Summary
Трансгенные мыши были чрезвычайно полезны в приписывании физиологические функции генов. Таким образом, исследование в целом, и функциональные исследования дыхательных путей, в частности, прошли замечательный переход к мышиной модели. Здесь мы предлагаем протоколов
Protocol
1. Оборудование
Основными компонентами устройства измерения сокращения схематически показаны на рисунке 2А).
- Ткани ванны. Ткани ванны обеспечивает кислородом физиологическом растворе в теплой температуре. Для мышей кольца трахеи, мы используем 10 мл ткань ванне, содержащей водяной рубашкой для циркуляции потепление решение, фриттованного входе стекла пузырь кислорода (95% / 5% O 2 / CO 2 смеси) и впускные и выпускные отверстия для изменения решений. Решение водохранилище PSS хранится с постоянной кипящей 95% / 5% O 2 / CO 2 в смеси 37 ° С водяной бане (не показано). Для решения биржи, PSS решение подается из резервуара на входе ткани ванны (нижний порт), примерно 100 мл в минуту, чтобы относительно быстрое решение обмен. Решение выход через переполнение (верхний порт порт), что позволяет постоянном объеме (~ 10 мл) в тканях летучих мышейч при решении обмена. Мы используем Haake циркуляционный насос для отопления теплой водой через куртку ванной ткань (для поддержания 37 ° C). Ткань ванны могут быть получены от ряда поставщиков и бывают различных размеров и стилей, чтобы соответствовать потребностям экспериментальных следователя.
- Датчик силы. Для измерения изометрического напряжения, трубка трахеи с резьбой на Г-образный концы двух стержней из нержавеющей стали (рис. 2A). Следует проявлять осторожность в использовании из нержавеющей стали типа, совместимого с биологическим материалом. Верхний стержень подключен через клип изометрической датчик силы. Нижняя планка имеет трахеи в фиксированном положении, а также устанавливается на микрометр для настройки пассивного напряжения и / или длины мышцы. Сокращение трахеи создает напряженность на датчик силы, которая преобразуется в сигнал напряжения на предусилитель. Нижняя планка может быть настроена, чтобы включить два прямоугольных пластин платины (4 мм друг от друга), т шляпа фланге трахеи (рис. 2В). Платиновой пластины подключены к траве S88 стимулятор, который позволяет поставку электрического поля через трахею. Открытые провода и припаять покрыты Sylgard (Sylgard 184 силиконового эластомера, Dow Corning Corp, Midland, MI), для предотвращения выщелачивания металлов в ванну решение.
- A / D конвертер, компьютеров и приобретение программного обеспечения. Сигналы с предусилителей записываются на MacLab 8 A / D системы. Это старая версия текущей аппаратной ADInstrument PowerLab. Мы используем программу Chart (ADInstruments), что позволяет осуществлять непрерывную запись напряжения в течение всего эксперимента. Напряженность поколения мышцы трахеи довольно медленно, и поэтому мы находим, что приобретение 100 точек в секунду является адекватной. Напряжение измерения Калибровка с использованием известных веса (до 5 г) Перед каждым экспериментом. Подобные системы имеются в других продавцы (например, BioPac, GW Instruments).
- Перед ткани изоляции датчик силы калибруется с известными весами и ткани ванна заполнена нормальной PSS (см. таблицу). Приточного воздуха регулируется для получения светового потока О 2 / CO 2.
- Трахеи от двух месяцев и старых мышей, являются оптимальными. Младший животные могут быть использованы, но трахеи, полученная из этих требуют большего мастерства для монтажа на датчик силы проводов из-за их малого размера. До вскрытия, мышей глубоко седативные с ИФ. Надлежащий уровень седации достигается, когда нога щепотку щипцами не может получить ответ. Мыши сразу же пожертвовал шейки дислокации важное замечание. Мы заметили, что Avertin (Tribromoethanol), седативные широко используется в мыши, имеет сильные слабительное воздействие на гладких мышц дыхательных путей, и поэтому не должны использоваться для исследования трахеи сокращения.
- Кожи (и меха) удаляется из груди к горлу. RIBS срезают у основания грудины, по бокам (с обеих сторон) в верхней части сердца. Грудины и ребер, затем рванул вперед к горлу, чтобы раскрыть сердце / легкие, вилочковая железа, трахея (вентральной) и пищевода (прилагается - и спинной в трахею).
