Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Biology
Click here for the English version

Biology

Исследование кишечного воспаления в DSS-индуцированной модели IBD

Published: February 1, 2012 doi: 10.3791/3678
Automatic Translation
1, 1, 1, 1
1Farncombe Family Digestive Health Research Institute, Department of Pathology and Molecular Medicine, McMaster University

Summary

Экспериментальные модели воспалительных заболеваний кишечника позволили нам изучить сложный врожденный и адаптивный иммунный ответ связана с патогенезом. Использование гистологического забил, количественное определение провоспалительных цитокинов и активность миелопероксидазы, можно приступить к оценке этих ответов видно при воспалительных заболеваниях кишечника.

Protocol

1. Мышиной модели DSS-индуцированного острого колита

  1. Добавить декстран сульфат натрия (DSS) для автоклавного питьевой водой желаемой конечной концентрации (1-5%) (вес / объем) (т. е. Для того, чтобы 5% DSS решение, добавьте 25 мг DSS порошка на 500 мл воды из автоклавного) . Маточный раствор можно оставить при комнатной температуре в течение одной недели или при температуре 4 ° С до использования.
  2. В капоте биобезопасности, залить маточного раствора DSS в 50 мл Сокол труб (один необходимый в каждой клетке). Хранить исходный раствор для пополнения трубы в случае необходимости.
  3. Замените питьевую воду в каждой мыши клетку с DSS решение (в 50 мл Сокол труб) (продолжительность будет зависеть от DSS режим, который используется. Например, при использовании 6-8 недели летний мужчина C57BL / 6 мышей, мы администрировать 5% DSS решение для всего пять дней). Мыши не должны иметь доступ к любому другому источнику воды. Контрольные мыши приведены автоклавного питьевой воды без DSS.
  4. Взвесьте мышей ежедневно и записывать количество потребляемой DSS в день. Топ каждогоБутылка до 50 мл после записи DSS уровнях. Это необходимо для приблизительного измерения объема потребляемой DSS в каждой клетке на мышь в течение всего срока эксперимента. В наших исследованиях мы используем 5% DSS решение в течение 5 дней с мужским C57BL / 6 мышей. Значительная потеря веса, изменения последовательности стуле и признаки кровь в кале видны уже в 3-й день использования данного режима DSS. Во время DSS администрации, мышей выставку выраженная потеря веса (около 5-10% от их исходного веса в день 5) с потерей веса более 20% от первоначального веса с обезвоживанием и диареей должны быть значительные физиологические показатель того, что животное находится на уровне или возле конечной точки. Если животное получает доступ к обычной водой после 5 дней в размере 5% DSS, он будет восстанавливаться в течение 7 дней. Все эксперименты должны быть одобрены животных учреждения комитета по этике и осуществляется в соответствии с утвержденным протоколом животных применения (АУП).
  5. Во время эксперимента, индекс активности заболевания (DAI)оценка может быть оценен оценить клиническое прогрессирование колита. DAI является комбинированный счет потери веса по сравнению с начальным весом, консистенции стула, и кровотечение. Результаты определяются следующим образом: потеря веса: 0 (без потерь), 1 (1-5%), 2 (5-10%), 3 (10-20%) и 4 (> 20%); консистенции стула: 0 (нормальное), 2 (жидкий стул), и 4 (понос), а также кровотечения: 0 (без крови), 1 (Hemoccult положительный), 2 (Hemoccult положительные и визуальные гранул кровотечения), и 4 (валовой кровотечение, кровь вокруг анус). DAI может быть засчитан в сутки в течение длительности лечения DSS.
  6. В то время точке выбора, взвесить и жертвы мышей. Мыши могут быть умерщвлены цервикальным сдвигом после ингаляции изофлюрана или другим методом, утвержденным животного объект учреждения.

