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Immunology and Infection

Leishmaniose cutânea na pele do dorso de Hamsters: um modelo útil para o rastreamento de drogas leishmanicidas

doi: 10.3791/3533 Published: April 21, 2012

Summary

Otimização do modelo de hamster experimental da leishmaniose cutânea por injeção intradérmica de

Abstract

Tradicionalmente, os hamsters são experimentalmente inoculados no focinho ou a pata. No entanto, esses sites não uma úlcera sempre ocorre, a medição do tamanho da lesão é um procedimento difícil e animais apresentam dificuldade para comer, respirar e se mover por causa da lesão. A fim de optimizar o modelo de hamster para a leishmaniose cutânea, macho adulto jovem e fêmeas hamsters dourados (Mesocricetus auratus) foram injectados por via intradérmica na pele dorsal com 1 a 1,5 x l0 7 promastigotas de espécies de Leishmania e progressão das lesões subsequentes foram avaliados por até 16 semanas após a infecção. O hamster dourado foi escolhido porque é considerado o adequado modelo bio-para avaliação de medicamentos contra a Leishmania como eles são suscetíveis à infecção por diferentes espécies. Infecção cutânea de hamsters resulta em lesões crónicas, mas controlada, e uma evolução clínica com sinais semelhantes aos observados nos seres humanos. Portanto, o estabelecimento of a extensão da infecção por medição do tamanho da lesão de acordo com a área de endurecimento e úlceras é viável. Esta abordagem provou sua versatilidade e fácil gerenciamento durante a inoculação, acompanhamento e caracterização de lesões típicas (úlceras), aplicação de tratamentos através de diferentes formas e obtenção de amostras clínicas após os diferentes tratamentos. Usando este método, a qualidade de vida animal sobre locomoção, busca de comida e água, jogos e actividades sociais isalso preservados.

Protocol

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1. A infecção de hamsters

1. Animais

Puras do sexo feminino e masculino hamsters dourados (Mesocricetus auratus), 6-8 semanas, pesando 140-160 g são utilizados. Eles estão alojados na instalação para animais, em temperatura controlada alojamento, alimentados com ração de roedores padrão seco e equipado com água ad libitum. Todos os procedimentos envolvendo animais foram aprovados pelo Comitê de Ética institucional para uso animal Experimental. Antes de infecção experimental com parasitas Leishmania dermotrópicas animais são sexados, marcados e ponderados de acordo com procedimentos padronizados. Para sexagem, os animais são inspeccionadas para características distintivas, tais como a visualização da linha mamária ea distância anogenital curto no sexo feminino, ou a visualização de testículos e uma maior distância entre o ânus e prepúcio nos machos. Em seguida, os animais são marcados por perfuração da orelha ou por coloração uma área da pele com uma haste de embebidoem ácido pícrico. Para a perfuração de orelha, depois de limpo com álcool a 70% da orelha é perfurado usando um soco ouvido para roedores. Uma região com os vasos sanguíneos deve ser evitada. Sedação ou anestesia com uma mistura de 09:01 de cetamina (50 mg / kg) e Xilacine (20 mg / kg) por via intraperitoneal num volume de 260-300 ul agulha 25-G é recomendada. Finalmente, os animais são pesados, colocando-os numa armadilha ou caixa que é condicionada a uma balança de precisão.

2. Parasitas

Promastigotas de espécies de Leishmania dermotrópicas, tais como L. amazonensis, são cultivadas em meio de cultura bifásica Novy-MacNeal-Nicolle (NNN) a 26 ° C. Metacíclicos (estacionária) de fase promastigotas (5 dias) areused para infectar os hamsters. Resumidamente, os parasitas são colhidas, lavadas duas vezes usando tampão fosfato salino (PBS), contadas e ajustada para 1 x 10 7 (para o sexo masculino) ou 1,5 x 10 7 (para as fêmeas) parasitas em 0,1 ml de PBS para inocular macho ou fêmea, respectivamente,no entanto, o tamanho inóculos podem variar de acordo com a espécie Leishmania (procedimento não mostrado no vídeo).

