Summary
Xpert परीक्षण / एमटीबी राइफल्स के एक साथ पता लगाने के लिए नमूना परिशोधन, हाथ से मुक्त आपरेशन, पर बोर्ड नमूना प्रसंस्करण, और अति संवेदनशील अर्ध - नेस्टेड पीसीआर को एकीकृत
Protocol
मानक के 2 तपेदिक देखभाल राज्यों के लिए अंतरराष्ट्रीय मानकों फुफ्फुसीय टीबी होने का संदेह है कि सभी रोगियों को कम से कम दो जीवाणु परीक्षा के लिए थूक के नमूनों को प्रस्तुत करना चाहिए. जब संभव हो, कम से कम एक नमूना जल्दी सुबह, प्राप्त किया जाना चाहिए के रूप में थूक इस समय एकत्र उच्चतम उपज है 11 Xpert परख / एमटीबी राइफल्स थूक के नमूने या केंद्रित थूक अवसादों प्रेरित या expectorated sputa से तैयार कर रहे हैं कि करने के लिए लागू किया जा सकता है. या तो एसिड फास्ट बेसिली (एएफबी) सकारात्मक या नकारात्मक स्मियर 6, 12, 13 रोगियों से नमूनों वहाँ किसके लिए फुफ्फुसीय टीबी, जो है के नैदानिक संदेह है के साथ प्रयोग के लिए परख करना है: 1) प्राप्त नहीं विरोधी तपेदिक चिकित्सा, 2 ) <चिकित्सा के 7 दिन, या 3) पिछले 60 दिनों में प्राप्त हुआ है नहीं था चिकित्सा. ध्यान रखें कि यह दवा 7 चिकित्सा के प्रभाव की निगरानी क्योंकि जीवाणु के डीएनए रोगाणुरोधी उपचार के बाद जारी रहती है हो सकता है के लिए नहीं किया जाना चाहिए.
1. Expectorated थूक के नमूने
नोट: प्रक्रिया केवल एक समय में कई नमूनों के रूप में, के रूप में वहाँ हैं GeneXpert Dx प्रणाली परीक्षण चलाने के लिए उपलब्ध मॉड्यूल!
- इसी नमूना आईडी के साथ प्रत्येक Xpert एमटीबी / राइफल्स कारतूस लेबल.
- स्थानांतरण 1.0 मिलीग्राम एक शंक्वाकार, पेंच से ढकी एक बाँझ हस्तांतरण विंदुक का उपयोग ट्यूब थूक expectorated. वैकल्पिक रूप से, पूरे नमूना मूल थूक छिद्ररहित संग्रह कंटेनर में संसाधित किया जा सकता है.
- Expectorated थूक एक बाँझ हस्तांतरण विंदुक का उपयोग करने के लिए, 2.0 मिलीग्राम Xpert नमूना / एमटीबी राइफल्स अभिकर्मक (वी / वी 2:01) जोड़ें.
- ढक्कन बदलें, और ट्यूब 10 सख्ती से हिला-20 बार. वैकल्पिक रूप से, मिश्रण (30 सेकंड) vortexed किया जा सकता है.
- ट्यूब ईमानदार कमरे के तापमान पर 5 मिनट के लिए खड़े करने के लिए अनुमति देते हैं.
- ट्यूब 10-20 बार सख्ती से हिला. वैकल्पिक रूप से, एक भंवर (30 सेकंड) का उपयोग करें.
- ट्यूब ईमानदार कमरे के तापमान पर एक और 10 मिनट के लिए खड़े करने के लिए अनुमति देते हैं.
- नमूनों का निरीक्षण: नमूनों थूक का नहीं दिखाई clumps साथ तरलीकृत किया जाना चाहिए.
2. केंद्रित निक्षेपों
नोट: इस प्रक्रिया में केवल एक समय में कई नमूनों के रूप में वहाँ GeneXpert Dx सिस्टम के रूप में परीक्षण चलाने के लिए उपलब्ध मॉड्यूल!
- इसी नमूना आईडी के साथ प्रत्येक Xpert एमटीबी / राइफल्स कारतूस लेबल.
- एक चोटीदार, पेंच से छाया ट्यूब के एक बाँझ हस्तांतरण विंदुक का उपयोग करने के लिए 1.5 मिलीलीटर Xpert एमटीबी / राइफल्स अभिकर्मक नमूना हस्तांतरण.
- नमूना अभिकर्मक युक्त ट्यूब के एक बाँझ हस्तांतरण विंदुक का उपयोग करने के लिए कम से कम 0.5 मिलीग्राम केंद्रित तलछट जोड़ें.
