만 찬의 우레아 질소 (롤빵) 수준이었다감염된 동물의 60 %에 ugmented.

L.에 감염된 햄스터에서 병변의 Histopathological 분석 amazonensis 그 감염되지 않은 동물에 관한 차이를 보여주었다. 이들은 L. 감염 반면, 일반적으로 감염되지 않은 햄스터의 피부 biopsies도, 염증 반응이나 histological 변경 (그림 3A)를 보여주지 amazonensis은 granulomatous 피부염과 진피 (그림 3B)를 침투 macrophages의 풍부한 존재를 개발할 수 있습니다. L.에 감염된 햄스터에서 조직 Histopathological 분석 amazonensis 10 일 동안 80 및 120 밀리그램 SbV / ㎏ / 하루 복용시 meglumine의 antimoniate로 치료가 제어 그룹 (감염 치료)에 해당 관찰된와 비슷한 감염 프로세스에 관련된 변화를 보여주었다. 일반적으로 햄스터의 피부 샘플을 약간 plasmocytes 수준 (20 %)와 lymphocytes의 중간 침투 (80 %)과 함께 PMN (80 %) 세포, 그리고 온화한 (20 %) 또는 심각한 (80 %) infiltr를 보여주macrophages의 ation (표 2). 이러한 관찰은 granulomatous 피부염, 진피와 밑의 근육을 떨어뜨리고 염증 이벤트의 진단과 일치합니다. 이것은 연구의 모든 동물의 피부 leishmaniasis의 심각한 징후와 호환 감염에 관련된 주된 병변이다. 본 협회는 통계적으로 서로 관련되었을 때 P에게 <0.05이 나왔고 피어슨의 치 평방. 동물의 60-100%의 신장 샘플은 신장 피질과 동물의 75 %에서 신장 약간 위축 동반 glomerules에 적당한 증식을 보여주었다. 이러한 관찰은 멤브레인 proliferative glomerulonefritis, 이전에 다른 Leishmania 종의 감염에 의해 감염에 연결되었습니다 진단과 호환됩니다. 통계 협회는 피어슨 P <0.05의 치 사각형으로 큽니다. 모든 그룹의 동물 40-100%의 간은가 associat 수 있습니다 hepatocytes에서 약간 vacuolar 변화를 보여주었습니다이러한 글리코겐의 hepatocytic 축적 등 생리적 과정에 에드. 이러한 지방산 변성, 섬유증, 그리고 혼잡 등 기타 간 조직 이상은 감염 과정과 일치합니다. 이러한 vacuolar hepatocytes의 변화, cardiomegalies, intracytoplasmic eosinophiles의 흠도의 존재뿐만 아니라 신장 튜브에 세포의 vacuolization 같은 다른 관측은 통계적으로 테스트 화합물의 독성 효과 (P> 0.05) 연관과 같다되지 않습니다 햄스터의 생리적 과정으로 인해.

2. 햄스터 모델 meglumine의 antimoniate의 치료 효능

치료 후 다른 시간 지점에서 감염된 햄스터의 임상 표현형는 표 1에 요약됩니다. 10 일 동안 체중이 120 밀리그램 SbV / ㎏ / 하루 복용시 근육의 meglumine의 antimoniate과 치료 L.의 유도 완전한 회귀 매우 효과적이었습니다 모든 동물의 amazonensis 병변 (그림 4). 치료의 비율은 2 8주 사후 치료 기간 내에 백퍼센트했습니다. 그러나 석달 후 병변의 재발은 햄스터의 20 %에서 관찰되었다. meglumine antimoniate은 80 밀리그램 SbV / kg 체중에 투여되었을 때, 완전한 치료는 불과 3 동물에서 관찰되었다. 다른 두 동물에서 병변은 각각 33,9와 69,0 %, (그림 5)에 의해 감소​​. 삼개월 후, L. amazonensis 80 밀리그램 SbV / ㎏ / 하루 복용량에서 meglumine의 antimoniate 대우 모든 동물의 피부에있는 120 밀리그램 SbV / meglumine의 antimoniate의 ㎏ / 일로 치료 동물 중 하나 남아 있었다. 근육내 120 치료 복용량은 MG SbV / 10 일 동안 ㎏ / 일이 결정되었다.