3. Infecção experimental

Uma área de pele é raspada antes da inoculação. Resumidamente, os animais anestesiados são colocados em posição de bruços e usando tesouras, o cabelo é removido de duas polegadas a partir da base da cauda. Depois de limpar a área rapada com solução salina estéril do inoculo parasita é injectado por via intradérmica, até uma pápula é formado.

4. Acompanhamento clínico

Os animais são monitorizados todos os 7 dias, até 4 - 6 semanas após a inoculação para a aparência da lesão. Logo, os animais são imobilizados em uma armadilha e na área da pele inoculada é palpada. Em seguida, a área de endurecimento da úlcera formado é delineada e da largura e do comprimento da úlcera são medidos com um paquímetro digital.

2. O tratamento de hamsters

1. Administradornistração dos compostos

O esquema de tratamento é iniciado quando os animais desenvolveram lesões ulceradas (4-6 semanas pós-inoculação). Os animais são distribuídos em grupos de 5-6 animais para cada composto a ser testado. Os compostos podem ser administrados por tópica, oral, intramuscular ou intralesional. Antes da aplicação de drogas, hamsters são anestesiados e da área da lesão é limpa utilizando uma solução salina ou PBS. Quando o composto é aplicado via tópica ou intralesional, os hamsters são imobilizados em armadilhas que permitem que expor a área a tratar, enquanto, quando o composto é administrado por via oral ou intramuscular os hamsters são firmemente preso pela base do pescoço. a) a aplicação tópica: o composto isapplied sobre a lesão e depois de alguns minutos o animal é retornado para o cage.b) Para a injecção intramuscular, a droga é injectado (200 uL máximo) através dos semitendinoso ou semimembranous dos membros posteriores. c) Para administração por via oraltração, a droga é fornecida ao animal (200 uL máximo) através de um 14G oro-gástricas sonda conectada a uma seringa de 1 ml. d) Para a injecção intralesional a droga (100 uL máxima) é gradualmente injectado na base da úlcera usando uma agulha de calibre 26G com o bisel colocado para baixo. A totalidade da área de lesão é coberta pela rotação da agulha. Os tratamentos são administrados diariamente durante 10-20 dias, de acordo com o regime terapêutico definido.

2. Acompanhamento clínico

Devido a este modelo experimental, a eficácia de novos compostos leishmanicidas é determinada de acordo com a cura e cicatrização de lesões após o tratamento, uma monitorização clínica de cada animal é feito semanalmente no final da aplicação do composto, e até três meses após. Durante a monitorização, o tipo de lesão é descrita eo endurecimento e área da úlcera são medidos com um paquímetro digital. A presença de lesões em diferentes regiões para alocal da inoculação, bem como o aparecimento de recidivas da lesão é também descrito e registados. A cada duas semanas, os animais são pesados ​​e lesões são retratados. Os animais são observados diariamente para monitorar: um aspecto) físico (cabelo, coordenação, temperatura, posição olhos, das orelhas, grooming, defecação, presença de líquido ascítico, agitação e desidratação) e b) comportamento (desperto, alerta, curiosa, atenta , permanece com o grupo, aguarda com expectativa a comida e bebida, e difícil de apanhar). O local de aplicação do composto também é observada a presença de hiperemia, inflamação, e remoção de morder e do cabelo.

Os hamsters são também sangrados no dia 45 após o final do tratamento, para determinar os valores hematológicos e serológicos que possam estar associados com a toxicidade dos compostos (ver abaixo).

A eficácia de cada tratamento é avaliada comparando os tamanhos das lesões antes e após os tratamentos, utilizando o seguinte pontuação Systin: curado (cicatrização de área de 100% e desaparecimento completo da lesão), melhoria clínica (redução do tamanho da lesão em> 50% da área); falha clínica (aumentando o tamanho da lesão); recaída da lesão no após a cura). No final do estudo, os animais são sacrificados por inalação de anestesia anterior CO2. Após a morte, as amostras necessárias para análise parasitológica, histológicas e sorológicas são tomadas.

3. Exames parasitológicos

A presença de Leishmania em amostras de pele (lesão ou cicatriz), baço, fígado e rim é determinado directamente por análise de manchas coradas com Giemsa 1 e exame histopatológico de estes tecidos (ver abaixo).