- ढक्कन बदलें, और ट्यूब ध् हिला10-20 बार igorously. वैकल्पिक रूप से, एक भंवर (30 सेकंड) का उपयोग करें.
- ट्यूब ईमानदार कमरे के तापमान पर 5 मिनट के लिए खड़े करने के लिए अनुमति देते हैं.
- ट्यूब 10-20 बार सख्ती से हिला. वैकल्पिक रूप से, एक भंवर (30 सेकंड) का उपयोग करें.
- ट्यूब ईमानदार कमरे के तापमान पर एक और 10 मिनट के लिए खड़े करने के लिए अनुमति देते हैं.
- नमूनों का निरीक्षण: नमूनों थूक का नहीं दिखाई clumps साथ तरलीकृत किया जाना चाहिए.
3. Xpert एमटीबी / राइफल्स कारतूस लोड हो रहा है
नोट: कारतूस के लिए नमूना जोड़ने के 30 मिनट के भीतर परीक्षण शुरू करें!
- Xpert एमटीबी / राइफल्स कारतूस और नमूना आईडी पर लेबल की जाँच करें.
- कारतूस ढक्कन खोलें.
- बाँझ हस्तांतरण प्रदान की विंदुक का प्रयोग, हस्तांतरण पिपेट में तरलीकृत नमूना महाप्राण (व्यंजन) जब तक नवचंद्रक न्यूनतम अंक से ऊपर है और Xpert एमटीबी / राइफल्स कारतूस का खुला बंदरगाह में नमूना हस्तांतरण.
नोट:धीरे धीरे बांटना एयरोसोल गठन के जोखिम को कम करने के लिए!
- कारतूस ढक्कन बंद करें.
4. टेस्ट शुरू
नोट: परीक्षण शुरू करने से पहले सुनिश्चित करने के लिए, कि GeneXpert Dx GX2.1 सॉफ्टवेयर सिस्टम के साथ सुसज्जित है, और Xpert परख / एमटीबी राइफल्स सॉफ्टवेयर में आयात किया जाता है 9!
- कंप्यूटर पर मुड़ें, और फिर GeneXpert Dx साधन पर बारी.
- Windows डेस्कटॉप पर GeneXpert Dx शॉर्टकट चिह्न को डबल - क्लिक करें.
- GeneXpert Dx सिस्टम सॉफ्टवेयर अपने उपयोगकर्ता नाम और पासवर्ड का उपयोग करने के लिए लॉग ऑन करें.
- GeneXpert Dx सिस्टम विंडो में, टेस्ट बनाएँ क्लिक करें. स्कैन कारतूस बारकोड संवाद बॉक्स प्रकट होता है.
- नमूना ID बॉक्स में स्कैन, या नमूना आईडी लिखें.
- Xpert एमटीबी / राइफल्स कारतूस पर बारकोड स्कैन करें. बनाएँ टेस्ट विंडो प्रकट होता है.
- टेस्ट प्रारंभ क्लिक करें मजबूत>, और प्रकट होने वाले संवाद बॉक्स में अपना पासवर्ड दर्ज करें.
- निमिष हरी बत्ती के साथ साधन मॉड्यूल दरवाजा खोलो, और कारतूस लोड.
- दरवाजा बंद करो. परीक्षण शुरू होता है और प्रकाश पलक बंद हो जाता है और लगातार हरे रंग की बनी हुई है. जब परीक्षण समाप्त हो गया है, प्रकाश बंद कर देता है.
- रुको जब तक चलाने के अंत में दरवाजा लॉक प्रणाली विज्ञप्ति, तो मॉड्यूल दरवाजा खुला और कारतूस हटा दें.
- अपनी संस्था के मानक तरीकों के लिए इस्तेमाल किया कारतूस के अनुसार उपयुक्त बेकार कंटेनरों में से फेकें.
