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Bioengineering

Monitoramento adsorção de proteínas com Solid-state Nanoporos

Published: December 2, 2011 doi: 10.3791/3560
Automatic Translation
1, 1
1Department of Physics, Syracuse University

Summary

Um método de usar solid-state nanoporos para monitorar a adsorção não-específica de proteínas em uma superfície inorgânica é descrita. O método emprega o princípio de pulso-resistivo, permitindo a adsorção a ser sondado em tempo real e ao nível de moléculas individuais. Porque o processo de adsorção de proteínas é única longe do equilíbrio, propomos o emprego de matrizes paralelas de nanoporos sintéticos, permitindo que para a determinação quantitativa da taxa de reação aparente de primeira ordem constante de adsorção de proteínas, assim como o de adsorção de Langmuir e constante.

Abstract

Solid-state nanoporos têm sido utilizados para realizar as medições ao nível única molécula para examinar a estrutura local e flexibilidade de ácidos nucléicos 1-6, o desdobramento de proteínas 7 e afinidade de ligação de ligantes diferentes 8. Ao unir esses nanoporos à técnica de pulso-resistivo 9-12, tais medições pode ser feito sob uma ampla variedade de condições e sem a necessidade de rotulagem 3. Na técnica de resistência de pulso, uma solução de sal iônico é introduzido em ambos os lados do nanopore. Portanto, os íons são levados de um lado da câmara para o outro por um potencial transmembrana aplicada, resultando em uma corrente constante. O particionamento de um analito na nanopore provoca uma deflexão bem definidas nesta corrente, que pode ser analisado para extrair informação única molécula. Usando esta técnica, a adsorção de proteínas único para as paredes nanopore pode ser monitorado em uma ampla gama decondições 13. Adsorção de proteínas está crescendo em importância, porque, como dispositivos microfluídicos encolher de tamanho, a interação destes sistemas com proteínas simples se torna uma preocupação. Este protocolo descreve um ensaio rápido para a proteína de ligação aos filmes de nitreto, que pode ser facilmente alargada a outros filmes finos passíveis de perfuração nanopore, ou em superfícies de nitreto de funcionalizados. A variedade de proteínas pode ser explorado sob uma ampla gama de soluções e condições de desnaturação. Além disso, este protocolo pode ser usado para explorar mais problemas básicos usando espectroscopia nanopore.

Protocol

1. Fabricação de estado sólido nanoporos em membranas de nitreto de silício

  1. Traga TEM FEI Tecnai F20 S / a uma tensão de aceleração de 200 kV. Se estiver usando um S diferentes / TEM, a tensão de aceleração deve ser maior ou igual a 200 kV 9
  2. Carga de 20 nm de espessura de silício SPI grade janela nitreto no porta-amostras TEM e limpo, com plasma de oxigênio por 30 segundos para remover quaisquer contaminantes do titular.
  3. Carregar a amostra para o S / TEM e permitir a vácuo para bombear para baixo. Uma vez que o S / TEM tem bombeado para baixo a vácuo, encontrar a janela de nitreto em bright-campo de modo TEM procurando por um quadrado brilhante no Ronchigram. Verifique se o TEM está alinhada corretamente, harmonizar e concentrar a amostra.
  4. Mudar o S / TEM em modo STEM. Use o HAADF detector (ou equivalente) para a imagem da amostra e verifique se ele está devidamente alinhados.
  5. Definir o Monocromador para um valor baixo. Um valor mais baixo do Monocromador permite uma maior current de elétrons disponíveis para a perfuração. Se o S / TEM não tem um monocromador, ignore este passo.
  6. Selecione um tamanho de local apropriado para a perfuração do nanopore. Isto corresponde ao diâmetro da sonda eletrônica. Uma sonda de 3 nm funciona bem para perfuração de cinco poros nm de diâmetro. A maior sonda (5 nm) irá perfurar mais rapidamente e criar uma maior poro. Uma pequena sonda (1 nm) vai demorar mais tempo para perfurar e criar um pequeno poro.
  7. Ajuste os alinhamentos STEM, se necessário.
  8. Foco da membrana de nitreto e trazê-lo para uma ampliação de x1.3M. Focando multa deve ser feito através do monitoramento da Ronchigram.
  9. Se houver qualquer movimento da amostra, e depois esperar para a amostra se estabilize. Isso pode demorar até uma hora. Em branco o feixe de elétrons enquanto espera de modo a não danificar o nitreto.
  10. Coloque a sonda de elétrons sobre a amostra e começar a perfuração.
  11. Verificar periodicamente a amostra fazendo a varredura com o detector HAADF, tanto para garantir que o nanopore está sendo drilled (vai parecer uma mancha escura) e para verificar se não há nenhum movimento da amostra. Se a amostra drifts um pouco, ajustar a posição da sonda de elétrons para ser sobre o nanopore.
  12. Assista ao Ronchigram para identificar quando o poro se formou. Quando em foco, o filme de nitreto tem uma aparência brilhante. Isso vai desaparecer quando as formas nanopore. Colocando o Ronchigram ligeiramente fora de foco permite ver uma franja Fresnel associado ao nanopore.
  13. Pegue uma imagem do nanopore com o HAADF.
  14. Fazer um perfil de intensidade da imagem nanopore. O diâmetro do nanopore pode ser estimada pela região mais escura do perfil.
  15. Alargamento da nanopore pode ser realizado movendo a sonda de elétrons ao longo das bordas do poro.
  16. Uma vez que o nanopore é do diâmetro desejado, coloque o S / TEM em modo TEM.
  17. Trazer o Monocromador para sua configuração padrão e usando a imagem do nanopore brilhante campo TEM para confirmar o tamanho