A carga do parasita no local da lesão é estimada pelo ensaio de diluição limite de acordo com Titus e colegas (1985) 2. Resumidamente, um pequeno pedaço de tecido é removidoa partir de cada animal, pesados ​​e homogeneizados em solução de PBS frio usando um êmbolo da seringa. A suspensão obtida é centrifugada a 600 g durante 10 min a 4 ° C. Em seguida, os sobrenadantes são descartados e os peletes são ressuspensas em meio RPMI 1640 suplementado com antibióticos 1% e soro de vitela fetal a 10%. Um l cem da suspensão são transferidos para cada um dos 96 poços para a placa de microtitulação contendo sobreposto meio NNN com 50 uL meio de Schneider e mantida a 26 ° C. O número de parasitas viáveis ​​em cada amostra é determinada a partir da maior diluição para a qual promastigotas poderia ser detectada por exame sob um microscópio invertido cada semana durante um mês.

4. O exame histopatológico de lesão na pele (ou cicatriz) e outros tecidos

Uma terceira peça do espécime de biopsia tomadas a partir da pele, fígado e rim é fixada em formalina a 10% e embebidos em parafina. Espécime de baço e no coração também poderia ser processado. Fsecções ive micron dos tecidos fixados foram corados com haemotoxilin-eosina e examinadas sob um microscópio óptico usando 200X, 400X ou imersão em óleo 1000X para estudar a arquitectura micro, as características do infiltrado celular, e na presença ou ausência de parasitas. Fotomicrografias são tomadas e imagens digitais capturadas.

5. Avaliação da toxicidade do tratamento

Actividade tóxica do composto é baseada na condição física e comportamento dos animais de acordo com os parâmetros monitorados durante o acompanhamento clínico (ver acima). Toxicidade também é determinado de acordo com os parâmetros hematológicos e metabólicas em amostras de sangue e as alterações histopatológicas observadas em secções de tecido manchadas com haemotoxilin-eosina tal como descrito acima.

As amostras de sangue são tomadas a partir do coração, de preferência o ventrículo. Para exame hematológico, o sangue é transferido para tubos EDTA anticoagulados e processadas de acordopara padronizar os protocolos de hemograma completo. Para os testes serológicos, o sangue é transferido para tubos Eppendorf 1,5 e centrifugou-se para obter o soro para análise dos níveis de creatinina metabólica, ALT e BUN medido utilizando Kodak Ektachemdry química 3.

6. A análise dos dados

Os dados de animais tratados e não tratados são comparados utilizando o teste ANOVA de. Significância foi fixado em p <0,05.

4. Os resultados representativos

Resumo

O modelo animal de leishmaniose cutânea foi melhorada com o objetivo de usar este modelo na triagem eficácia da droga. Desenvolvimento da lesão e os parâmetros parasitológicos foram estudados após infecção primária na pele dérmica de hamsters. Puras do sexo feminino e masculino hamsters dourados (Mesocricetus auratus), 6-8 semanas, foram injectados por via intradérmica com 1 x 10 7 (para o sexo masculino) ou 1,5 x 10 7 (para as fêmeas) metacyclIC (fase estacionária) promastigotas de L. amazonensis. Nódulos apareceu 20 - 35 dias pi, com úlceras que formam após 4-6 semanas pi Após a infecção foi estabelecida, a eficácia de antimónio pentavalente (SbV) com duas doses foi evalauted. Hamsters foram randomizados em três grupos de 5 animais cada e tratados com antimoniato de meglumina a 80 ou 120 mg SbV / kg por dia durante 10 dias por via intramuscular. O terceiro grupo foi tratado por via intramuscular com PBS como placebo. Um grupo de três animais não foram tratados e usado como um controlo negativo. A resposta para cada tratamento foi seguido de 3 meses após o fim do período de tratamento.