2. Сбор образцов тканей толстой

  1. Expose брюшной стороне животного и мокрого живота с 70% раствором этанола. На данный момент, см. таблицу 1 и запишитепу признаки ректального кровотечения (кровь, присутствующих на анальное отверстие) или выпадения прямой кишки у каждого животного.
  2. Используйте стандартные рассечение ножницами надрезать брюшко, делая разрез вентральной срединной линии.
  3. Найдите толстой кишки и разреза толстой кишки как можно ближе к толстой маржи по возможности свободной дистальной толстой кишке.
  4. Аккуратно и медленно вытащить весь толстой кишки, отделяя ее от окружающих брыжейки.
  5. Трансекта толстой кишки на colonocecal маржу, чтобы освободить проксимального конца толстой кишки. Кал может быть удален путем промывки толстой кишки стерильной PBS с помощью желудочного зонда игла прилагается к 3 или 5 мл шприц, либо тщательно сжимая его с помощью пары изогнутых пинцетов / щипцами. Использование всей толстой кишки, оценка ущерба (см. раздел 3.1)
  6. Отбор проб ткани для гистологического анализа и другие анализы можно сделать за счет сокращения 0,5 см до 1,0 см в длину толстой фрагменты принятия к сведению, в каком районе пробы из (т.е. проксимальные, средней или дистальной).
  7. Образцы тканейкоторые будут использоваться для анализов могут быть индивидуально помещены в 1,5 мл труб Эппендорф и замораживали в жидком азоте и хранят до использования при -70 ° C.

3. Оценка степени тяжести колита

  1. Макроскопические или оценка тяжести заболевания оценивается неизлечимо от беспристрастного наблюдателя, используя ранее опубликованные балльной системе (табл. 1). 9 консистенции стула может быть оценено с помощью пара щипцов и нажав на кала, чтобы определить консистенцию. Чтобы определить рейтинг в крови в кале, обратите внимание на цвет кала (например, черный стул против светло-коричневый стул) и далее проверку с помощью Hemoccult тест. Использование балльной системы, определить балл по каждому из условий. Окончательный макроскопических оценка для каждого животного есть сумма каждого отдельного счета.
  2. Для оценки гистологического повреждения колит тяжести, вырезать небольшой фрагмент (0,5 см) толстой кишки, место в ткани кассету и погрузиться в буферном 10% раствором формалина. Подготовка 5мкм парафин сечений и пятна разделы гематоксилином / eoxin (H & E) при помощи соответствующих процедур. Колон фрагменты могут быть взяты из проксимального, среднего толстой кишки, или дистального отдела толстой кишки.
  3. H & E окрашенных толстой разделах ткани забил ослеплен наблюдателя, используя ранее опубликованные системы следующих мер: склеп архитектуры (нормальный, 0 - суровые склеп искажение с потерей всей склепы, 3), степень воспалительной инфильтрации (нормальный, 0 - плотных воспалительных инфильтратов, 3), мышечные утолщения (база склепа сидит на мышечной слизистой, 0 - отметил присутствующий утолщение мышц, 3), кубок ячейке истощения (отсутствует, 0 - по настоящее время, 1) и склеп абсцесс (отсутствует, 0 - по настоящее время , 1). 7 гистологические оценка ущерба сумма каждого отдельного счета. Следует отметить, что в отличие от человека UC, абсцессы крипт не характерны для этой модели и редко встречаются, микроскопические изъязвления также редки. Если несколько разделов толстой кишки былиокрашенных, гистологические счетов между подобные секции должны быть использованы для определения окончательной оценки для каждой области (т.е. гистологическое счет в проксимальных толстой кишки по сравнению с гистологическим счет в дистальной толстой кишки).