제한 희석 분석을 사용하여 기생충의 예상 숫자는 음수 (치료) 제어 및 차량 (위약) 대우 그룹에 비해 meglumine의 antimoniate와 대우 그룹에 대한 상당한 감소 (P <0.001)을 보였다. 가능한 기생충 (0.4-1, 피부 조직의 MG 당 6 기생)은 치료 동물의 병변 사이트에서 감지하고 이들은 PBS로 치료되었다. 120 MG / ㎏ / 일 (그림 5B) 80 밀리그램 / ㎏ / 일 (그림 5c)로 취급이 햄스터를 취급 늑대가 : 기생충은 meglumine antimoniate과 치료에 반응하지 않은 그 동물로부터 분리되었다. 어떤 차이가 치료 또는 PBS로 치료가 그 동물에 비해 meglumine antimonite을받은 후 치료하지 않은 햄스터의 기생충 부하에서 관찰되지 않았습니다.

120 MG SbV / ㎏ / 일시 근육내 meglumine antimoniate 대우 햄스터의 피부 biopsies의 조직 병리학에 어떠한 기생충이 관찰된가 없으며 진피에 침투 몇 macrophages와 lymphocytes는 (그림 6A, 6B) 볼 수 있습니다. 반대에서는 햄스터가 광범위하게 80 밀리그램 SbV / ㎏ / 일, 진피에 침투 macrophages의 풍부한 존재와 granulomatous 피부염에 meglumine antimoniate로 치료했을 때 (그림 6c, 6D) 관찰된다.

효능 연구, 80, 120 밀리그램 SbV / kg 체중의 meglumine antimoniate의 독성에 대해 동일한 치료 방식을 이용하여 평가되었다. 일반적인 건강 상태와 체중은 지난 먹이지 후 3 개월까지 감시했다. 치료는 각각 104,9 124,69부터 GR과 감염되지 않은 그리고 감염된 햄스터에서 129,71로 134,02 GR로 다양 햄스터의 체중에 영향을주지 않았다. 동물 치료 및 28,74 27,59 동안의 평균 ± 몸무게의 4,22 %를 얻은 ± 2,26 %를 후속 (P> 0.05, Anova) 중. 무게 손실은 치료 (데이터가 표시되지 않음)의 그룹에서 관찰되지 않았습니다. 크레아티닌과 알라닌 아미노 transferase (ALT) 및 hemogram 매개 변수의 seric 값은 치료 및 meglumine antimoniate 취급 햄스터의 참고 문헌 값과 유사했다. 만 찬의 우레아 질소 (롤빵) 수준은 처리 동물의 20 %에서 조작된 면이되었다.

HistopatL.에 감염된 햄스터에서 조직의 hological 분석 amazonensis 80, 120의 복용에 meglumine antimoniate 대우 MG SbV / 10 일 동안 ㎏ / 매일 약물 독성에 관련된 아무런 변화를 보여주었다 없습니다.

표 1
치료 후 인산염 완충 식염수, B 일.
표 1. L. 임상 표현형 amazonensis는 실험적으로 meglumine antimoniate와 치료 후 햄스터를 감염

;> 50 %에서 병변의 크기를 줄이는 임상적인 개선 (치료법 (100 % 지역 및 병변의 완전한 실종의 치유) : 각 치료의 효과는 다음과 같은 점수 시스템을 사용하여 병변 크기의 사전과 치료 후를 비교 평가되었다 지역), 임상 실패 (병변의 크기를 증가), 재발 (치료 후 병변의 재활 성화).


: 부재 기호, NA : 해당 사항 없음; M : 온화한; M : 중간, S : 심각한, PMN : polymorphonuclear neutrophils, NSL : 아니오 중요한 병변, GDM : Granulomatous의 dermatomyositis, PGD : Pyogranulomatous 피부염. 1. Lymphangiectasia 2. 미네랄 같은 물질.
테이블 2. 햄스터의 피부 조직 병리학 실험적 L. 감염 amazonensis 및 meglumine antimoniate로 치료

그림 1
1-1.5 X 10 7 L.과 intradermally 주사 햄스터의 감염 후 피부 병변 개발의 그림 1. 코스 amazonensis metacyclic (고정 단계) 20 주 동안 promastigotes. 축 y는 mm의 궤양 영역을 나타냅니다.

그림 2
그림 2. Photog이주 () 4 주 10 × 10 7 intradermal 접종 후 황금 햄스터의 지느러미 피부에 병변을 ulcerating 개발 raphyic 역사 (b)는 6 주 (C).

