Het meten van linker ventrikel druk (LV) in embryonale en neonatale muizen wordt beschreven. De druk wordt gemeten door het inbrengen van een naald is aangesloten op een met vloeistof gevulde transducer in de LV onder echografische begeleiding. Er moet worden normaal hartfunctie handhaven tijdens de experimentele protocol.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Het meten van linker ventrikel druk in de late embryonale en neonatale muizen
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
De bloeddruk stijgt aanzienlijk tijdens de embryonale en postnatale ontwikkeling van gewervelde dieren. In de muis, de doorbloeding is in de eerste detecteerbaar rond embryonale dag (E) 8.5 1. Systolische linker ventrikel (LV) druk is 2 mmHg bij E9.5 en 11 mmHg bij E14.5 2. Bij deze mid-embryonale stadia, de LV is duidelijk zichtbaar door de borstwand voor invasieve drukmetingen, omdat de ribben en de huid nog niet volledig ontwikkeld. Tussen E14.5 en geboorte (ongeveer E21) imaging methoden moeten worden gebruikt om de LV te bekijken. Na de geboorte, gemiddelde arteriële druk stijgt 30 tot 70 mmHg van de dagen na de geboorte (P) 2 - 35 3. Beyond P20, kan arteriële druk gemeten worden met solid-state katheters (dat wil zeggen Millar of Scisense). Voor P20, deze katheters zijn te groot voor de ontwikkeling van de muis slagaders en de arteriële druk moet worden gemeten met aangepaste getrokken plastic katheters aan met vloeistof gevulde druktransducers 3 of glas micropipetten attdeed pijn om servo null druktransducers 4.
Onze recente werk heeft aangetoond dat de grootste stijging van de bloeddruk optreedt tijdens het einde van de embryonale om vroege postnatale periode bij muizen 5-7. Deze grote stijging van de bloeddruk kunnen beïnvloeden gladde spiercellen (SMC) fenotype bij de ontwikkeling van bloedvaten en leiden tot belangrijke mechanotransductie gebeurtenissen. Ziekten bij de mens, waar de mechanische eigenschappen van de ontwikkeling van bloedvaten in het gedrang komen door gebreken in de extracellulaire matrix eiwitten (dat wil zeggen Marfan syndroom 8 en supravalvulaire aortastenose 9) de snelle veranderingen in de bloeddruk tijdens deze periode kan bijdragen aan de ziekte van fenotype en de ernst door middel van veranderingen in mechanotransductie signalen. Daarom is het belangrijk te kunnen veranderingen in de bloeddruk te meten tijdens late embryonale en neonatale perioden muismodellen van menselijke ziekten.
Wij beschrijven een werkwijze voor het meten LV druk eindembryonale (E18) en de vroege postnatale (P1 - 20) muizen. Een naald bevestigd aan een met vloeistof gevulde drukopnemer is aangesloten op de LV onder echografische begeleiding. Er wordt op normale hartfunctie handhaven tijdens de experimentele protocol, vooral voor de embryonale muizen. Representatieve gegevens worden gepresenteerd en de beperkingen van het protocol worden besproken.
Protocol
1. Echografie en druk systeem
- Start de ultrasone volgens de instructies van de fabrikant (Vevo 770 Visualsonics). Vul de juiste sonde (leeftijd E18 - P7 = model 708, leeftijd> P7 = model 707B) met gedestilleerd water en maak verbinding met de echo systeem. Plaats de sonde in de verstelbare standaard op de geschatte oriëntatie nodig is om een LS-lange-as weergave voor een muis gemonteerd op de imaging platform, zodat de LV apex is gericht op de injectie arm te verkrijgen.
- De druk bestaat uit een met vloeistof gevulde druksensor brugversterker, meetsysteem en gegevensopslag software (LabChart). De aansluitingen bestaan uit drie-weg kranen, buiz....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Het protocol hier gepresenteerde een werkwijze voor het meten van de druk LV eind embryonale en vroege neonatale muizen. De belangrijkste beperking van dit protocol is de temporele resolutie van het druksysteem. De druk signaal wordt gedempt als het reizen van de LV door de naald van de transducer, en alleen maar betekenen drukwaarden kunnen worden opgenomen. De demping kan worden geminimaliseerd door gebruik te maken van de grootste naald mogelijk, maar de naald moet binnen de LV lumen geschikt is voor verschillende ou.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
Geen belangenconflicten verklaard.
Dankbetuigingen
Dit werk werd gefinancierd, voor een deel, door de NIH subsidies HL087653 en HL105314. Sommige van de methoden werden ontwikkeld in het laboratorium van Dr Robert Mecham aan de Washington University School of Medicine.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Naam van het reagens / apparatuur | Vennootschap | Catalogusnummer | Reacties |
| Hoge resolutie echografie systeem | Visualsonics | Vevo 770 | Of andere passende ultrasound systeem |
| Hoge frequentie ultrageluid sondes | Visualsonics | 708 en 707B | |
| Imaging platform en injectie arm | Visualsonics | Imaging Station 2 | Met ECG en temperatuur feedback controle van het platform |
| Drukopnemer | AD Instrumenten | MLT 844 | |
| Brugversterker | AD Instrumenten | ML221 | |
| Data acquisitie systeem | AD Instrumenten | ML866 | |
| Gegevens opname software | AD Instrumenten | LabChart | |
| Ring staan en klem | Diverse leveranciers | Om de druk transducer te houden tijdens de metingen | |
| 3-weg kranen met Luer-aansluiting, man slot | Cole Parmer | 30600-02 | |
| 1/16 "ID Tygon Tubing | Cole Parmer | 06408 | |
| Mannelijke en vrouwelijke Luers w / 1/16 "slang barb | Cole Parmer | 45510-50 45510-00 | |
| 24 "buis met mannelijke en vrouwelijke luer aan elk uiteinde | Cole Parmer | 30600-60 | |
| 3 en 10 ml spuiten | BD Biosciences | ||
| 30 en 25G naalden | BD Biosciences | 1,5 inch lang | |
| Big Ben manometer | Riester | 1456-100 | |
| Zoutoplossing | Diverse leveranciers | ||
| Heparine | Diverse leveranciers | ||
| Ultrasound gel | Parker | Aquasonic 100 | |
| Hair remover lotion | Nair |
Referenties
- Ji, R. P. Onset of cardiac function during early mouse embryogenesis coincides with entry of primitive erythroblasts into the embryo proper. Circ. Res. 92 (2), 133-135 (2003).
- Ishiwata, T., Nakazawa, M., Pu, W. T., Tevosian, S. G., Izumo, S.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