2. Umectação da nanopore de estado sólido

  1. De-gás, água deionizada contendo 1 M KCl, 10 mM fosfato de potássio, pH 7,4. Isto pode ser feito colocando as soluções sob vácuo e colocá-los em um sonicador banho por 20 minutos.
  2. Colocar o chip de nitreto de silício contendo nanopore em um copo Pyrex 10 ml. Tome cuidado para não quebrar a janela de nitreto, pois é muito delicado. Colocar o copo numa placa de aquecimento em um extractor de fumo e ajustado para 100 ° C.
  3. Limpe o chip nanopore com solução piranha com muito cuidado. Primeiro adicionar 3 ml de ácido sulfúrico para o recipiente utilizando uma pipeta de vidro. Em seguida, adicione cuidadosamente uma peróxido de hidrogênio ml para o ácido sulfúrico para fazer piranha solução 14. Por favor, tome todas as precauções.
  4. Permitir que o chip nanopore de molho em solução piranha por 10 minutos.
  5. Remover a solução piranha do copo com uma pipeta de vidro. Coloque-o em um recipiente de armazenamento adequada.
  6. Fill o copo com a de-gaseados, a água de-ionizada utilizando uma pipeta de vidro limpo. Copo vazio de água e repita pelo menos 5 vezes.
  7. Remover o chip nanopore com uma pinça limpa e seque-o por sucção luz
  8. Imediatamente, selar o chip nanopore para dentro da câmara (Fig. 2a, 2b). O chip pode ser fixado na câmara por O-rings ou selante de silicone.
  9. Encha a câmara com solução KCl
  10. Conectar os eletrodos Ag / AgCl para a câmara (Fig. 2b). Eletrodos pode ser feita por imersão em água sanitária fio de prata durante a noite.
  11. Aplicar um potencial transmembrana através dos eletrodos e monitorar a resposta atual usando uma Axon 200B amplificador de patch-clamp no modo de tensão-clamp.
  12. Construir uma curva I / V (corrente-tensão) a partir das medições. A curva I / V deve ser altamente linear ao usar 1 M KCl (Fig. 3). A condutância da nanopore deve corresponder ao seu diâmetro. Se o nanopore não exibe umalinear I / V curva, a condutância é muito baixo, ou a corrente aberta do nanopore não é estável (Fig. 4a), isso significa que o nanopore não está devidamente molhada e lavagem piranha deve ser repetido.

3. Monitoramento adsorção de proteínas

  1. É extremamente importante a realização de experimentos de controle com uma membrana single-nanopore ou matriz paralela de nanoporos (veja abaixo) para monitorar a corrente com as condições de buffer sem a amostra de proteína. Recomendamos as seguintes duas etapas: (i) o uso de um buffer de pureza de nível alto (pureza> 99,9%; cromatografia-grade level), e (ii) o uso de um tampão, cuja interação com o nanopore de estado sólido não produzir um único canal de eventos. Além disso, recomendamos a obtenção de uma amostra de proteína de alta pureza através de procedimentos padrão de química de proteínas. A pureza da amostra de proteínas deve ser verificado pela análise de sódio dodecil sulfato de gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) e de alta resolução mass espectrometria de 15.
  2. Adicionar uma amostra purificada da proteína a ser estudada no banho fundamentada da câmara. Dê tempo para a amostra para difundir em todo o banho. Concentrações típicas de proteínas que podem ser medidos estão em dezenas de nM a gama M 7,15-21.
  3. Aplicar uma tensão de polarização transmembrana potencial com polaridade oposta àquela da carga total da proteína em estudo. Por exemplo, BSA tem uma carga líquida negativa eficaz em pH 7,4 e, portanto, um viés tensão positiva deve ser aplicada. A voltagem aplicada cria gradiente de potencial no interior nanopore e proteínas de cargas opostas será conduzido por forças opostas. Apenas polaridades de tensão que dirigem as proteínas para o nanopore criará sinais mensuráveis.
  4. Um potencial aplicado de 200 mV de magnitude deve ser grande o suficiente para observar a maioria dos analitos de proteína. Eventos aparecem como desvios transitórios atual da linha de base (Fig. 4b).Se nenhum sinal for observado, aumentar a concentração da proteína na câmara. Voltagens mais altas melhorar a relação sinal-ruído. Nanoporos nitreto pode suportar alguns volts.
  5. Adsorção de proteínas vai aparecer como de longa duração mudanças na linha de base atual do nanopore (Fig. 4c).

4. Possibilidades de funcionalização dos nanoporos

Existem vários métodos para a aplicação de grupos funcionais para nitreto de silício 22,23. A maioria dos filmes de nitreto de ter uma fina camada de óxido na parte externa e exposição ao ozônio pode criar uma camada de óxido adicionais, se necessário. Organosilanos diferentes podem ser usados ​​e auto-montados em camadas tais. De particular interesse é aminosilane, que auto-monta e pode ser modificada mais (ácido, ou seja, carboxílicos e aldeídos), permitindo a inspeção de uma série de superfícies orgânicas. Depois de um nanopore foi lavado com piranha e garantidos na Chamber, amina podem ser adicionados diretamente ao banho de câmara com um eletrólito de suporte de 0,5 M TBACl (tetrabutilamónio) e MeOH anidro (metanol), utilizado como solvente. Formação de monocamada pode ser monitorado pela aplicação de um viés de voltagem 400 mV ea medição da queda atual 23.

5. Determinação da aparente de primeira ordem taxa de reação constante ea constante de adsorção de Langmuir usando arrays nanopore paralelo

5.1 O aparente de primeira ordem de reação constantes de velocidade de absorção e dessorção

Ressalta-se que o aspecto positivo desta metodologia é a sua capacidade de observar adsorção individuais no nível única molécula. As medições de molécula única de adsorção de proteínas em uma superfície inorgânicos podem ser ampliados através do emprego de matrizes paralelas de estado sólido nanoporos. A matriz paralela de nanoporos é necessário devido à necessidade de muitos pores do ensaio para obter estatísticas confiáveiss. Para este fim, o uso de uma matriz nanopore permitiria o acompanhamento das adsorção individual, bem como a medição de vários eventos para análise posterior. Uma série de nanoporos em nitreto de silício pode ser formado pelo protocolo acima simplesmente por múltiplos furos na amostra. Cada nanopore devem ser de tamanho similar. Matrizes de nanoporos de 6x6 ou 7x7 deve ser adequada. Após a adição de analito de proteína na câmara, a corrente irá decair de forma exponencial com uma expressão seguinte:

I t = I ∞ - (I ∞ - I 0) exp (-k t ')

Aqui, eu t, denota a corrente em um tempo t experimental. I 0 é a passagem de corrente através originais da matriz nanopore. I ∞ indica o atual nível de saturação (isto é, infinito). K 'é a taxa de reação aparente de primeira ordem constante, o que pode ser determinada a partir ªe ajuste da curva experimental. A maior k 'pode ser interpretada como uma taxa de adsorção mais rápida. A relação I ∞ / I 0, também chamado de saturação normalizada atual, é um número adimensional entre 0 e 1. Este parâmetro é uma medida da ocupação pela analitos proteína adsorvida. Assim, cada condição distinta experimental deve ser associada a dois parâmetros de saída específico eu ∞ / I 0 e k '.