그림 3
. (B) 감염 치료 햄스터, 아무 염증 반응도 상당한 histological 변경이 관찰되지 않습니다 : multinucleated 거대 세포의 존재와 granulomatous 피부염 (화살표 더하기 별표)와 풍부한 기생충 (블랙 3 스킨은 () 햄스터 감염되지 않은 그리고 치료에서 생검 그림 화살표)과 macrophages (흰색 화살표)는 진피에 침투. Hematoxylin-Eosin 얼룩 400x.

그림 4
햄스터의 임상 응답의 그림 4. 사진의 역사는 L. 감염 amazonensis 120 MG SbV / ㎏ / 일 소동이 일어난에서 근육내 meglumine antimoniate로 치료 g 십일. 그림 치료 (10 일째) (B)의 끝에, 치료 전에 병변의 모양 ()을 표시하고, 동안 후속 : 일 30 일 (C), 60 (D) 90 (E) 이후 치료.

그림 5
그림 5. 햄스터의 피부 leishmaniasis의 치료 meglumine의 antimoniate 효과. 골든 햄스터는 L.에 감염되었다 지느러미 피부에 amazonensis. 감염 6 주 후에 그들은 () 치료 또는 PBS 혼자 (B), meglumine antimoniate 120 MG SbV / ㎏ / 일 (C) 또는 80 밀리그램 SbV / ㎏ / 일 (D)와 십일 동안 intramuscularly 취급했다. 그래프는 치료가 끝난 후에도 치료의 끝에 병변 크기 (매일 0)에서 감소의 비율을 보여, 그리고 일에서 15, 30, 60 및 90 후속. P 120 80 <0.001 밀리그램 SbV / ㎏ / 일 대 차량이 아니라 치료.

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그림 6. 스킨 120 MG SbV / ㎏ / 일 (A, B) 80 밀리그램 SbV / ㎏ / 일 (C, D)에서 감염 및 근육내 megumine의 antinmoniate 대우 햄스터에서 생검. 진피에 침투해 부족한 macrophages와 lymphocytes의 존재. 어떤 기생충은 관찰되지 않습니다. phagocyted 기생충과 거품 macrophages,. Hematoxylin-Eosine는 광범위 진피에 침투 macrophages의 풍부한 존재 (C)와 1000x (C) Granulomatous 피부염, 200x (를) 얼룩. Hematoxylin-Eosine는 (D) 1000x, 200x (B)를 얼룩.

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Discussion

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피부 leishmaniasis는 열대와 neotropics의 발병이다. 그것은 종종 있기 때문에 작은 피부 nodules에서 총 점막 조직 파괴에 이르기까지 임상 발현의 다양한 스펙트럼의 질병의 그룹로 언급됩니다. 대부분의 사용 가능한 약물은 비용이 많이 드는이며, 장기 치료 regimens가 필요하고 새로운 약물의 발견 necessitating, 점점 비효 해지고 있습니다.

마우스 모델은 널리 사용되고 있지만, 일부 단점을 가지고있다. 높은 BALB / C에서 본대로 확대 궤양 병변을 특징으로 영구적인 감염 취약하고 따라서 예를 들어, dermotropic Leishmania 종의 promastigotes의 intradermal 주입 후 개발 병변에 근거하여, 생쥐는 세 그룹으로 나눌 수 DBA / 2, DBA / 3 생쥐, CBA / H, C3H/He 및 A / J와 매우 강한 그룹에서 따로 병변 typi에서 본대로 병변은 8 주 이내에 해결할 수있는 비교적 저항력이 그룹NZB 및 C57Bl 년 / 6 생쥐 바라보는 피부 leishmaniasis의 칼 주사로 개발하고 있습니다. 그들이 민감한만큼 질병의 과정이 현저하게 다양한 일반적인 근친 마우스 종자와 Leishmania 종 사이에서 다양한 피부 leishmaniasis의 murine 모델와는 달리, 골든 햄스터는 Mesocricetus auratus는 바이오 모델 적절한는 Leishmania 수종에 대한 약물을 평가하는 것으로 간주됩니다 Leishmania. 5,6,7,8,9,10,11,12,13,14의 다른 종에 의해 감염됩니다. dermotropic Leishmania 종 중 하나의 metacyclic (고정 상) promastigotes 중 접종 한 두 달 포스트 접종 사이에 피부 병변이 발생할 수 있습니다. 병변은 궤양으로, 나중 nodules까지 진화 papules 같은 파이와 분명 이십일된다. 접종 사이트 (PE 주둥이, foodpad, 귀 또는 기본 꼬리)로 따라 햄스터가 실험 감염 후 예측 가능한 질병의 진화, 일의 대부분을 표시전자 시간은 피부 leishmaniasis와 인​​간에서 관찰 이들과 유사한 만성 ulcerating 지역 병변의 개발이 특징. 그러나, 인간에서와 같이 병변은 각 개인의 면역 상태에 따라 크기에 차이가 있으므로, 일부 햄스터에 병변과 병변의 크기에 따라서 감소 해결에 대한 시도를 볼 수 있습니다.