5. प्रतिनिधि परिणाम
प्रत्येक Xpert एमटीबी / राइफल्स कारतूस एमटीबी जटिल और राइफल्स प्रतिरोध का पता लगाने के रूप में के रूप में अच्छी तरह से एक नमूना प्रसंस्करण (SPC) नियंत्रण करने के लिए लक्ष्य बैक्टीरिया की पर्याप्त प्रसंस्करण के लिए नियंत्रण और पीसीआर प्रतिक्रिया में अवरोध करनेवाला (ओं) की उपस्थिति पर नजर रखने के लिए अभिकर्मकों शामिल . जांच की जाँच करें नियंत्रण (पीसीसी) अभिकर्मक पुनर्जलीकरण की पुष्टि, पीसीआर ट्यूब में भरनेकारतूस, जांच अखंडता, और डाई स्थिरता 9 Xpert परख / एमटीबी राइफल्स में प्राइमरों rpoB 81 आधार जोड़ी "मूल" क्षेत्र युक्त जीन के एक हिस्से को बढ़ाना. पाँच अलग रंग fluorogenic न्यूक्लिक एसिड संकरण जांच, आणविक बीकन के कहा जाता है, पूरे 81 बीपी कोर 14 प्रत्येक आणविक बीकन पूछताछ के लिए ऐसा विशिष्ट है कि यह अपने लक्ष्य को नहीं बाँध अगर लक्ष्य अनुक्रम जंगली प्रकार rpoB से अलग है डिजाइन किया गया था. के रूप में एक एकल nucleotide प्रतिस्थापन के रूप में छोटे से अनुक्रम. आणविक बीकन के प्रतिदीप्ति केवल जब वे अपने लक्ष्यों को, यानी जंगली प्रकार rpoB के अनुक्रम के लिए बाध्य कर रहे हैं के बाद से, परख में पांच रंगों में से किसी एक के अभाव के साथ जुड़े रहे हैं कोर क्षेत्र में संरक्षित अनुक्रम प्रकार के जंगली और परिवर्तन के बीच अंतर राइफल्स प्रतिरोध. 6
छठे वेतन आयोग एक नकारात्मक नमूना में सकारात्मक हो और एक सकारात्मक नमूने में नकारात्मक या सकारात्मक हो सकता है चाहिए. परीक्षणपरिणाम होगा "अवैध" अगर छठे वेतन आयोग एक नकारात्मक परीक्षण में पता नहीं है. पीसीआर प्रतिक्रिया के शुरू होने से पहले, GeneXpert Dx सिस्टम प्रतिदीप्ति जांच से संकेत उपाय लिए मनका पुनर्जलीकरण, प्रतिक्रिया - ट्यूब भरने, जांच अखंडता और डाई स्थिरता की निगरानी. पीसीसी गुजरता अगर जांच से प्रतिदीप्ति संकेत सौंपा स्वीकृति मानदंडों को पूरा करती है. परिणाम मापा प्रतिदीप्ति संकेत और एम्बेडेड गणना एल्गोरिदम के से GeneXpert Dx सिस्टम के द्वारा व्याख्या कर रहे हैं और देखें परिणाम 9 विंडो में प्रदर्शित कर रहे हैं, जैसा कि नीचे दिया गया:
एमटीबी का पता लगाया गया: एमटीबी लक्ष्य डीएनए का पता चला है, दोनों नियंत्रण, छठे वेतन आयोग और प्रदेश कांग्रेस, सौंपा स्वीकृति मानदंडों को पूरा है. कम सीटी मान डीएनए टेम्पलेट की एक उच्च शुरू एकाग्रता का प्रतिनिधित्व करते हैं, उच्च सीटी मान डीएनए टेम्पलेट की एक कम एकाग्रता का प्रतिनिधित्व करते हैं. एमटीबी का पता परिणाम में "राइफल्स प्रतिरोध का पता" (चित्रा 1 ए), "राइफल्स प्रतिरोध का पता नहीं चला" ( एमटीबी पता नहीं: एमटीबी लक्ष्य डीएनए का पता नहीं है, दोनों नियंत्रण, छठे वेतन आयोग और प्रदेश कांग्रेस, सौंपा स्वीकृति मापदंड (चित्रा 2) को पूरा है. अवैध: या एमटीबी की उपस्थिति अनुपस्थिति निर्धारित नहीं किया जा सकता है: छठे वेतन आयोग स्वीकृति मानदंडों को पूरा नहीं करता, यानी ठीक नमूना, संसाधित नहीं किया गया था या पीसीआर हिचकते हैं (चित्रा 3). नोट: अतिरिक्त नमूना के साथ फिर से परीक्षण! त्रुटि: एक या अधिक पीसीसी परिणाम में विफल रहा है (असफल). दोनों एमटीबी और छठे वेतन आयोग कोई परिणाम प्रदर्शित करते हैं. नोट: अतिरिक्त नमूना के साथ फिर से परीक्षण! यदि पीसीसी पारित (पास), एक सिस्टम घटक विफलता त्रुटि के कारण होता है. चित्रा 1: एमटीबी लक्ष्य डीएनए का पता लगाया जाता है, दोनों नियंत्रण, छठे वेतन आयोग और प्रदेश कांग्रेस, सौंपा स्वीकृति मानदंडों को पूरा. कम सीटी मान एक उच्च शुरू करने का प्रतिनिधित्व करते हैंडीएनए टेम्पलेट की एकाग्रता, उच्च सीटी मूल्यों डीएनए टेम्पलेट की एक कम एकाग्रता का प्रतिनिधित्व करते हैं. राइफल्स प्रतिरोध एमटीबी का पता परिणाम में पता नहीं (चित्रा 1 ए), "राइफल्स प्रतिरोध का पता चला" (चित्रा 1 बी), या "राइफल्स अनिश्चित प्रतिरोध" एक अलग लाइन पर प्रदर्शित करेगा.