4. Подготовка растворы реактивов для анализов

  1. Подготовка 50 мМ раствора калий фосфатный буфер, добавив раствор B (K 2 HPO 4, 8,7 г двухосновный фосфат калия в 1 л дН 2 O), чтобы решение (KH 2 PO 4, 6,8 г однозамещенный фосфат калия в 1 л Д. Х. 2 O) до рН 6,0 достигается. Остальные решения можно хранить в холодильнике (2-8 ° С) до использования в будущем.
  2. Подготовка hexadecyltrimethylammonium бромид (HTAB) буфер добавлением 5 г HTAB в 1 л калий фосфатный буфер (50 мМ, рН = 6,0). Аккуратно тепла, чтобы растворить и храните при температуре 2-8 ° C до использования. При необходимости, тепло повторно раствориться.
  3. Подготовка буфера для лизиса ткани гомогенизации для белка анализадобавив 10 мл 1М Трис-соляной кислоты (рН = 8,0), 6 мл 5М хлорида натрия и 2 мл Тритон Х-100 до 182 мл стерилизованной дистиллированной водой. Тритон Х-100 является очень вязким при комнатной температуре и, следовательно, должны быть аккуратно нагревают до использования. Подготовленный буфер лизис можно хранить при температуре от -20 ° C до использования.

5. Подготовка проб для анализов

  1. Подготовка проб для анализа МПО.
    1. Удалить образцы от -70 ° C и место на льду. Запись вес каждого образца после удаления видимых калом или жира с помощью изогнутых forcep / пинцет и поместить в 2 мл Eppendorf Safe-Блокировка микроцентрифужных трубки (или любую трубку, которая может быть использована с гомогенизатор). Образцы следует хранить на льду во все времена. Важно отметить, что подобные фрагменты толстой кишки должны использоваться с каждой биологической репликации (то есть только в дистальных отделах или проксимальной разделы только).
    2. Добавить гомогенизатор бусинку к каждой пробе трубки.
    3. Добавить соответствующее количество HTAB буферефер по ткани весом. Если ткань весом меньше 25 мг, добавить буфера в соотношении 12.5mg/mL, если ткань вес составляет от 25-50, добавить в соотношении 25mg/mL. Если ткань весит больше 50, добавить буфера в соотношении 50мг/мл.
    4. Однородный с тканью гомогенизатора в течение 4 мин при 30 Гц. Повторите, если ткани не полностью гомогенизированных.
    5. Удалить гомогенизатор бисером и центрифуги решение в течение 6 мин (13 400 мкг, 4 ° С).
    6. Сбор супернатант и отбросить результате осадок. Supernatent может храниться при -70 ° C до использования.
  2. Подготовка проб для анализа цитокинов.
    1. Повторите шаги 5.1.1. на 5.1.2.
    2. Добавить 50 мкл ингибитора протеазы коктейль (ПОС) по 10 мл подготовленный буфер лизиса.
    3. Добавить 1 мл ПИК и лизис буферный раствор для каждого образца, независимо от веса.
    4. Однородный в течение 5 мин при 30 Гц. Повторите, если ткани не полностью гомогенизированных.
    5. Удалить гомогенизатор бисером и центрифуги solutiв течение 5 мин при 3300 х g.
    6. Сбор супернатант и отбросить результате осадок. Супернатант можно хранить при температуре -70 ° C до использования.