이 문서는 L.의 promastigotes를 사용하여 햄스터의 지느러미 피부에 실험 감염을 설명하더라도 amazonesis,이 모델은 inoculum만을 크기를 변경, 기타 dermotropic Leishmania 종로도 가능합니다. 요약에서, 지느러미 피부에 promastigotes의 intradermal 주입의 접근 방법은 햄스터의 지느러미 피부에 유도된 피부 leishmaniasis의 임상 및 pathologic 기능이 인간의 질병에 상당히 유사하다고 설명합니다. 또한, 특정 물질 또는 D로 치료 후 궤양의 후속 임상양탄자는 지느러미 피부에 유도된 CL의이 모델이 촉진된다. 병변의 진화는 쉽게 치료 전후의 획득 병변의 크기를 비교하여 결정됩니다. 치료의 관점에서 임상 반응 쉽게 다시 epithelialization (그림 4에서 볼 수)에 따라 다음에있다. 우리는 Leishmania 종과 햄스터의 지느러미 피부에 실험 감염이 그 화합물의 잠재력을 확인할 수있는 유용한 모델을 나타냅니다 결론 antileishmanial 의약품에 대한 후보입니다.

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Disclosures

관심의 어떠한 충돌 선언 없습니다.

Acknowledgments

COLCIENCIAS과 열대 질병에 대한 제품 개발을위한 센터 - - CIDEPRO이 연구는 Antioquia 대학 (CODI), 과학 기술 개발을위한 콜롬비아 연구소에서 연구위원회에서 교부금에 의해 지원되었다.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Ketamine Reagent Holliday –Scott S.A
Xilacine Reagent Synthesis
PBS Reagent GIBCO, by Life Technologies 14190-136
Digital caliper Equipment Fisher Scientific 15-077-958
Giemsa Reagent Sigma-Aldrich GS1L-1L
Formalin Reagent Nova lab 11273
Paraffin Reagent Pechiney Plastic Packaging PM-996
Haemotoxilin Reagent Nova lab 10870103
Eosin Nova lab 10870203
Kodak Ektachem dry chemistry Equipment Kodak Ektachem DT-60
meglumine antimoniate Reagent Aventis
Microscopy Equipment Nikon Instruments YS2-T

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References

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햄스터의 지느러미 피부에 피부 Leishmaniasis : Antileishmanial 약물의 상영을위한 유용한 모델
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Robledo, S. M., Carrillo, L. M., Daza, A., Restrepo, A. M., Muñoz, D. L., Tobón, J., Murillo, J. D., López, A., Ríos, C., Mesa, C. V., Upegui, Y. A., Valencia-Tobón, A., Mondragón-Shem, K., RodrÍguez, B., Vélez, I. D. Cutaneous Leishmaniasis in the Dorsal Skin of Hamsters: a Useful Model for the Screening of Antileishmanial Drugs. J. Vis. Exp. (62), e3533, doi:10.3791/3533 (2012).More

Robledo, S. M., Carrillo, L. M., Daza, A., Restrepo, A. M., Muñoz, D. L., Tobón, J., Murillo, J. D., López, A., Ríos, C., Mesa, C. V., Upegui, Y. A., Valencia-Tobón, A., Mondragón-Shem, K., RodrÍguez, B., Vélez, I. D. Cutaneous Leishmaniasis in the Dorsal Skin of Hamsters: a Useful Model for the Screening of Antileishmanial Drugs. J. Vis. Exp. (62), e3533, doi:10.3791/3533 (2012).

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