. आंकड़ा 1A एमटीबी का पता है, यानी केवल 81 बीपी प्रतिरोध का निर्धारण rpoB जीन का क्षेत्र (RRDR) राइफल्स के जंगली प्रकार न्यूक्लिक एसिड अनुक्रम राइफल्स प्रतिरोध पता नहीं, वर्तमान 6 थी. बड़ा आंकड़ा देखने के लिए यहाँ क्लिक करें .
चित्रा 1 बी एमटीबी का पता, राइफल्स प्रतिरोध पाया गया है. जांच बी (तीर) के बाहर छोड़ पूरा, जो पदों को शामिल किया गया 513 के लिए आर के 517 जीन rpoB की RDR-6. उदाहरण में, आंशिक अनुक्रमण से पता चला है कि rpoB जीन उत्परिवर्तन D516V खोजा गया था 8. बड़ा आंकड़ा देखने के लिए यहाँ क्लिक करें .
चित्रा 2 एमटीबी लक्ष्य डीएनए का पता नहीं किया गया था, दोनों नियंत्रण, छठे वेतन आयोग और प्रदेश कांग्रेस, सौंपा स्वीकृति मानदंडों को पूरा. बड़ा आंकड़ा देखने के लिए यहाँ क्लिक करें .
चित्रा 3 अवैध परीक्षा परिणाम, यानी या एमटीबी की उपस्थिति अनुपस्थिति निर्धारित नहीं किया जा सकता है: छठे वेतन आयोग स्वीकृति मानदंडों को पूरा नहीं करता, क्योंकि नमूना ठीक से संसाधित नहीं था, क्योंकि या पीसीआर हिचकते किया गया था.3547fig3large.jpg "लक्ष्य =" _blank "बड़ा आंकड़ा देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
Discussion
Xpert परख / एमटीबी राइफल्स परिशोधन नमूना, हाथ से मुक्त आपरेशन, पर बोर्ड नमूना प्रसंस्करण, और अति संवेदनशील अर्ध - नेस्टेड पीसीआर को एकीकृत एमटीबी राइफल्स और प्रतिरोध के साथ - साथ पता लगाने के लिए, या तो expectorated थूक या केंद्रित अवसादों में एक एकल में, , प्रणाली का उपयोग करने के लिए आसान है. परख का पता लगाने के विश्लेषणात्मक सीमा 131 CFU / थूक की मिलीग्राम होना पाया गया 6. लॉग रैखिक सीटी मूल्यों और एमटीबी कोशिकाओं की संख्या के बीच संबंध वर्तमान से 10 2 से 10 7 CFU / थूक की मिलीलीटर धारण सच है. नैदानिक प्रासंगिक एमटीबी सांद्रता परख के रैखिक सीमा के भीतर सभी गिरावट के रूप में, परख जीवाणु लोड की अर्द्ध मात्रात्मक अनुमान प्रदान करता है 7. परख केवल मध्यम प्रयोगशाला बुनियादी ढांचे और प्रशिक्षण की आवश्यकता है. सीमा का पता लगाने के पारंपरिक माइक्रोस्कोपी का परिमाण कम से कम से कम दो आदेशों 6 विशिष्टता निहित है. उत्कृष्ट है. इसके अलावा, राइफल्स के साथ - साथ पता लगाने के resistanटी एमटीबी दवा प्रतिरोधी तपेदिक के युग में बिंदु का ध्यान परीक्षण की सेटिंग में एक महत्वपूर्ण लाभ है 3.
