为了了解乙醇诱导发育损伤的分子机制,我们已经开发的乙醇暴露斑马鱼模型,并正在探索乙醇暴露后发生的物理,细胞和基因改变<sup> 1</sup>。然后,我们来寻求潜在的干预和快速测试他们在这个动物模型。
胎儿酒精综合征(FAS)是一个严重的表现胚胎暴露于乙醇。它提出了缺陷的脸和器官,包括精神发育迟滞,由于紊乱和脑损伤发展的特点。胎儿酒精谱系障碍(FASD)是用于支付出生缺陷的发生是由于产妇饮酒连续任期,并在发生在美国出生的儿童约4%。与育龄妇女的50%食用酒精,一半的怀孕是无计划的,无意的暴露是一个持续的问题2。 ,以最好地理解乙醇产生的破坏,加上产生的模型来测试潜在的干预,我们开发了一个使用斑马鱼胚胎发育乙醇曝光模式。斑马鱼是理想的这种致畸研究3-8。每对奠定了数百个鸡蛋,然后可以不损害成年人的情况下收集鱼。斑马鱼的胚胎是透明的,可以很容易地与任何数量的污渍成像。分析这些胚胎后,暴露在不同剂量和时间期限和应用表明乙醇,乙醇生产总值的发育缺陷与人类的出生缺陷是一致的。这里描述的是用于研究和操纵斑马鱼FAS模型的基本技巧。
这里介绍的方法,结果表明只是如何斑马鱼可以用来审问发育缺陷的一角。由于胚胎的辅助,每个离合器,高重复性的结果产卵数量高,这些脊椎动物是致畸研究的理想。鱼也可以操纵含有荧光分子,利用视觉作为一个特定的基因或通路利息19记者。在乙醇的研究,使用剂量出现相比,哺乳动物的血液酒精含量相当高。然而,这些级别反映了什么是水,不是所有的乙醇被传递到胚胎。
两者合计,描述和上面详细介绍的方法表明,斑马鱼的胚胎是乙醇暴露相关的模拟人类出生缺陷非常有用。此外,发现在斑马鱼的基因表达的变化已被证实由他人在哺乳动物模型系统20,表明乙醇的发展影响整个脊椎动物保留。上面显示的技术可用于许多其他环境或制药侮辱,快速,方便地检测潜在的致畸和判断,有助于特定物质的致畸的潜在机制。
The authors have nothing to disclose.
我们希望感谢质粒的礼物蒙特卡罗韦斯特小林诚和亚切克Topczewski的的原位杂交和基因微量注射。我们是感谢Steph艾哈德在视频中出现的。我们也愿意承认,在视频中显示的共焦显微镜威廉古森斯援助。泰勒Schwend提供视频图像,并协助罗德尼·戴尔准备视频。我们也承认他们与斑马鱼的饲养工作,的CMRC动物保健人员。这项工作是由美国国立卫生研究院授予R21的AA13596政制事务局局长。
Name of the reagent | Company | Catalogue number |
Tissue RNA kit: 5-Prime PerfectPure | Fisher Scientific | FP2302410 |
Platinum SYBR green qPCR SuperMix-UDG | Invitrogen | 11733038 |
mMessage mMachine high yield capped RNA transcription kit | Applied Biosystems | Depends on the RNA polymerase in your plasmid |