1. Curso clínico após L. amazonensis infecção do hamster dourado (Mesocricetus auratus)

Hamsters infectados na pele dorsal de forma consistente desenvolver ulceração clinicamente evidente da epiderme, 4-6 semanas após a infecção. As lesões começam com pequenos nódulos e úlceras que terminamaumentam de tamanho de acordo com o tempo pós-infecção e alcançar o que foi considerado um tamanho óptimo para a avaliação do efeito da droga experimental pelo quarto até a sexta semana pós-infecção (18,99 a 54,7 milímetros 2 a 4 semanas e 35,55 a 92,71 mm 2 a 6 semanas) (Figuras 1, 2). As lesões subsequentemente mantida uma úlcera evidente para um máximo de 20 semanas pós-infecção, momento em que as experiências foram terminadas (Figura 1).

A infecção por L. amazonensis não afecta o peso corporal de hamsters que variou de 104,9 a 124,69 gr e 129,71 para 134,02 gr em hamsters não infectados e infectados, respectivamente (p> 0,05, ANOVA). Os animais ganhou uma média de 25,58 ± 5,98% do peso corporal durante o estudo. Os valores séricos de creatinina e alanina amino parâmetros transferase (ALT) e hemograma foram semelhantes aos valores de referência em não infectados e infectados por Leishmania hamsters. Apenas a ureia bun azoto nível (BUN) era umugmented em 60% dos animais infectados.

A análise histopatológica de lesões em hamsters infectados com L. amazonensis mostrou diferenças em relação a esses animais não infectados. Em geral, biópsias de pele de hamsters não infectadas não mostram nenhuma reacção inflamatória ou qualquer alteração histológica (Figura 3a), ao passo que os infectados com L. amazonensis desenvolver uma dermatite granulomatosa e presença abundante de macrófagos infiltrantes da derme (Figura 3b). A análise histopatológica de tecidos de hamsters infectados com L. amazonensis e tratada com meglumina em doses de 80 e 120 mg SbV / kg / dia durante 10 dias mostraram alterações associadas ao processo de infecção semelhantes aos observados no grupo de controlo (infectado e não tratado). Em geral, as amostras de pele de hamsters mostrou um ligeiro nível de plasmócitos (20%) e PMN (80%), as células acompanhadas por infiltração de linfócitos moderada (80%), e uma leve (20%) ou grave (80%) infiltrção de macrófagos (Tabela 2). Essas observações correspondem a um diagnóstico de dermatite granulomatosa, um evento inflamatória que compromete a derme eo músculo subjacente. Esta é a principal lesão associada à infecção, o que é compatível com o grave manifestação de leishmaniose cutânea em todos os animais do estudo. Esta associação foi estatisticamente correlacionado quando o. Qui-quadrado de Pearson, que rendeu p <0,05 Amostras de rim de 60-100% dos animais apresentaram hiperplasia moderada no córtex renal e glomérulos acompanhada de atrofia ligeira dos rins em 75% dos animais. Estas observações são compatíveis com glomerulonefritis membrana proliferativa, um diagnóstico que tenha sido anteriormente associada à infecção por infecção por espécies de Leishmania outros. Associação estatística foi grande, com um qui-quadrado de Pearson p <0,05. Os fígados de 40-100% dos animais em todos os grupos mostraram ligeiras alterações vacuolares nos hepatócitos, que podem estar associadased a processos fisiológicos como o acúmulo de glicogênio hepatocítica. Anormalidades hepáticas outros tecidos, tais como degeneração gordurosa, fibrose e congestão correspondem ao processo de infecção. Outras observações, tais como mudanças vacuolares em hepatócitos, cardiomegalias, a presença de inclusões de eosinófilos intracitoplasmáticas, bem como a vacuolização de células nos tubos renais não são estatisticamente associado (p> 0,05) a um efeito tóxico do composto testado e são susceptíveis devido a um processo fisiológico em hamsters.