नैदानिक सेटिंग में फुफ्फुसीय टीबी के निदान के लिए ही सीमित परख प्रदर्शन पर प्रकाशित डेटा की तारीख के लिए उपलब्ध हैं 12;. 13 Xpert एमटीबी / राइफल्स की परख संदिग्ध फुफ्फुसीय टीबी के साथ रोगियों के थूक में एमटीबी का पता लगाने के समग्र नैदानिक संवेदनशीलता 97.6% थी जब संस्कृति की तुलना में संदर्भ के रूप में. और 1462 रोगियों की कुल एक भावी बहु केंद्र अध्ययन है कि पाँच अध्ययन साइटों (; बाकू, अज़रबैजान,, केपटाउन और डरबन, दक्षिण अफ्रीका मुंबई, भारत लीमा, पेरू) शामिल निष्कर्ष थे. समग्र संस्कृति की पुष्टि की अध्ययन आबादी में टीबी के पूर्व परीक्षण संभावना 50.7% थी. संवेदनशीलता धब्बा और संस्कृति पॉजिटिव मामलों के लिए 99.8% और स्मियर नकारात्मक, संस्कृति पॉजिटिव मामलों के लिए 90.2% थी. फुफ्फुसीय टीबी के साथ एचआईवी पॉजिटिव रोगियों में परीक्षण / एमटीबी राइफल्स की संवेदनशीलता 93.9% के रूप में 98.4% के साथ तुलना,एचआईवी नकारात्मक रोगियों के 12 कम टीबी के प्रसार की एक सेटिंग में, एमटीबी का पता लगाने के लिए समग्र समझौता 89% था जब संस्कृति की तुलना में, संवेदनशीलता स्मियर नेगेटिव नमूनों के लिए धब्बा पॉजिटिव और 72% के लिए 98% थी, क्रमशः, और विशिष्टता के उत्कृष्ट था 13. में अनुपचारित थूक पर परीक्षण और उन पर केंद्रित अवसादों के बीच संवेदनशीलता में कोई महत्वपूर्ण अंतर था. इसी अध्ययन में 12, परीक्षण / एमटीबी राइफल्स 209 211 रोगियों (99.1% संवेदनशीलता) में सही ढंग से और में राइफल्स प्रतिरोध का पता चला है राइफल्स संवेदनशीलता के साथ सभी 506 रोगियों (100% विशिष्टता), जब अनुक्रमण परिणाम ध्यान में रखा गया 12. लेखकों में पाया गया कि दोनों मामले का पता लगाने, और राइफल्स प्रतिरोध के भेदभाव, के लिए प्रदर्शन विविध साइटों भर में समान था, सुझाव है कि निष्कर्ष की संभावना है व्यापक रूप से लागू हो. 12 इसके अलावा, सांस थूक से अन्य नमूनों में से एक जंगली घोड़ा वायुकोशीय पानी से धोना और लघुश्वासनलिकायें जैसे केंद्रित अवसादों,मैं स्राव, तुलनीय संवेदनशीलता और विशिष्टता के साथ परीक्षण किया गया 13 परख प्रदर्शन पर डेटा जब अतिरिक्त फुफ्फुसीय टीबी परीक्षण में उभर रहा है. 15
ग्लोबल टीबी नियंत्रण तत्काल प्रभावी उपकरण है कि नए टीबी के मामलों की तेजी से निदान और सार्वभौमिक पहुँच में एमटीबी प्रतिरोधी राइफल्स का पता लगाने की अनुमति बिंदु की देखभाल सेटिंग्स. 3 वर्तमान न्यूक्लिक एसिड प्रवर्धन के एमटीबी का पता लगाने के तरीकों का इस्तेमाल किया जटिल कर रहे हैं, श्रम प्रधान की जरूरत है, और तकनीकी रूप से मांग की. Xpert परख / एमटीबी राइफल्स दोनों टीबी और दवा प्रतिरोध इन सेटिंग्स के लिए प्रदान की है कि वे इसे वहन करने में सक्षम हो जाएगा, के लिए मानकीकृत, संवेदनशील और बहुत विशिष्ट नैदानिक परीक्षण लाने की क्षमता है. आदेश में पहुँच को सुविधाजनक बनाने के लिए, अभिनव नई निदान (खोज) के लिए फाउंडेशन Xpert परीक्षण / एमटीबी राइफल्स के लिए महत्वपूर्ण मूल्य में कटौती पर बातचीत की है. छूट के लिए पात्र देशों की सूची के साथ साथ वर्तमान खोजो बातचीत की कीमतों,, वेब पर उपलब्ध हैं 10.
Disclosures
ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.
Acknowledgments
लेखकों ध्यान पांडुलिपि की समीक्षा के लिए WJ Looney स्वीकार करते हैं.
Materials
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Xpert MTB/RIF test | Cepheid | GXMTB/RIF-10 | |
Transfer pipettes | Sarstedt Ltd | 86.1172.001 | |
Conical tubes, 15 ml, 120 x 17 mm, PS | Sarstedt Ltd | 62.553.542 |
References
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