- Трахеи вырезали за счет сокращения ниже бронхиальной бифуркации и выше глотки. Трахеи находится в ледяной кислородом (95/5) PSS решение (состав приведен в таблице).
- Трахеи расчлененный чистой окружающих тканей. Во время очистки, трахеи может быть проведена в глотке или ниже бифуркации. Тем не менее, следует проявлять осторожность, чтобы не непосредственно применить щипцы для себя трахеи. Изобразительное ножницы могут быть использованы, чтобы отрезать окружающих тканей, а разрез всегда должна быть параллельна трахею, чтобы избежать повреждений. Эта часть процедуры облегчается, если подготовка трахеи закреплен ниже бифуркации и выше глотки на Sylgard покрытием блюдо (Sylgard 184 СиликоноваяЭластомер, Dow Corning Corp, Midland, MI).
- После удаления окружающие ткани, трахею разрезают ниже глотки и над бронхиальной бифуркации и аккуратно установлены на проводах датчик силы.
- Трахеи с резьбой на два L-образных металлических зубцов (рис. 2A). Один контакт связан с форс-датчик перемещения для непрерывной записи изометрического напряжения. Другой контакт подключен к микрометра. Ткани ванны поднял, так что в трахею погружается в PSS. Монтаж трахеи должно быть сделано как можно быстрее, чтобы свести к минимуму время, трахеи проводятся за пределами PSS. С практикой, монтаж трахеи может быть сделано в течение одной минуты, но мы вообще избежать раза больше, чем за 3 минуты, чтобы избежать потери жизнеспособности.
- Микрометр регулируется медленно получения пассивного напряжения ~ 10 мин (~ 1 грамм-силы). Оптимальный отдыха напряжение определяется эмпирически, и мы обнаружили, что пассивное напряжение ~ 5 - 10 мН результатов в эквиваленте, максимальный ответ на стимуляцию высоким содержанием калия. Это согласуется с рядом других исследований, которые используют пассивные напряженность в этой области 16,17,18. В течение первых 5-10 минут, трахеи пассивный напряженность имеет тенденцию к снижению степени (стресс-релаксации явление) и микрометра используется для настройки пассивного напряжения до ~ 10 мин во время равновесия. Трахеи, допускается, чтобы уравновесить, по крайней мере за 1 час до экспериментальных задач.
3. Высокая калия стимулирование
После уравновешивания, трахеи оспаривается в два раза с высокой решение PSS калия (67 мМ KCl, таблица I). Сокращение как правило, требуется ~ 5-10 минут, чтобы достичь стационарного в это время ткани ванны промывается несколько раз с нормальным PSS полностью расслабиться в трахею. Калий сокращение повторяется второй раз, и в третий раз (при необходимости) до воспроизводимые сокращения получаются.
Трахеи в окружении двух прямоугольных пластин платины (электроды), которые позволяют электрической стимуляции поля (Ф) к препарату. Сократительной ответ EFS является функцией частоты и напряжения. Это также зависит от физических параметров, таких как площадь электродов и расстояние между ними. Энергетических характеристик стимулятор также влияют на ответы, что при более высоких напряжениях и выходы стимулятор может достичь своего максимума. Характеристика любой системы EFS должна быть определена путем изучения мышцах сократительных реакций на различные стимулы длительности, частоты, напряжения и длительности импульсов. Для нашей экспериментальной установке, мы обнаружили, что электроды, разделенные ~ 4 мм, а также стимулирование амплитудой 44 В (0,5 мс импульсов) и 30 Гц являются оптимальными для получения воспроизводимых почти максимальной сократительной реакции.
5. Сокращение EvОКЭД при стимуляции холинергических
Отзывчивость трахею экзогенно применяются соединения оценивается либо путем добавления одной дозы препарата интерес или, по несколько дополнений препарата в кумулятивной дозы моды. Для трахеи, наша лаборатория регулярно используются карбахолина активировать холинорецепторы, потому что, в отличие от ацетилхолина, карбахолина не разлагаются ацетилхолинэстеразы. Разумных доза-реакция в пределах от 10 -8 до 10 -5 М карбахолина. Установка из журнала [карбахолина]-сократительной реакции кривой Хилла уравнение типа позволяет оценке ЭК 50 (половина максимальной эффективной концентрации), которая является мерой чувствительности трахеи сокращение на холинергические агонисты 19. Стоит отметить, что данная доза карбахолина даст несколько больший отклик в виде разовой дозы, чем как часть совокупной кривой ответа доза.
