Den Xpert MTB / RIF test integrerer prøve dekontaminering, håndfri betjening, on-board prøve behandling, og ultra-følsomme hemi-nested PCR til samtidig påvisning af<em> Mycobacterium tuberculosis</em> Og rifampicin modstand, enten i ekspektoreret spyt eller koncentrerede sputum sedimenter i cirka to timer. Test er standardiseret og kræver kun moderat laboratorium infrastruktur og uddannelse.
Tuberkulose (TB) på grund af Mycobacterium tuberculosis (MTB) er fortsat et stort spørgsmål om folkesundhed: infektionen påvirker op til en tredjedel af verdens befolkning 1, og næsten to millioner mennesker er dræbt af TB hvert år 2 Universel adgang til høj kvalitet. , er patient-centreret behandling af alle TB-patienter understreges af WHOs Stop TB-strategien. 3 Den hurtige detektion af MTB i luftvejsprøver og stoffri behandling baseret på pålidelige lægemiddelresistensmekanismer testresultaterne er en forudsætning for en vellykket gennemførelse af denne strategi. Men i mange områder af verden, TB diagnosen stadig afhængig af ufølsomme, dårligt standardiserede sputum mikroskopi metoder. Ineffektiv TB detektion og fremkomsten og overførsel af resistente MTB stammer i stigende grad true den globale TB kontrolaktiviteter. 2
Effektiv diagnosticering af lunge-TB kræver, at tilgængeligheden – på globalt plan – af standardized, nem at bruge, og robust diagnostiske værktøjer, der ville gøre det muligt direkte påvisning af både MTB komplekse og modstandsdygtighed over for vigtige antibiotika, såsom rifampicin (RIF). Sidstnævnte resultat kan tjene som markør for multiresistent MTB (MDR TB) og er blevet rapporteret i> 95% af MDR-tuberkulose isolater. 4, 5 hurtig tilvejebringelse af pålidelige testresultater er sandsynligvis direkte omsættes til lyd patientbehandling beslutninger, der i sidste ende, vil helbrede den enkelte patient og bryde kæden af TB transmission i samfundet. 2
Cepheid s (Sunnyvale, CA, USA) Mindst MTB / RIF assay 6, 7 opfylder kravene skitseret ovenfor i en bemærkelsesværdig måde. Det er en nukleinsyre-syrer amplifikation test for 1) påvisning af MTB kompleks DNA i spyt eller koncentrerede sputum aflejringer, og 2) detektering af RIF resistens-mutationer af rpoB-genet 8 er designet til brug med Cepheid s GeneXpert Dx. System thved integrerer og automatiserer prøven behandling, nukleinsyreamplifikation, og detektion af målsekvenser med real-time PCR og revers transkriptase PCR. Systemet består af et instrument, personlig computer, stregkode scanner, og præinstalleret software til at køre test og visning af resultaterne. 9 Det beskæftiger engangs-Xpert MTB / RIF patroner, der holder PCR-reagenser og være vært for PCR-processen. Fordi patroner er selvbærende, er krydskontaminering mellem prøver elimineres. 6 Aktuelle nukleinsyreamplifikationsreaktioner metoder, der anvendes til at påvise MTB er komplekse, arbejdskrævende, og teknisk krævende. Den Xpert MTB / RIF analyse har potentiale til at bringe standardiseret, følsom og meget specifik diagnostisk test for både TB og medicinresistens til universel-adgangspunkt-of-care indstillinger 3, forudsat at de vil være i stand til at råd til det. For at lette adgangen, har Fonden for innovative nye Diagnostics (FIND) forhandles betydeligtcant prisnedsættelser. Aktuelle FIND-forhandlede priser, sammen med en liste over lande, der er berettigede til de rabatter, er tilgængelige på internettet. 10