6. Количественная оценка воспалительных маркеров

  1. МПО анализа деятельности
    1. Подготовка-дианизидина дигидрохлорид (о-дианизидина) решение, объединив 16,7 мг-дианизидина дигидрохлорид, 90 мл дН 2 O и 10 мл калий фосфатный буфер. Это решение должно быть подготовлено свежей для каждого теста.
    2. Добавить 7 мкл гомогената ткани (подготовлен в разделе 5.1) в трех экземплярах в 96-луночного планшета.
    3. Добавить 50 мкл разбавленной H 2 O 2 (4 мкл 30% H 2 O 2, разведенного в 96 мкл дН 2 O) на о-дианизидина смеси.
    4. Использование многоканальной пипетки добавить 200 мкл-дианизидина смеси, содержащей H 2 O 2 на каждый из скважин.
    5. Мера абсорбцию при 450 нм, используя spectrophotometer. Возьмите трех чтениях на 30-секундным интервалом.
    6. Рассчитать МПО деятельности. МПО активность измеряется в единицах (У) MPO / мг ткани, где одна единица МПО определяется как сумма, необходимая для ухудшить 1 мкмоль H 2 O 2 в минуту при комнатной температуре. Учитывая, что одна единица (У) МПО = 1 мкмоль H 2 O 2 раскол и что 1 мкмоль H 2 O 2 дает изменение поглощения 1,13 х 10 -2 нм / мин, подразделения МПО в каждом образце определяется как изменение абсорбции [ΔA (T 2-T 1)] / Δmin х (1,13 х 10 -2). Чтобы получить единиц на мг ткани, использование тканей: буфер отношение. Например, если ткани: буфер соотношении 50 мг / мл была использована, в 7 мкл гомогената, есть 0,35 мг ткани. Поэтому, чтобы получить единиц на мг ткани, разделить единиц МПО на 0,35. Пример расчета с использованием значения абсорбции (нм) приведена ниже (при условии, что образец был добавлен в трех экземплярах):
Образец Время 0 сек Время 30 сек Время 60 сек
1 2 3 1 ' 2 ' 3 ' 1 " 2'' 3 "
0,048 0,048 0,051 0,061 0,061 0,065 0,074 0,073 0,078
  1. Среднее время на 0 сек = (0,048 + 0,048 + 0,051) / 3 = 0,049 нм
  2. Среднее время на 30 сек = 0,0623 нм
  3. Среднее время на 60 сек = 0,075 нм
  4. Изменение абсорбции (ΔA) от 0 до 30 сек / мг ткани (при условии 50 мг / мл ткани: буфер коэффициент) = [(0.0623-0.049) / (1,13 х 10 -2)] / 0,35 = 3,363
  5. Изменение поглощенияAnce (ΔA) от 30 до 60 сек / мг ткани = 3,211
  6. * МПО деятельности (U / мг ткани) = средняя ΔA (0-30) и ΔA (30-60) = 3,287
  1. Количественная оценка провоспалительных цитокинов методом ИФА
    1. Цитокинов (ИЛ-1β, IL-6 и TNF-α) уровней определяются с помощью коммерчески доступных иммуноферментного анализа (ИФА) комплект (Quantikine мышей, R & D Systems).
    2. Поглощение значения из каждой ИФА нормирован использованием анализа Брэдфорда белка соответствующих для каждого образца и выражается в единицах пг / мг белка.

7. Представитель Результаты

Администрация соответствующего режима DSS будет вызывать острого колита у мышей. Во время длительность лечения DSS, DAI могут быть использованы для определения и оценки клинической прогрессии заболевания. Животных, получавших DSS покажет значительные потери веса по сравнению с их начальным весам, жидкий стул и фекальныекровотечения (рис. 1). По жертву и экспертиза толстой кишки, тяжесть колита макроскопически забил на основе сокращения толстой кишки длиной, толстой кровотечение, фекальные кровотечения, ослабление консистенции стула, и признаки ректального кровотечения по сравнению с контрольной обрабатывают водой только (рис. 2 и таблица 1). Сечения толстой образцы ткани окрашивали H & E будет иметь более высокие показатели для гистологического DSS обработанных двоеточия по сравнению с водой обработанные управления (рис. 3). Для дальнейшего характеризуют степень воспаления в DSS-мышей, МПО деятельности может быть оценена из толстой гомогенизированных образцов тканей. DSS обработанных двоеточия будет иметь более высокую МПО активностью по сравнению с контрольной группой (рис. 4). Кроме того, это связано с повышением уровня провоспалительных цитокинов (ИЛ-1β, IL-6, TNF-α) (рис. 5).

Рисунок 1.
Рисунок 1. Мужчина, C57BL / 6 мышей давали 5% DSS в питьевой воде в течение 5 дней. DAI оценки были оценены в день на каждого животного и были усреднены в день для каждой группы (среднее ± SEM, п = 4 мышей / группы).

Рисунок 2.
Рисунок 2. C57BL / 6 мышей давали 5% DSS в питьевой воде в течение 5 дней. Контрольные мыши получали воду без DSS. Макроскопическая оценка повреждения / заболевания оценки степени тяжести были слепо оценивается по 5-й день после DSS-индуцированной колит. Колоны изолирован от мышей, получавших DSS имеют высшее макроскопические повреждения баллов (ректальные кровотечения, выпадения прямой кишки, диарея, кровотечение толстой) с указанием большей тяжести заболевания (среднее ± SEM, п = 4 мышей / группы).