6. Представитель Результаты Пример сократительной ответ на высокие калия показано на рисунке 3А. Сокращение достигает максимума в течение примерно 10 минут, но может показать небольшое снижение в последующий период. В начале размыва высоким содержанием калия, мышцы могут показать преходящее повышение сокращений, что связано с понижением температуры, как небольшой объем неотапливаемых решение PSS в решении линии временно perfuses препарата. Это может быть сведено к минимуму с минимальным мертвым объемом в НКТ подключения резервуара с подогревом PSS и ткани ванны, а также путем обмена решение относительно быстро (как правило, мы качаем решения на 100 мл / мин). Каждый препарат будет иметь некоторые отличия в сократительной реакции из-за различий в мышечной массы или ущерб, причиненный во время вскрытия. Рис. 3В показаны два трахеи различной массы мышц вызов с высоким содержанием калия и карбахолина. Несмотря на то, холинергические, вызвало сокращение различаются,у похожи после нормализации в ответ с высокой решение калия (рис. 3).
Рисунок 4 показывает пример карбахолина (холинергических) вызвало сокращение использования разовых доз (А) и кумулятивный рост (B). Карбахолина решения добавляют непосредственно в ванну и клокотало газ помогает при быстром перемешивании. Стоит отметить, что добавление одной дозы (т.е. 1 мкм, рисунок 4А) имеет несколько больший отклик, чем эквивалентные концентрации во время совокупный кривой доза-реакция (1 мкМ, рисунок 4B). Рисунок 4C показана зависимость силы сокращения в зависимости от концентрации карбахолина с использованием данных Рисунок 4B. Воздействие карбахолина насыщать 10 -5 М концентрации. Несмотря на то, холинергические агонисты инициирует сокращение с помощью механизмов, выход кальция, существенный компонент сжатия также опосредовано деполяризации иАктивация напряжения зависит от кальциевых каналов 20.
Рисунок 5А показан пример Ф-вызванных сокращений. Трахеи стимулируются с помощью 0,5 миллисекунды продолжительность, 40 вольт импульсов до схватки достигают плато (см. вставку a1). Увеличение частоты стимуляции приводит к повышенной сократительной реакции (АЧХ кривая представлена на рис 5B). Электрическая стимуляция поле было показано, что вызывает сокращение преимущественно путем активации пресинаптических нервах. Об этом свидетельствует эффект ботулинический токсин, блокирующий высвобождение нейромедиатора, который блокирует большинство EFS, вызвало сокращение трахеи 21. Кроме того, тетродотоксин, агент, который блокирует Na +-каналы и подавляет нервную активность и устраняет реакцию трахею EFS.
Рисунок 1. Схема тОн основных сигнальных путей в изолированном подготовки трахеи. Показана холинергических аксонов, иннервирующих терминал трахеи гладкомышечных клеток. Основными путями передачи сигналов М3 и М2-мускариновых рецепторов ацетилхолина активации (mACHR), которые вызывают высвобождение кальция через IP3 рецепторы (М3) и снижение цАМФ (M2). М2 рецепторов (и определенный вклад рецепторов М3) также может вызвать холинергический, вызванные деполяризацией, который активирует L-типа напряжения зависит от кальциевых каналов и приток кальция. Общие сократительной агентов и их эффекторами являются: 1. высоким содержанием калия (деполяризации гладкомышечных клеток и холинергических аксонов), 2. электрическая стимуляция поля (EFS, деполяризует холинергических аксонов) и 3. экзогенного применения холинергических агентов, таких как ацетилхолин или карбахолина (активирует мускариновые рецепторы напрямую).
Рисунок 2. Схема установки для измерения трахеи сокращений. А. датчик силы, микрометр и ткани ванны устанавливаются на опорные стержни с помощью винтовых зажимов. Трахеи кольцо с резьбой на верхней и нижней стержней. На диаграмме, ткани ванной расположена ниже подготовки (например, при монтаже трахеи на датчик силы). Во время сокращения исследований, ткани ванна перемещается вертикально купаться препарата. B. Для электрической стимуляции поле нижняя планка изменен для включения двух платиновых пластин, которые крепятся сбоку на проводе холдинга трахеи. Платиновой пластины соединены электрические провода на стимулятор.