Note-se que o aparente de primeira ordem constantes de velocidade de adsorção e correntes normalizados são impactados pelo tempo efetivo gasto por proteínas dentro do nanoporos. Desta vez, é dependente da concentração dos analitos de proteína na fase aquosa em massa 24. Portanto, a correção adicional desses números precisa ser implementado com base no tempo efetivo gasto pelo proteínas no interior nanopore. Sugerimos a medição da freqüência de fast (translocação) eventos e multiplicando-o pelo tempo médio de permanência de tais eventos. Isto lhe dará o tempo médio de proteínas passou no interior nanopore por unidade de tempo.

A taxa constante de dessorção pode ser determinado usando uma matriz paralela de nanoporos também. Tão logo o nível atual atinge a saturação (I ∞), a tensão deve ser revertida, por isso não mais proteínas estão presos na nanoporos. Dessorção de proteínas individuais será acompanhada pela alteração da corrente registou no sentido de valores maiores. A constante de velocidade será, em seguida, extraído do aumento do nível atual.

5.2 A constante de adsorção de Langmuir

A absorção de proteína analitos nas superfícies inorgânicas dos nanoporos é dependente da concentração de proteína na fase aquosa. Este fenômeno já foi observado no nível de uma única molécula de 13. Se θ representam s da corrente de saturação normalizada (I ∞ / I 0), então uma típica equação de Langmuir isoterma é dado pela seguinte expressão:

Figura 5.2

onde C é a concentração de proteína na fase aquosa. α é a constante de adsorção de Langmuir. Isso aumenta constante com um aumento na energia de ligação de adsorção e com uma diminuição na temperatura. A coleta dos pontos de dados θ vai empregar medidas com matrizes paralelas efectuadas nas concentrações de proteínas diferentes na fase aquosa. Dados devem ser analisados ​​em combinação com outras técnicas para verificar a magnitude da constante de adsorção de Langmuir equipado. Além disso, full-atomística simulações de dinâmica molecular 25,26 pode ser usado também para ajudar as interpretações dos dados obtidos experimental.

title "> 6. Resultados Representante

Os resultados típicos de estado sólido nanoporos será o seguinte. A corrente de poros abertos devem ser altamente estável, como pode ser visto na fig. 4a. As características I / V do nanopore deve ser altamente linear em 1 M KCl, 10 de fosfato de potássio, pH 7,4, como pode ser visto na fig. 2. A inclinação de um ajuste linear à curva I / V fornecerá a condutância unitária do nanopore. A condutância tem uma relação direta com o diâmetro nanopore e deve corresponder a equação: Figura equação , Onde G é a condutância da nanopore, d é o seu diâmetro, l é o seu comprimento, e σ é a condutividade da solução na câmara 14. Este valor deve corresponder a até 30%. Se ele for muito pequeno, seu pore não é provável molhada. Com a adição de proteínas, eventos rápida deve seguir-se, como visto na fig. 4b. Protein adsorção é uma gota de vida longa atual como mostrado na figura. 4c. Algumas proteínas são altamente instáveis ​​e sofrem transformação estrutural no interior dos poros. Neste caso, a queda de tensão de longa duração será acompanhado por flutuações rápidas.

Figura 1
Figura 1. Solid-state nanopore fabricados usando um F20 Tecnai S / TEM. Do poro foi perfurado no modo STEM a um diâmetro de 20 nm. A imagem foi tirada no campo de modo brilhante TEM. Nitreto era de 30 nm de espessura.

Figura 2
Figura 2. Chamber utilizado para o alojamento de um nanopore solid-state único pulso-resistivo medições. A Secção) e um chip de silício com free-standing janela de nitreto (grade TEM). O nanopore é perfurado no nitreto antes de carregar. Red O-rings são usados ​​para formar um bomeal sobre o chip, que separa dois banhos de solução iônica. B) Esquema da câmara mostrando a colocação de banhos solução e eletrodos com relação ao nanopore.

Figura 3
Figura 3. Típicos I / V para os traços de estado sólido nanoporos de diferentes diâmetros. Vestígios de canal único elétrica foram realizadas em 1 M KCl, 20 mM Tris, pH 8.5. Nanoporos foram perfurados em 30 de nitreto de silício nm de espessura. Espessura de nitreto de nota vai afetar a condutância unitária do nanopore.

Figura 4
Figura 4. Medido single-channel traços atuais ea detecção de adsorção de proteínas. A) Um traço único canal eléctricas mostrando a corrente aberta de um nanopore diâmetro de 10 nm. B) representam desvios atual de particionamento de albumina de soro bovino (BSA) no interior do nanopore. C) adsorção de BSA sobre a superfície de nitreto. Todos os traços são do nanopore mesmo em 1 M KCl, 10 mM fosfato de potássio, pH 7,4. O potencial transmembrana aplicada foi de 40 mV e BSA foi adicionado ao banho de câmara fundada em uma concentração de 120 nM.

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Discussion

Adsorção espontânea de proteínas em estado sólido superfícies 27-29 é de fundamental importância em várias áreas, tais como aplicações biochip e design de uma nova classe de biomateriais híbridos funcionais. Estudos anteriores mostraram que as proteínas adsorvidas para solid-state superfícies não apresentam mobilidade lateral ou taxas de dessorção significativa e, portanto, adsorção de proteínas é geralmente considerado um processo irreversível e inespecífico 30-32. Adsorção de proteínas sobre superfícies de estado sólido é pensado para ser devido a vários fatores, incluindo forças eletrostáticas e hidrofóbicas entre as cadeias laterais das proteínas e dos grupos reativos na interface sólido-líquido 13.

O processo de adsorção de proteínas tem sido explorado pelo número de abordagens, como a microbalança de cristal de quartzo 28,29, microscopia eletrônica, 33,34 elipsometria, 35 marcação fluorescente, 36 e planar interferometria de polarização (PPI). 37 Em contraste, esta metodologia única matriz-nanopore e nanopore depende da detectável canal único alterações corrente produzida pelas interações entre single-proteína analitos e do interior nanopore.

O passo mais crítico na obtenção de resultados positivos é a humidificação adequada do interior nanopore. Não deve as características dos poros atender às especificações discutido na seção de resultados, métodos de solução de problemas diversos podem ser usados. Transitória bloqueios atuais que ocorrem sem qualquer proteína em solução pode indicar que a câmara está contaminado. Teflon câmaras podem ser lavados com piranha. PDMS câmaras devem ser feitas a partir de moldes frescos limpos para cada experimento. Nanoporos com menor condutância esperados ou não-linear I / V características podem indicar que molhar não for bem sucedida. A aplicação breve de alta voltagem (5V ~) pode melhorar as características elétricas do nanopore.Caso contrário, o nanopore devem ser lavadas novamente com a solução piranha. Mesmo nas melhores circunstâncias, alguns nanoporos não molhada corretamente. A capacidade de molhar um nanopore depende de suas dimensões. Ambos os nanoporos mais fino de nitreto e nanoporos de maior diâmetro são mais fáceis de molhado que nanoporos grosso nitreto ou nanoporos menor diâmetro. Por 20 nanoporos nm de espessura com um raio de 5 milhas náuticas a taxa de sucesso é de aproximadamente 70% após a primeira lavagem. Cuidados devem ser tomados na escolha de um tamanho nanopore para o seu analito, uma vez que nanoporos deve ser grande o suficiente para acomodar a proteína.

O protocolo discutido aqui só se aplica a adsorção de uma superfície de nitreto de silício. Outras superfícies, tais como óxido de silício 9 ou alumina 23 de maio também ser perfurados usando esta técnica, porém o número de filmes finos suscetíveis a esta técnica é limitada àqueles que podem ser fabricados de modo que sejam free-standing, fina e livre de buracos . Para superar este problema, chrevestimento emical do nanopore pode ser usado 23,38-40. Outro trade-off da técnica nanopore único é que ele pode apenas olhar para uma molécula de cada vez. Para superar esta limitação, nós oferecemos uma alternativa de usar arrays paralelos de estado sólido nanoporos 41. Medições de corrente com arrays nanopore proporcionar uma oportunidade para obter macroscópica parâmetros cinéticos, como o aparente de primeira ordem constantes reação taxa de absorção e dessorção. Além disso, esta abordagem permitiria a determinação da constante de adsorção de Langmuir. Uma limitação imediata dessa técnica é a sua incapacidade para coletar informações sobre superfícies planas e largas. As medições só sonda de adsorção de proteínas dentro de espaços confinados do interior do estado sólido fabricado nanoporos. Em muitos casos, é bastante desafiador para obter informações precisas sobre a geometria ea superfície interna do nanopore. No passado, a adsorção de proteínas foi extensivamente examinard por microbalança de cristal de quartzo 28,29. A adsorção de proteínas na superfície do cristal é acompanhado por um amortecimento do movimento oscilatório do imposto microbalança de cristal, produzindo uma diminuição na freqüência de ressonância. Uma alteração da massa total acoplados devido à adsorção de proteínas induz uma mudança de freqüência da microbalança de cristal de quartzo. A massa de proteína total adsorvido é linearmente relacionado com a mudança de freqüência. Este é o princípio subjacente a esta técnica, que indirectamente sondas adsorção de proteínas em uma superfície bem definida plana. Em contraste, o uso de arrays nanopore emprega a técnica de pulso-resistivo que é muito similar à abordagem contador Coulter 42. Novamente, a técnica nanopore pode ser reduzida a um número limitado de nanoporos em uma membrana, para adsorção individual pode ser acompanhada em tempo real. Em contraste com a microbalança de cristal de quartzo, as medições nanopore não pode avaliar o processo de adsorção em uma grande escala esuperfície plana, em que eventos adicionais podem ocorrer (difusão, ou seja lateral de proteínas adsorvida), produzindo alterações nas isotermas de adsorção de Langmuir. Claro, é desejável que estas abordagens dedicado a adsorção de proteínas deve ser usado em combinação uns com os outros, uma vez que sonda apenas alguns aspectos do processo de adsorção. Por exemplo, Brewer e colegas empregaram uma combinação de microbalança de cristal de quartzo e ζ potencial técnicas para mostrar que BSA vinculativo sobre nanopartículas de ouro e superfícies de ouro ocorre através de um mecanismo de eletrostática.

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Disclosures

Não temos nada a revelar.

Acknowledgments

Os autores gostariam de agradecer a John Grazul (Cornell University), Andre Marziali (The University of British Columbia em Vancouver) e Vincent Tabard-Cossa (The University of Ottawa) para os seus conselhos. Este trabalho é financiado em parte por concessões do National Science Foundation EUA (DMR-0706517 e DMR-1006332) e pelo National Institutes of Health (R01-GM088403). A perfuração nanopore foi realizada no Centro de Microscopia Eletrônica do Centro Cornell de Pesquisa de Materiais (CCMR) com o apoio da National Science Foundation - Ciência dos Materiais de Pesquisa e Centros de Engenharia de programa (MRSEC) (DMR 0.520.404). A preparação das membranas de nitreto de silício foi realizada no Centro de Cornell em nanoescala, um membro da Rede Nacional de Nanotecnologia Infra-estrutura, que é apoiado pela National Science Foundation (Grant ECS-0335765).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Tecnai F20 S/TEM FEI S/TEM requires acceleration voltage ≥200kV and field-emission source.
20 nm thick silicon nitride membrane window for TEM SPI Supplies 4163SN-BA
Axon Axopatch 200B patch-clamp amplifier Molecular Devices
Axon Digidata 1440A Molecular Devices
pCLAMP 10 software Molecular Devices Electrophysiology Data Acquisition and Analysis Software
Sulfuric Acid Fisher Scientific A300
hydrogen peroxide Fisher Scientific H325
silicone O-rings McMaster-Carr 003 S70 Alternatively use PDMS
silver wire Sigma-Aldrich 348759 For electrodes
SPC Technology, D sub contact, pin Newark Inc 9K4978 For electrodes
potassium chloride Sigma-Aldrich P9541
potassium phosphate dibasic Sigma-Aldrich P2222
potassium phosphate monobasic Sigma-Aldrich P5379
PDMS Dow Corning Sylgar 184 Elastomer set. For making chamber.
Kwik-Cast Sealant World Precision Instruments, Inc. KWIK-CAST Fast acting silicone sealant
hot plate Fisher Scientific
Faraday cage

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Monitoramento adsorção de proteínas com Solid-state Nanoporos
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Niedzwiecki, D. J., Movileanu, L.… More

Niedzwiecki, D. J., Movileanu, L. Monitoring Protein Adsorption with Solid-state Nanopores. J. Vis. Exp. (58), e3560, doi:10.3791/3560 (2011).

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