Mesure de la pression ventriculaire gauche (VG) chez la souris embryonnaires et néonatale est décrite. La pression est mesurée par l'insertion d'une aiguille reliée à un transducteur à remplissage de fluide dans le BT sous échographie. Des précautions doivent être prises pour maintenir une fonction cardiaque normale au cours du protocole expérimental.
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Article de méthode
Mesure de la pression ventriculaire gauche à la fin de souris embryonnaires et néonatale
Dans cet article
Résumé
Résumé
La pression artérielle augmente de façon significative au cours du développement embryonnaire et postnatal chez les animaux vertébrés. Chez la souris, le débit sanguin est le premier détectable autour du jour embryonnaire (E) 8.5 1. Systolique ventriculaire gauche (VG) la pression est de 2 mmHg à 11 mmHg et E9.5 à E14.5 2. A ces stades la mi-embryonnaires, le LV est clairement visible à travers la paroi thoracique pour les mesures de pression invasive parce que les nervures et la peau ne sont pas pleinement développés. Entre E14.5 et la naissance (environ E21) des méthodes d'imagerie doit être utilisée pour afficher le LV. Après la naissance, des augmentations moyennes de pression artérielle de 30 à 70 mmHg au jour postnatal (P) 2 - 35 3. Au-delà de P20, la pression artérielle peut être mesurée avec l'état solide (c.-à-cathéters Millar ou SCISENSE). Avant P20, ces cathéters sont trop gros pour développer les artères de souris et de la pression artérielle doit être mesurée à l'aide personnalisée tiré cathéters en plastique attachés à des transducteurs de pression remplis de liquide ou de verre 3 micropipettes attsouffrait d'asservissement des transducteurs de pression nulles 4.
Nos travaux récents ont montré que la plus forte augmentation de la pression artérielle se produit pendant les embryonnaire fin à la période postnatale précoce chez la souris 5-7. Cette forte augmentation de la pression artérielle peuvent influer sur des cellules musculaires lisses (SMC) phénotype dans les artères en développement et déclencher des événements importants mécanotransduction. Dans la maladie humaine, où les propriétés mécaniques des artères en voie de développement sont compromis par des défauts dans les protéines de la matrice extracellulaire (syndrome c.-à-Marfan 8 et une sténose aortique supravalvulaire 9) les changements rapides de la pression artérielle au cours de cette période peut contribuer à phénotype de la maladie et la gravité par des altérations dans la mécanotransduction signaux. Par conséquent, il est important de pouvoir mesurer les changements de pression artérielle au cours de la fin embryonnaire et la période néonatale dans des modèles murins de maladies humaines.
Nous décrivons une méthode pour mesurer la pression à la fin de LVembryonnaire (E18) et au début du post-natal (P1 - 20) chez la souris. Une aiguille attachée à un transducteur de pression remplie de fluide est insérée dans le LV sous échographie. On prend soin de maintenir une fonction cardiaque normale au cours du protocole expérimental, en particulier pour les souris embryonnaires. Les données représentatives sont présentées et les limites du protocole sont discutés.
Protocole
1. L'échographie et la pression du système
- Démarrez le système à ultrasons selon les instructions du fabricant (Vevo 770, Visualsonics). Remplir la sonde appropriée (âge E18 - P7 = modèle 708, l'âge> = P7 modèle 707B) avec de l'eau distillée et se connecter au système à ultrasons. Placez la sonde dans le support réglable à l'orientation approximative nécessaire pour obtenir une LV grand axe d'une souris monté sur la plate-forme d'imagerie de sorte que le sommet LV est pointé vers le bras d'injection.
- Le système de la pression se compose d'un transducteur de pression remplie de fluide, l'amplificateur de pont, l....
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Discussion
Le protocole présenté ici fournit une méthode pour mesurer la pression dans le LV embryonnaire fin et au début des souriceaux nouveau-nés. La principale limitation de ce protocole est la résolution temporelle de la pression du système. Le signal de pression est amorti lorsqu'il se déplace de la LV à travers l'aiguille au transducteur, et que les valeurs moyennes de pression peut être enregistrée. L'amortissement peut être minimisé en utilisant la plus grande aiguille possible, mais l'aiguille doit entrer.......
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Déclarations de divulgation
Pas de conflits d'intérêt déclarés.
Remerciements
Ce travail a été financé, en partie, par des subventions du NIH et HL087653 HL105314. Certaines de ces méthodes ont été développées dans le laboratoire du Dr Robert Mecham à l'École de médecine de l'Université de Washington.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Nom du réactif / équipements | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
| Haute résolution système à ultrasons | Visualsonics | Vevo 770 | Ou un autre système à ultrasons appropriée |
| Hautes sondes à ultrasons de fréquence | Visualsonics | 708 et 707B | |
| Plate-forme d'imagerie et de bras d'injection | Visualsonics | Imaging Station 2 | Avec l'ECG et le contrôle suivi de la température de la plate-forme |
| Capteur de pression | Instruments AD | MLT 844 | |
| Amplificateur en pont | Instruments AD | ML221 | |
| Système d'acquisition de données | Instruments AD | ML866 | |
| Logiciel d'enregistrement de données | Instruments AD | LabChart | |
| Anneau se lever et serrer | Divers fournisseurs | Pour tenir transducteur de pression lors des mesures | |
| 3-way robinets avec les connexions Luer lock mâle | Cole Parmer | 30600-02 | |
| 1/16 "tubes Tygon ID | Cole Parmer | 06408 | |
| Luers mâles et femelles w cannelés / 1/16 le tuyau " | Cole Parmer | 45510-50 45510-00 | |
| 24 "tube avec Luer mâle et femelle à chaque extrémité | Cole Parmer | 30600-60 | |
| 3 et 10 seringues mL | BD Biosciences | ||
| 30 et 25G aiguilles | BD Biosciences | 1,5 pouces de longueur | |
| Big Ben manomètre | Riester | 1456-100 | |
| Saline | Divers fournisseurs | ||
| Héparine | Divers fournisseurs | ||
| Gel pour ultrasons | Parker | Aquasonic 100 | |
| Lotion démaquillante cheveux | Nair |
Références
- Ji, R. P. Onset of cardiac function during early mouse embryogenesis coincides with entry of primitive erythroblasts into the embryo proper. Circ. Res. 92 (2), 133-135 (2003).
- Ishiwata, T., Nakazawa, M., Pu, W. T., Tevosian, S. G., Izumo, S.
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Réimpressions et autorisations