Рисунок 3
Рисунок 3. C57BL / 6 мышей давали 5% DSS решение в питьевой воде для того, чтобы вызвать колит. Контрольные мыши получали воду без DSS. (А) Гистологическое оценки были слепо забил использованием H & E окрашенных срезах тканей толстой собранных на 5 день после DSS администрации. (B) DSS обработанные образцы показывают более гистологического повреждения (более клеточной инфильтрации, более истощения кубок клетки, большее искажение / повреждения склеп архитектуры) по сравнению с (С) контрольной группы (среднее ± SEM, п = 4 мышей / группы). В (Б) и (С), звездочки (*) указывает область кубок истощение клеток и искажение склеп архитектуры; знак номера (#) указывает клеточной инфильтрации.

Рисунок 4.
Рисунок 4. Все мыши были принесены в жертву на 5 день после введения DSS и толстой образцы ткани были собраны для оценки МПО деятельности. Тяжесть DSS индуцированной колит связан с более высоким уровнем МПО активностью по сравнению с контрольной группой (среднее ± SEM, п = 4 мышей / группы).

_upload/3678/3678fig5.jpg "/>
Рисунок 5. В дополнение к более высоким уровнем МПО, тяжести DSS-индуцированной колит также связано с повышенным уровнем про-воспаление цитокинов, таких как IL-1β, IL-6, TNF-α (среднее ± SEM, п = 4 мышей / группы).

Таблица 1. Макроскопические / Оценка тяжести заболевания

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

DSS колит широко используются химически индуцированных модель кишечного воспаления. В этой модели мышей приведены питьевой воды дополнена DSS, который, как полагают, быть токсичными для клеток эпителия кишечника и нарушают целостность слизистой оболочки барьер. 10 Администрации DSS вызывает острый колит, который характеризуется жидким стулом, фекальных кровотечение, и инфильтрация гранулоцитов. 10 Во время DSS администрации, колит, как правило, связаны со значительными потеря веса и наличие крови в кале, которые можно оценить с помощью фекальных скрытую кровь. 5.10,11 После сбора образцов тканей толстой, колит тяжести может быть характеризуются макроскопическими обследование толстой кишки и гистологический анализ H & E окрашенных толстого сечения с использованием ранее установленных систем забив 9.

Когда после этого протокола, важно отметить, что тяжесть колита индуцированныхDSS является вида и штамма 12. Кроме того, различия в микрофлоре кишечника различных объектов животного и жилищно номеров может изменить исход администрации DSS. 13,14 Таким образом, первоначальные исследования с использованием DSS могут потребоваться для оптимизации доз и длительности DSS лечения. Неспособность оптимизировать эти переменные могут привести к высокой заболеваемости смерти или практически не колит. Как только оптимизировать, эта модель может быть использована в качестве высокой воспроизводимостью модели колита с низким уровнем смертности. Кроме того, важно использовать DSS указанного молекулярной массы (см. таблицу реагентов). Другие формы DSS реагента соли может не принести колит или могут привести к высокой заболеваемости смерти.