Рисунок 3. Примеры высоким содержанием калия (67 ммоль) сократительной реакции трахеи. (А) показывает двух экземплярах, воспроизводимые ответы высоким содержанием калия. (B) Примеры сократительной ответ на карбахолина двух различных трахеи. (C) Ответы на трахеи в B похожи, когда нормализуетсяг к высоким содержанием калия ответ.
Рисунок 4. Примеры карбахолина вызванного сокращениями. (A) карбахолина вызванного сокращениями использованием разовых доз следует вымывания. (B) Пример кумулятивная доза-реакция кривой трахеи А. (С), пик сокращений от B строятся в зависимости от карбахолина концентрации.
Рисунок 5. Примеры сокращений вызвана электрическая стимуляция области. (A) Электрическая стимуляция области трахеи сокращение использования импульса 0,5 мс, 40 вольт, а также различных частотах стимуляции, как указано. Вставка время расширенной сокращение на 30 Гц. (B) Пик сокращений от А plotteг в зависимости от частоты стимуляции.
Нормальная PSS
| Соль | Конц. (ММ) | Количество (г / 2 л) |
| NaCl | 119 | 13,91 |
| KCl | 4,7 | 0,7 |
| KH 2 PO 4 | 1,18 | 0,32 |
| MgSO 4 х 7H 2 O | 1,17 | 0,58 |
| NaHCO 3 | 18 | 3,02 |
| ЭДТА | 0,026 | 0,1 мл 0,5 М |
| Глюкоза | 11 | 3,96 |
| Сахароза | 12,5 | 8,56 |
| CaCl 2 | 2 | 400 мл 10 мМ |
Высокая K + PSS (NACл KCl и корректировок)
| Соль | Конц. (ММ) | Количество (г / 2 л) |
| NaCl | 56,7 | 6,628 |
| KCl | 67 | 9,991 |
Таблица 1. Рецепт PSS решения. Примечание: Решения принимаются свежие неделю, сверхчистых качества воды, и хранить в холодильнике не более 5 дней, чтобы избежать загрязнения роста.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Протокол, представленные здесь обеспечивает физиологическую подготовку для оценки дыхательных мышц. Мы обычно работают 3-4 препаратов ванны орган одновременно, однако, расфасованный системы доступны из числа поставщиков, что позволяет одновременно измерять до 8 препаратов (ADInstruments, инструменты Всемирной Precision, и Гарвард аппарата). Мы использовали целый ряд датчиков силы и ванны ткани органа с аналогичными результатами. Тем не менее, мы находим, что электрическая стимуляция поле содержит некоторые изменчивости на основе небольшими различиями между стимулирующих электродов размер, расстояние между электродами плиты, и положение о подготовке в электрическом поле. Таким образом, особую осторожность следует предпринять, чтобы сделать поле электродов максимально схожей.
Одним из наиболее важных параметров, в изометрической измерения силы является вопрос о нормализации сокращения, чтобы компенсировать изменения в мышечной массе, илиздоровье мышечной ткани различных препаратов. В частности, различия могут быть сведены к минимуму путем сравнения животных того же возраста и пола (самки мышей, как правило, генерировать снижение напряженности трахеи). Кроме того, мы обнаружили, что нормализация в трахею влажной или сухой вес не имеет достаточной точностью, возможно, из-за небольших размеров мыши трахеи. Скорее всего, использование нескольких, высоким содержанием калия, сокращение вполне выгодно. Высокая калия сокращения служат двум целям. Высокая сокращение калия кажется "разбудить" мышцу трахеи и гарантирует, что сокращения являются воспроизводимыми прежде чем приступить к экспериментальной задачи. Высокая сокращение калия также, кажется, точно нормализации для активного мышечной массы, которая присутствует в препарате. Таким образом, экспериментальные измерения напряжения часто выражаются в виде силы, нормированная на высоком сокращение калия. Кроме того, качество подготовки можно оценить по высоким содержанием калия вызванных контрактионов. Например, мы обнаружили, что 8 - 10 неделя мужской C57BL/6J мышей обладают высокой калия вызванных сокращением на 20 ± 3,8 мН (среднее ± стандартное отклонение, п = 17). Если подготовка контрактов трахеи значительно ниже этого диапазона (до 12 мН или два стандартных отклонения ниже среднего), то он, как правило, рассматривается как "поврежденные", а не использовать для экспериментов. Кроме того, нормализации напряжения в максимальной напряженности на насыщение холинергические агонисты могут быть использованы. Это полезно для наблюдения за изменением чувствительности к агонистов, но может пропустить изменения, которые влияют на максимальное сокращение.
Методы были представлены для включения сокращение либо с помощью холинергические агонисты или электрическая стимуляция. Холинергическая применение агонистов на ткань ванне непосредственно активирует гладких мышц. В противоположность этому, с умеренной частотой стимуляции EFS (до 25 Гц), большинство сокращений опосредуется через активацию нервных и выпуск neurotransmiель 22. Таким образом, следователь имеет возможность исследовать вещества, которые влияют на пресинаптические / нервных опосредованное сокращение с помощью EFS стимуляции. Наконец, исследования показывают, что другие типы клеток, такие как тучные клетки, 23 и 24 эпителиальных клеток также влияет на сократимость в изолированных подготовки трахеи. Таким образом, в лабораторных мышей подготовки трахеи обеспечивает надежный функциональный анализ в течение нескольких типов клеток, которые влияют на дыхательные пути гладкую сократимость мышц.
Таким образом, мышь в подготовке лабораторных трахеи была особенно полезна для анализа генетических изменений, которые влияют на дыхательные функции. Некоторые примеры включают анализ генного нокаута ионных каналов 17,20,25,26, 27,28,29,30 метаботропные рецепторы, и вниз по течению сигнальные каскады 31. Кроме того, антиген вызов мыши часто используется для лечения астмы исследования 32 и в пробиркетрахеи подготовка представляет собой полезный анализ изменений в сократимость, что наступает дальнейшее развитие астмы.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Нет конфликта интересов объявлены.
Acknowledgments
Эта работа финансируется за счет гранта из Центра по инновациям в профилактике и лечении заболеваний дыхательных путей, NINDS гранта (NS052574), а с Сандлер Программа астмы исследований.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Analogue-Digital Converter |  ADInstruments |
PowerLab 4/35 | |
| Carbachol (Carbamoylcholine Chloride) | Sigma-Aldrich | C4832 | 10-2 M in water (aliquots can be stored at -20 °C) |
| Charting Software | ADInstrtuments |
LabChart | |
| Heating Circulator | Haake | Mixer Mill MM400 | |
| Isometric Force Transducer | Kent Scientific | TRN001 | |
| Stimulator | Grass Technologies | S88 Dual Output Square Pulse Stimulator | |
| Tissue Bath | WPI | 47264 |
References
- Lloyd, C. M. Building better mouse models of asthma. Curr. Allergy Asthma Rep. 7, 231-236 (2007).
- Hausding, M., Sauer, K., Maxeiner, J. H., Finotto, S. Transgenic models in allergic responses. Curr. Drug Targets. 9, 503-510 (2008).
- Eglen, R. M., Hegde, S. S., Watson, N. Muscarinic receptor subtypes and smooth muscle function. Pharmacol Rev. 48, 531-565 (1996).
- Ehlert, F. J. Contractile role of M2 and M3 muscarinic receptors in gastrointestinal, airway and urinary bladder smooth muscle. Life Sci. 74, 355-366 (2003).
- Hall, I. P. Second messengers, ion channels and pharmacology of airway smooth muscle. Eur. Respir. J. 15, 1120-1127 (2000).
- Berridge, M. J. Inositol trisphosphate and calcium signalling. Nature. 361, 315-325 (1993).
- Ehlert, F. J. Pharmacological analysis of the contractile role of M2 and M3 muscarinic receptors in smooth muscle. Receptors Channels. 9, 261-277 (2003).
- Sankary, R. M., Jones, C. A., Madison, J. M., Brown, J. K. Muscarinic cholinergic inhibition of cyclic AMP accumulation in airway smooth muscle. Role of a pertussis toxin-sensitive protein. Am. Rev. Respir Dis. 138, 145-150 (1988).
- Widdop, S., Daykin, K., Hall, I. P. Expression of muscarinic M2 receptors in cultured human airway smooth muscle cells. Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 9, 541-546 (1993).
- Karaki, H. Calcium movements, distribution, and functions in smooth muscle. Pharmacol. Rev. 49, 157-230 (1997).
- Somlyo, A. V., Somlyo, A. P. Electromechanical and pharmacomechanical coupling in vascular smooth muscle. J. Pharmacol Exp. Ther. 159, 129-145 (1968).
- Fryer, A. D., Jacoby, D. B. Muscarinic receptors and control of airway smooth muscle. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 158, 154-160 (1998).
- Fernandez-Rodriguez, S., Broadley, K. J., Ford, W. R., Kidd, E. J. Increased muscarinic receptor activity of airway smooth muscle isolated from a mouse model of allergic asthma. Pulm. Pharmacol. Ther. 23, 300-307 (2010).
- Garssen, J., Loveren, H. V. an, Van Der Vliet, H., Nijkamp, F. P. An isometric method to study respiratory smooth muscle responses in mice. J. Pharmacol. Methods. 24, 209-217 (1990).
- Vass, G., Horvath, I. Adenosine and adenosine receptors in the pathomechanism and treatment of respiratory diseases. Curr. Med. Chem. 15, 917-922 (2008).
- Borchers, M. T. Methacholine-induced airway hyperresponsiveness is dependent on Galphaq signaling. Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 285, 114-120 (2003).
- Sausbier, M. Reduced rather than enhanced cholinergic airway constriction in mice with ablation of the large conductance Ca2+-activated K+ channel. Faseb. J. 21, 812-822 (2007).
- Scheerens, H. Long-term topical exposure to toluene diisocyanate in mice leads to antibody production and in vivo airway hyperresponsiveness three hours after intranasal challenge. Am. J. Respir. Crit. Care. Med. 159, 1074-1080 (1999).
- Kenakin, T. P. A pharmacology primer : theory, applications, and methods. , 3rd edn, Academic Press/Elsevier. (2009).
- Semenov, I., Wang, B., Herlihy, J. T., Brenner, R. BK Channel {beta}1 Subunits Regulate Airway Contraction Secondary to M2 Muscarinic Acetylcholine Receptor Mediated Depolarization. J. Physiol. , 1803-1817 (2011).
- Moffatt, J. D., Cocks, T. M., Page, C. P. Role of the epithelium and acetylcholine in mediating the contraction to 5-hydroxytryptamine in the mouse isolated trachea. Br. J. Pharmacol. 141, 1159-1166 (2004).
- Bachar, O., Adner, M., Uddman, R., Cardell, L. O. Nerve growth factor enhances cholinergic innervation and contractile response to electric field stimulation in a murine in vitro model of chronic asthma. Clin. Exp. Allergy. 34, 1137-1145 (2004).
- Weigand, L. A., Myers, A. C., Meeker, S., Undem, B. J. Mast cell-cholinergic nerve interaction in mouse airways. J. Physiol. 587, 3355-3362 (2009).
- Kao, J., Fortner, C. N., Liu, L. H., Shull, G. E., Paul, R. J. Ablation of the SERCA3 gene alters epithelium-dependent relaxation in mouse tracheal smooth muscle. Am. J. Physiol. 277, 264-270 (1999).
- Krane, C. M. Aquaporin 5-deficient mouse lungs are hyperresponsive to cholinergic stimulation. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98, 14114-14119 (2001).
- Semenov, I., Wang, B., Herlihy, J. T., Brenner, R. BK channel beta1-subunit regulation of calcium handling and constriction in tracheal smooth muscle. Am. J. Physiol. Lung. Cell Mol. Physiol. 291, L802-L810 (2006).
- Fortner, C. N., Breyer, R. M. EP2 receptors mediate airway relaxation to substance P ATP, and PGE2. Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 281, 469-474 (2001).
- Hay, D. W. Differential modulation of endothelin ligand-induced contraction in isolated tracheae from endothelin B (ET(B)) receptor knockout mice. Br. J. Pharmacol. 132, 1905-1915 (2001).
- Stengel, P. W., Yamada, M., Wess, J., Cohen, M. L. M(3)-receptor knockout mice: muscarinic receptor function in atria, stomach fundus, urinary bladder, and trachea. Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp Physiol. 282, R1443-R1449 (2002).
- Trevisani, M. Evidence for in vitro expression of B1 receptor in the mouse trachea and urinary bladder. Br. J. Pharmacol. 126, 1293-1300 (1038).
- Mehats, C. PDE4D plays a critical role in the control of airway smooth muscle contraction. FASEB J. 17, 1831-1841 (2003).
- Kumar, R. K., Herbert, C., Foster, P. S. The "classical" ovalbumin challenge model of asthma in mice. Curr. Drug Targets. 9, 485-494 (2008).