Den Xpert MTB / RIF analysen integrerer prøve dekontaminering, håndfri betjening, on-board prøve behandling, og ultra-følsomme hemi-nested PCR til samtidig påvisning af MTB og RIF modstand, enten i ekspektoreret spyt eller koncentrerede sedimenter, i en enkelt , let at bruge systemet. Assayet analytiske detektionsgrænse blev fundet at være 131 CFU / ml opspyt. 6. log-lineære forhold mellem Ct-værdier og antallet af MTB celler præsenterer gælder fra februar 10 – juli 10 CFU / ml opspyt. Som klinisk relevante MTB koncentrationer alle falder ind under det lineære område af analysen, giver analysen semi-kvantitative estimater af bakteriemængde. 7 Analysen kræver kun moderat laboratorium infrastruktur og uddannelse. Detektionsgrænsen ligger mindst to størrelsesordener mindre end den for konventionelt mikroskopi. 6 Specificitet er fremragende. Endvidere samtidig påvisning af RIF-resistant MTB er en signifikant fordel i fastsættelsen af point-of-care test i en tid med resistente TB. 3
Til dato er der kun begrænsede publicerede data vedrørende analysen ydeevne til diagnosticering af lunge-TB i kliniske indstillinger er tilgængelige 12;. 13 Den Xpert MTB / RIF analysen overordnede kliniske sensitivitet til påvisning af MTB i sputum af patienter med mistanke om lunge-TB var 97,6% i forhold til kultur som reference. Det var resultaterne af et prospektivt multicenter undersøgelse, der involverede fem målestationer (Lima, Peru, Baku, Aserbajdsjan, Cape Town og Durban, Sydafrika, Mumbai, Indien) og i alt 1462 patienter. Den samlede præ-test sandsynlighed for kultur-bekræftet TB i den undersøgte population var 50,7%. Følsomheden var 99,8% for smøre-og kultur-positive tilfælde, og 90,2% for smøre-negative, kultur-positive tilfælde. Blandt HIV-positive patienter med lunge-TB, var følsomheden for MTB / RIF test 93,9% sammenlignet med 98,4% i. HIV-negative patienter 12 I en indstilling af lav TB prævalens, den overordnede aftale til detektering af MTB var 89% i forhold til kultur, følsomhed var 98% for smear-positive og 72% for smøre-negative prøver, henholdsvis, og specificitet var fremragende. 13 Der var ingen signifikant forskel i følsomhed mellem test på ubehandlet opspyt og dem på koncentrerede sedimenter. 12 I samme undersøgelse, MTB / RIF testen korrekt opdaget RIF modstand i 209 af 211 patienter (99,1% følsomhed) og i alt 506 patienter med RIF modtagelighed (100% specificitet), da sekventering resultater blev taget i betragtning. 12 Forfatterne fandt, at udførelsen af både tilfælde afsløring og diskrimination af RIF modstand, var den samme på tværs af forskellige sites, tyder på, at resultaterne er sandsynligt, at være bredt anvendelig. 12 endvidere koncentrerede sedimenter af respiratoriske prøver bortset sputum, såsom broncho-alveolar udskylning og bronkiernel sekret, blev testet med sammenlignelig sensitivitet og specificitet. 13. Data om analysen præstationer ved test af ekstra-lunge-TB er ved at opstå. 15
Global TB kontrol presserende behov for effektive værktøjer, der tillader hurtig diagnosticering af nye TB-tilfælde og påvisning af RIF-resistent MTB i universel-adgangspunkt-of-care-indstillinger. 3 Nuværende nukleinsyreamplifikationsreaktioner metoder, der anvendes til at påvise MTB er komplekse, arbejdskrævende, og teknisk krævende. Den Xpert MTB / RIF analyse har potentiale til at bringe standardiseret, følsom og meget specifik diagnostisk test for både TB og medicinresistens til disse indstillinger, forudsat at de vil være i stand til at råd til det. For at lette adgangen, har Fonden for innovative nye Diagnostics (finde) forhandlede betydelige prisnedsættelser for Xpert MTB / RIF test. Aktuelle FIND-forhandlede priser, sammen med en liste over lande, der er berettigede til de rabatter, er tilgængelige på internettet. 10 </sup>
The authors have nothing to disclose.
Forfatterne anerkender WJ Looney for nøje gennemgang af manuskriptet.
Reagent/Equipment | Company | Catalogue number |
Xpert MTB/RIF test | Cepheid | GXMTB/RIF-10 |
Transfer pipettes | Sarstedt | 86.1172.001 |
Conical tubes, 15 ml, 120 x 17 mm, PS | Sarstedt | 62.553.542 |