Индукция колитах с использованием этой модели приводит к тяжелым макроскопические и гистологические повреждения, что связано с повышенным МПО деятельности, а также более высокие уровни провоспалительных цитокинов. Агранулоциты, таких как лимфоцитыг моноциты, являются важным источником провоспалительных цитокинов, в то время как МПО является ферментом, содержащихся в гранулоциты, такие как нейтрофилы (и в меньшей степени, моноциты и макрофаги). Этот протокол также может быть использован для измерения МПО деятельности в толстой образцов тканей обработанных динитробензол сульфокислоты (DNBS) -. Индуцированной колит 15 DNBS вызванных колит также характеризуется Т-клеточного трансмуральный воспаление толстой кишки, который находится в ведении интраректального инстилляции из DNBS вещества в этанол. Этанол 16 используется, чтобы сломать барьер слизистой оболочки, что позволяет DNBS к haptenize для аутологичных или микробиоты белков стимулирует иммунный ответ на гаптен-изменение само-антигенов. 16 Одно из преимуществ этой модели по сравнению с DSS-индуцированной модели является то, вызывая агента известна. Механизм, посредством которого DSS инициирует колита, однако, еще предстоит определить. Интересно, что исследования показали, что DSS администрации причины кишечнойтис в естественных киллеров клетка с дефицитом, и Т-и В-клеток у мышей с дефицитом, предполагая, что эти клетки (связанный с адаптивной иммунной системы), не может иметь решающее значение в индукции колита и, таким образом, эта модель может быть пригодна для изучения Роль иммунной системы в поколение колит. 4,17

Для получения более точной мерой МПО деятельности, мы обнаружили, что независимо от того, колит модель используется, МПО уровней должны быть определены в течение первой недели ткани коллекции как МПО деятельности имеет тенденцию к снижению с течением времени. МПО деятельности может быть использован в качестве суррогатного маркера воспаления. Тем не менее, количественное ткани цитокинов и гистологических забил являются неотъемлемой частью для облегчения полной оценки воспалительных реакций в течение колита.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Нет конфликта интересов объявлены.

Acknowledgments

Работа выполнена при поддержке грантов от канадского Института Здоровья Исследований (CIHR) и Крона и колит Фонд Канады (CCFC).

Materials

Счет Кровотечение из прямой кишки Выпадения прямой кишки Консистенции стула Кровь
0 Ни один Ни один Нормальный Нормальный
1 Красный Признаки выпадения Мягкий Красный
2 Темно-красный Очистить пролапс Очень мягкая Темно-красный
3 Валовой Кровотечение Обширные пролапс Понос Черный
Name Company Catalog Number Comments
Eppendorf Safe-Lock Microcentrifuge Tube (2mL) Eppendorf 0030 120.094
Biotek EL808 Absorbance plate reader BioTek EL808
Dextran sulphate sodium salt reagent grade (molecular weight 36,000-50,000 Da) MP Biomedicals 160110
Gen5 (software) BioTek Version 1.10.8
Hexadecyltrimethylammonium bromide (HTAB) Sigma-Aldrich H5882-100G
Hydrogen peroxide, 30 wt.% solution in water Sigma-Aldrich 216763 Store at 2-8°C
Microtest plate 96-well flat bottom Sarstedt Ltd 82.1581 For single use only
o-Dianisidine Sigma-Aldrich D-3252 Light sensitive. Store at 2-8°C
Potassium phosphate, dibasic Caledon 6620-1
Potassium phosphate, monobasic EMD Millipore PX1565-1
Protease inhibitor cocktail Sigma-Aldrich P8340 Store at -20°C
Triton X-100 Sigma-Aldrich T8787
Tungsten Carbide beads for Tissue Lyser II Qiagen 69997