2. O efeito terapêutico do antimoniato de meglumina no modelo hamster

O fenótipo de hamsters infectados em diferentes pontos de tempo após o tratamento estão resumidos na Tabela 1. O tratamento com intramuscular antimoniato de meglumina a uma dose de 120 mg SbV / kg / dia durante 10 dias peso foi altamente eficaz de regressão completa do indutor L. amazonensis lesões em todos os animais (Figura 4). A percentagem de cura foi de 100% no 2 e 8 semanas pós-tratamento. No entanto, depois de três meses a recaída da lesão foi observado em 20% dos hamsters. Quando meglumina foi administrada a 80 mg de peso corporal SbV / kg, a cura completa foi observada apenas em 3 animais. Nos outros dois animais a lesão diminuiu 33,9 e 69,0%, respectivamente (Figura 5). Após três meses, L. amazonensis permaneceu presente na pele de todos os animais tratados com antimoniato de meglumina a uma dose de 80 mg SbV / kg / dia e apenas um dos animais tratados com 120 mg SbV / kg / dia de antimoniato de meglumina. Uma dose curativa do intramuscular 120 mg SbV / kg / dia durante 10 dias foi determinada.

Usando o ensaio de diluição limitante, o número estimado de parasitas mostraram uma redução significativa para o grupo tratado com antimoniato de meglumina, em comparação com o controlo (sem tratamento) negativa e do veículo (placebo) grupo tratado (p <0,001). Parasitas viáveis ​​(0,4 a 1, 6 parasitas por mg de tecido da pele) foram detectados no local da lesão de animais não tratados e os tratados com PBS. Parasitas só foram isolados a partir destes animais que não respondem ao tratamento com meglumina: um dos animais tratados com 120 mg / kg / dia (Figura 5b) e dois hamsters tratados com 80 mg / kg / dia (Figura 5c). Não foram observadas diferenças na carga parasita de hamsters que não curam depois de receber meglumina antimonite em comparação com os animais não tratados ou tratados com PBS.

Na histopatologia de biópsias de pele de hamsters tratados com antimoniato de meglumina intramuscular de 120 mg SbV / kg / dia não são parasitas observado; poucos macrófagos e linfócitos infiltrando a derme são vistos (Figura 6a, 6b). Ao contrário, quando os hamsters foram tratados com meglumina a 80 mg SbV / kg / dia, dermatite granulomatosa com a presença abundante de macrófagos infiltrantes da derme extensivamente é observada (Figura 6c, 6d).

Usando o mesmo esquema terapêutico para estudo de eficácia, a toxicidade de meglumina, 80 e 120 mg de peso corporal SbV / kg foi avaliada. Estado geral de saúde e peso corporal foram monitorados até 3 meses após a administração passada. O tratamento com não afectar o peso do corpo de hamsters que variou de 104,9 a 124,69 gr e 129,71 para 134,02 gr em hamsters não infectados e infectados, respectivamente. Os animais ganharam uma média de 27,59 ± 4,22% do peso corporal durante o tratamento e 28,74 ± 2,26% durante o seguimento (p> 0,05, Anova). A perda de peso não foi observado em qualquer grupo de tratamento (dados não mostrados). Os valores séricos de creatinina e alanina amino parâmetros transferase (ALT) e hemograma foram semelhantes aos valores de referência em não tratados e meglumina hamsters tratados. Apenas a ureia bun azoto nível (BUN) foi aumentada em 20% dos animais tratados.

Histopatanálise hological de tecidos de hamsters infectados com L. amazonensis e tratada com antimoniato de meglumina em doses de 80 e 120 mg SbV / kg / dia durante 10 dias não mostrou alterações associadas à toxicidade da droga.

Tabela 1
um tampão fosfato salino, Dias b após o tratamento.
Tabela 1. Fenótipo de L. amazonensis infectados experimentalmente hamsters após tratamento com antimoniato de meglumina

A eficácia de cada tratamento foi avaliada comparando os tamanhos das lesões antes e após os tratamentos, utilizando o sistema de pontuação seguinte: cura (cura de área de 100% e desaparecimento completo da lesão), melhoria clínica (redução do tamanho da lesão em> 50% da área); falha clínica (aumentando o tamanho da lesão); recaída (reactivação da lesão após cura).


A: sinal ausente; NA: não aplicável; m: leve; M: moderada; S: grave; PMN: neutrófilos; NSL: Nenhuma lesão significativa; GDM: dermatomiosite granulomatosa; PGD: dermatite piogranulomatosa. 1. Linfangiectasia; 2. Mineral-como o material.
Tabela 2. Histopatologia da pele de hamsters experimentalmente infectados com L. amazonensis e tratados com antimoniato de meglumina

A Figura 1
Figura 1. Curso de desenvolvimento da lesão da pele após a infecção em hamsters inoculados por via intradérmica com 1-1,5 x 10 7 L. metacíclica amazonensis (fase estacionária) promastigotas durante 20 semanas. Eixo y representa a área da úlcera em mm.

A Figura 2
Figura 2. Photoghistória do desenvolvimento de raphyic ulcerativa lesão na pele dorsal de um hamster dourado após a inoculação intradérmica de 10 x 10 7 a 2 semanas (a), 4 semanas (b) e 6 semanas (c).

A Figura 3
Figura 3 biópsia da pele (a) hamster não infectado e não tratado:. Nenhuma reação inflamatória não alteração histológica significativa é observada, (b) hamster infectado e não tratado: dermatite granulomatosa, com presença de células gigantes multinucleadas (seta mais asterisco) e parasitas abundantes (preto setas) e macrófagos (setas brancas) infiltração na derme. Hematoxilina-eosina 400x mancha.

A Figura 4
Figura 4. História fotográfica da resposta clínica de hamsters infectados com L. amazonensis e tratada com meglumina intramuscular a 120 mg SbV / kg / dia Durin g de 10 dias. Imagens mostram a aparência da lesão antes do tratamento (a), no final do tratamento (dia 10) (b), e durante o seguimento: dia 30 (c), 60 (d) e 90 (e) após tratamento.

A Figura 5
Figura 5. Eficácia do antimoniato de meglumina no tratamento da leishmaniose tegumentar em hamsters. Hamsters dourados foram infectados com L. amazonensis na pele dorsal. Após 6 semanas de infecção que não foram tratados (a) ou tratados por via intramuscular, durante dez dias com PBS sozinho (b), antimoniato de meglumina 120 mg SbV / kg / dia (c) ou 80 mg SbV / kg / dia (d). Os gráficos mostram a percentagem de diminuição do tamanho da lesão no final do tratamento (dia 0), e nos dias 15, 30, 60 e 90 do seguimento após o fim do tratamento. p <0,001 para 120 ou 80 mg SbV / kg / dia versus tratamento veículo e não.

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A Figura 6 com a pele. Biópsia de hamsters infectados e tratados com intramuscular antinmoniate megumine a 120 mg SbV / kg / dia (a, b) e 80 mg SbV / kg / dia (c, d). Presença de macrófagos e linfócitos escassos infiltrando a derme. Não parasitas são observados. Hematoxilina-Eosina mancha 200x (a), 1000x (c) dermatite granulomatosa com presença abundante de macrófagos infiltrando a derme extensivamente (c);. Macrófagos espumosos com parasitas fagocitada. Hematoxilina-Eosina mancha 200x (b), 1000x (d).

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Discussion

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A leishmaniose tegumentar americana é endêmica em regiões tropicais e neotropicais. É muitas vezes referido como um grupo de doenças por causa de o espectro variado de manifestações clínicas, que variam de pequenos nódulos cutâneas a destruição do tecido da mucosa bruto. A maioria dos medicamentos disponíveis são caros, exigem tratamentos longos e estão se tornando cada vez mais ineficaz, sendo necessária a descoberta de novas drogas.

O modelo do rato é amplamente utilizado, mas tem algumas desvantagens. Assim, por exemplo, com base da lesão que se desenvolveu após injecção intradérmica de promastigotas de espécies de Leishmania dermotrópicas, os ratinhos podiam ser divididos em três grupos: um altamente sensíveis à infecção persistente, caracterizada por uma lesão expansão ulcerosa como se vê na BALB / c, DBA / 2 de DBA, / 3 ratinhos, um grupo relativamente resistente onde lesões podem resolver dentro de 8 semanas, como visto em CBA / H, C3H/He e A / J e um grupo altamente resistente em que não real lesão TYPIcal de leishmaniose cutânea desenvolve no local de injecção, como visto na NZB e C57BL / 6 ratinhos 4. Em contraste com o modelo murino de leishmaniose cutânea em que o curso da doença marcadamente variou entre várias estirpes de ratinho comuns puras e espécies de Leishmania, o hamster dourado, Mesocricetus auratus é considerado o adequado bio-modelo para avaliação de medicamentos contra espécies de Leishmania como eles são susceptíveis a infecção por diferentes espécies de Leishmania. 5,6,7,8,9,10,11,12,13,14. A inoculação de metacíclicos (fase estacionária) promastigotas de qualquer uma das espécies de Leishmania dermotrópicas é capaz de causar lesões cutâneas entre um e dois meses após a inoculação. Lesões tornam-se evidentes 20 dias pi como pápulas que evoluiu para nódulos e, posteriormente, úlceras. Dependendo do local da inoculação (PE focinho, foodpad, orelha ou rabo de base), o hamster mostra uma evolução da doença após a infecção experimental previsível, a maioria dos thtempo e caracterizada pelo desenvolvimento de uma lesão ulcerativa crónica locais semelhantes aos observados em seres humanos com leishmaniose cutânea. No entanto, como em seres humanos, lesões variou em tamanhos, dependendo do estado imunitário de cada indivíduo e por conseguinte, em alguns hamsters uma tentativa para a resolução da lesão e, consequentemente, redução do tamanho da lesão pode ser visto.

Embora este artigo descreve a infecção experimental na pele dorsal de hamsters utilizando promastigotas de L. amazonesis, este modelo também é viável para outras espécies de Leishmania dermotrópicas, mudando apenas o tamanho do inóculo. Em resumo, a abordagem de injecção intradérmica de promastigotas na pele dorsal demonstra que as características clínicas e patológicas de leishmaniose cutânea induzida na pele dorsal de hamsters são notavelmente semelhantes para a doença humana. Além disso, o seguimento clínico de úlceras após o tratamento com os compostos específicos ou dtapetes é facilitada neste modelo de CL induzido na pele dorsal. A evolução das lesões é facilmente determinada por comparação do tamanho da lesão obtidas antes e após o tratamento. A resposta clínica em termos de cura é facilmente seguido de acordo com a re-epitelização (como visto na Figura 4). Concluímos que a infecção experimental na pele dorsal de hamsters com espécies de Leishmania representa um modelo útil para validar o potencial de compostos que são candidatos para drogas leishmanicidas.

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Disclosures

Não há conflitos de interesse declarados.

Acknowledgments

Este estudo foi suportado por concessões do Comitê de Pesquisa da Universidade de Antioquia (CODI), o Instituto Colombiano para o Desenvolvimento da Ciência e Tecnologia - COLCIENCIAS e O Centro de Desenvolvimento de Produtos contra Doenças Tropicais - CIDEPRO.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Ketamine Reagent Holliday –Scott S.A
Xilacine Reagent Synthesis
PBS Reagent GIBCO, by Life Technologies 14190-136
Digital caliper Equipment Fisher Scientific 15-077-958
Giemsa Reagent Sigma-Aldrich GS1L-1L
Formalin Reagent Nova lab 11273
Paraffin Reagent Pechiney Plastic Packaging PM-996
Haemotoxilin Reagent Nova lab 10870103
Eosin Nova lab 10870203
Kodak Ektachem dry chemistry Equipment Kodak Ektachem DT-60
meglumine antimoniate Reagent Aventis
Microscopy Equipment Nikon Instruments YS2-T

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References

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Leishmaniose cutânea na pele do dorso de Hamsters: um modelo útil para o rastreamento de drogas leishmanicidas
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Robledo, S. M., Carrillo, L. M., Daza, A., Restrepo, A. M., Muñoz, D. L., Tobón, J., Murillo, J. D., López, A., Ríos, C., Mesa, C. V., Upegui, Y. A., Valencia-Tobón, A., Mondragón-Shem, K., RodrÍguez, B., Vélez, I. D. Cutaneous Leishmaniasis in the Dorsal Skin of Hamsters: a Useful Model for the Screening of Antileishmanial Drugs. J. Vis. Exp. (62), e3533, doi:10.3791/3533 (2012).More

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