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Sands, B. E. From symptom to diagnosis: clinical distinctions among various forms of intestinal inflammation. Gastroenterology. 126, 1518-1532 (2004).
  2. Danese, S., Fiocchi, C. Etiopathogenesis of inflammatory bowel diseases. World J. Gastroenterol. 12, 4807-4812 (2006).
  3. Wirtz, S., Neufert, C., Weigmann, B., Neurath, M. F. Chemically induced mouse models of intestinal inflammation. Nat. Protoc. 2, 541-546 (2007).
  4. Axelsson, L. G., Landstrom, E., Goldschmidt, T. J., Gronberg, A., Bylund-Fellenius, A. C. Dextran sulfate sodium (DSS) induced experimental colitis in immunodeficient mice: effects in CD4(+)-cell depleted, athymic and NK-cell depleted SCID mice. Inflamm. Res. 45, 181-191 (1996).
  5. Egger, B., Bajaj-Elliott, M., MacDonald, T. T., Inglin, R., Eysselein, V. E., Büchler, M. W. Characterisation of acute murine dextran sodium sulphate colitis: cytokine profile and dose dependency. Digestion. 62, 240-248 (2000).
  6. Krawisz, J. E., Sharon, P., Stenson, W. F. Quantitative assay for acute intestinal inflammation based on myeloperoxidase activity. Assessment of inflammation in rat and hamster models. Gastroenterology. 87, 1344-1350 (1984).
  7. Cooper, H. S., Murthy, S. N., Shah, R. S., Sedergran, D. J. Clinicopathologic study of dextran sulfate sodium experimental murine colitis. Lab. Invest. 69, 238-249 (1993).
  8. Smith, J. W., Castro, G. A. Relation of peroxidase activity in gut mucosa to inflammation. Am. J. Physiol. 234, R72-R79 (1978).
  9. Ghia, J. E., Blennerhassett, P., Kumar-Ondiveeran, H., Verdu, E. F., Collins, S. M. The vagus nerve: a tonic inhibitory influence associated with inflammatory bowel disease in a murine model. Gastroenterology. 131, 1122-1130 (2006).
  10. Okayasu, I., Hatakeyama, S., Yamada, M., Ohkusa, T., Inagaki, Y., Nakaya, R. A novel method in the induction of reliable experimental acute and chronic ulcerative colitis in mice. Gastroenterology. 98, 694-702 (1990).
  11. Solomon, L., Mansor, S., Mallon, P., Donnelly, E., Hoper, M., Loughrey, M., Kirk, S., Gardiner, K. The dextran sulphate sodium (DSS) model of colitis: an overview. Comparative Clinical Pathology. 19, 235-239 (2010).
  12. Mähler, M., Bristol, I. J., Leiter, E. H., Workman, A. E., Birkenmeier, E. H., Elson, C. O., Sundberg, J. P. Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis. Am. J. Physiol. 274, G544-G551 (1998).
  13. Hans, W., Scholmerich, J., Gross, V., Falk, W. The role of the resident intestinal flora in acute and chronic dextran sulfate sodium-induced colitis in mice. Eur. J. Gastroenterol. Hepatol. 12, 267-273 (2000).
  14. Rath, H. C., Schultz, M., Freitag, R., Dieleman, L. A., Li, F., Linde, H., Schölmerich, J., Sartor, R. B. Different subsets of enteric bacteria induce and perpetuate experimental colitis in rats and mice. Infect. Immun. 69, 2277-2285 (2001).
  15. Ghia, J. E., Li, N., Wang, H., Collins, M., Deng, Y., El-Sharkawy, R. T., Côté, F., Mallet, J., Khan, W. I. Serotonin has a key role in pathogenesis of experimental colitis. Gastroenterology. 137, 1649-1660 (2009).
  16. Elson, C. O., Beagley, K. W., Sharmanov, A. T., Fujihashi, K., Kiyono, H., Tennyson, G. S., Cong, Y., Black, C. A., Ridwan, B. W., McGhee, J. R. Hapten-induced model of murine inflammatory bowel disease: mucosa immune responses and protection by tolerance. J. Immunol. 157, 2174-2185 (1996).
  17. Dieleman, L. A., Ridwan, B. U., Tennyson, G. S., Beagley, K. W., Bucy, R. P., Elson, C. O. Dextran sulfate sodium-induced colitis occurs in severe combined immunodeficient mice. Gastroenterology. 107, 1643-1652 (1994).

Tags

Медицина выпуск 60 воспаление миелопероксидазы (МПО) острые толстой повреждения гранулоцитов толстой кишки декстран сульфата натрия (DSS) нейтрофилов
Исследование кишечного воспаления в DSS-индуцированной модели IBD
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Kim, J. J., Shajib, M. S., Manocha,… More

Kim, J. J., Shajib, M. S., Manocha, M. M., Khan, W. I. Investigating Intestinal Inflammation in DSS-induced Model of IBD. J. Vis. Exp. (60), e3678, doi:10.3791/3678 (2012).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter