Summary
ECIS / टैक्सी प्रणाली एक स्वचालित वास्तविक समय परख है कि सेलुलर chemotaxis उपाय है. इस परख में, कोशिकाओं में agarose की एक परत करने के लिए एक लक्ष्य इलेक्ट्रोड पर पहुंचने के नीचे चलते हैं. सेलुलर आंदोलन एसी चालू 0 से प्रतिरोध की शुरुआत द्वारा मापा जाता है.
Protocol
1. / ECIS टैक्सी इलेक्ट्रोड तैयार
- इलेक्ट्रोड / ECIS टैक्सियों सरणी (स्लाइड प्रति 8 कक्षों से मिलकर) की सोने की सतह पहले कमरे के तापमान पर 15 मिनट के लिए बाँझ शर्तों के तहत बाँझ विआयनीकृत पानी (2 DH का.) में 10 मिमी सिस्टीन साथ पूर्व उपचार द्वारा स्थिर है.
- महाप्राण (व्यंजन), सिस्टीन समाधान प्रत्येक इलेक्ट्रोड कक्ष से बाँझ DH 2 हे के साथ 3 बार कुल्ला, और पूरा मध्यम के 250 μl (1640 RPMI, 10% FBS, 25 मिमी HEPES के बफर) के साथ बदलें.
- इलेक्ट्रोड सरणी कनेक्ट करने के लिए साधन सरणी धारक पर पिन से संपर्क करने के लिए इलेक्ट्रोड की जांच करने के लिए.
- मंडलों है कि ठीक से जुड़े हुए हैं कंप्यूटर स्क्रीन पर हरे रंग में प्रकाश डाला जाएगा. यदि कक्षों लाल रंग में डाला जाता है, वे और जुड़ा हुआ नहीं इलेक्ट्रोड किया जाना चाहिए फिर से सरणी धारक में तैनात सभी कक्षों के लिए संपर्क स्थापित कर रहे हैं.
- एक बार सभी कक्षों जुड़े हैं, सॉफ्टवेयर नियंत्रक में "जाँच" बटन पर क्लिक करने के लिए रोकतेऔर प्रत्येक कक्ष के लिए प्रारंभिक प्रतिरोध समाई मूल्यों मेरा. प्रतिरोध मूल्यों 1600 और 2000 के बीच ohms होना चाहिए, और समाई मूल्यों एक 8 कक्ष सरणी के लिए 5 और 6 के बीच nanofarads होना चाहिए. यदि एक कक्ष इन मापदंडों के भीतर स्वीकार्य नहीं है, व्यक्तिगत कक्ष के लिए डेटा इकट्ठा नहीं किया जा किया जाना चाहिए.
- सरणी धारक से इलेक्ट्रोड व्यक्तिगत कक्षों agarose तैयार करने डिस्कनेक्ट. कक्षों से मध्यम महाप्राण (व्यंजन) और प्रत्येक कक्ष बाँझ DH 2 ओ के साथ 3 बार धोने
2. Agarose मंडलों की तैयारी
- एक बाँझ 15 मिलीलीटर polypropylene चोटीदार ट्यूब में, उपाय 0.03 Seakem GTG agarose जी और 1 मिलीलीटर बाँझ पीबीएस. ट्यूब टोपी ढीला बदलें, और एक 2 मिनट तरल चक्र के लिए आटोक्लेव में पिघल agarose (एक माइक्रोवेव में पिघलने के इस परख लिए प्रभावी नहीं है). यह कम समय चोटीदार ट्यूब पिघल नहीं होगा. कम दुराराध्य कोशिकाओं है कि संस्कृति के लिए सीरम की आवश्यकता नहीं है (उदाहरण के Dictyostelium discoideum) 0.5% के लिएagarose उचित माध्यम में बनाया जा सकता है और एक माइक्रोवेव में पिघला. आटोक्लेव सीरम की आवश्यकता होती है कि कोशिकाओं के लिए आवश्यक है, के रूप में अगर यह माइक्रोवेव में पिघला विकृत हो जाएगा.
- पूरा RPMI एक नहाने के पानी में गरम मध्यम 5 मिलीलीटर जोड़ें (55 ° -60 डिग्री सेल्सियस) सीधे गर्म agarose 0.5% agarose और ऊपर pipet के अंतिम एकाग्रता और नीचे धीरे मिश्रण करने के लिए.
- Pipet प्रत्येक कक्ष में पिघलाया agarose माध्यम के 300 μl, ECIS / टैक्सियों सरणी कवर की जगह है और कमरे के तापमान पर जेल करने के लिए अनुमति देते हैं.
- 15 मिलीलीटर ट्यूब की टोपी में agarose शेष agarose बीच बढ़िया तालमेल का आकलन pipet. इस अतिरिक्त agarose भी भाग 4 में इस्तेमाल किया जाएगा: agarose में कुओं को काटना.
3. निर्माण और sharpening के प्रवेशनी खैर काटने के उपकरण
- दो 14 गेज कुंद अंत cannulae पैनापन, एक 5/64 "बिट. घुमाएँ एक धीमी गति ड्रिल के साथ प्रत्येक प्रवेशनी खोलने में ड्रिल बिट के टिप का उपयोग कर, निश्चित ड्रिल बिट प्रत्येक प्रवेशनी सेशन की संपूर्ण आंतरिक किनारे कटौतीening एक तेज अत्याधुनिक (4A चित्रा) के रूप में.
- 1 "x 2" एक ड्रिल प्रेस में थोड़ा x ¼ "एक 5/64 के साथ plexiglass (चित्रा 4B डी)" के माध्यम से दो छेद ड्रिल. प्रत्येक तेज 14 गेज प्रवेशनी डालें तो यह एक plexiglass छेद के माध्यम से एक समान दूरी protrudes.
4. Agarose में वेल्स काटना
- हल्के सुझावों ज्वलंत द्वारा 14 गेज cannulae जीवाणुरहित. ECIS कक्ष में कुओं को काटने से पहले, cannulae कमरे के तापमान को शांत करने के लिए अनुमति देते हैं, या 15 मिलीलीटर ट्यूब की टोपी में agarose छू द्वारा cannulae शांत. यदि प्रवेशनी का तापमान बहुत अधिक है, के रूप में agarose कक्ष कुओं काट रहे हैं पिघल, कुरूप और दोषपूर्ण कुओं प्रतिपादन है.
- दो स्वर्ण प्रत्येक कक्ष में लक्ष्य इलेक्ट्रोड (चित्र 2c और 5) के आसपास के डॉट्स ऊपर प्रवेशनी जोड़ी संरेखित करें. प्रवेशनी खड़ी डालें, बिना किसी क्षैतिज आंदोलन, प्रवेशनी और के बीच कोमल संपर्क पर रोकइलेक्ट्रोड सतह. ध्यान से प्रवेशनी को हटाने के लिए, फिर से कोई क्षैतिज आंदोलन के बिना. ढ़ाल का विरोध करने के लिए अतिरिक्त कुओं की नियुक्ति भी प्रवेशनी जिग के एक पुनर्विन्यासन साथ में संभव है.
- धीरे agarose प्रवेशनी द्वारा छोड़ दिया प्लग महाप्राण (व्यंजन), एक निर्वात जाल के साथ एक बाँझ 9 "पाश्चर पिपेट, कम निर्वात दबाव से जुड़ा का उपयोग कर agarose अपशिष्ट को पकड़ने.
- 37 में प्रत्येक कक्ष की सतह डिग्री सेल्सियस पूरा RPMI मीडिया की 300 μl जोड़ने के लिए, 2 से agarose तर मिनट के लिए, और फिर धीरे से agarose परेशान बिना सतह और कुओं से मीडिया महाप्राण (व्यंजन).
5. वेल्स लोड हो रहा है
- प्रत्येक अच्छी तरह से 7 μl की मात्रा धारण करने में सक्षम है. प्रत्येक कक्ष में एक अच्छी तरह से करने के लिए, 7 कोशिकाओं निलंबन की μl जोड़ें. Jurkat टी कोशिकाओं के लिए, 2 x10 7 कोशिकाओं / एमएल का उपयोग करें. इन कोशिकाओं को 200 एनजी / एमएल एसडीएफ 1α के अधूरा RPMI में पतला है, जो सीरम अभाव के 7 μl का जवाब देंगे. पूरा मीडिया अकेले एक नकारात्मक cont के रूप में प्रयोग करेंrol.
- बाद कुओं लोड कर रहे हैं, एक औंधा माइक्रोस्कोप के साथ सरणी के प्रत्येक कक्ष को देखने के लिए सुनिश्चित करें कि सभी कुओं में कटौती करने के लिए और ठीक से भर गया. कोशिकाओं में अच्छी तरह से सीमा के अंदर होना चाहिए. यदि वे दोनों कुओं में देखा जाता है, या सेल अच्छी तरह से सीमा के परे फैल रहे हैं, तो एक अंतराल के agarose के तहत गठन किया है. अनुचित तरीके से ऊपर स्थापित कुओं नोट के रूप में डेटा को मज़बूती से उन कक्षों से नहीं विश्लेषित किया जा सकता है.
6. डेटा संग्रह
- सरणी धारक में इलेक्ट्रोड प्लेस और वसंत लोड धारक के पोगो पिन करने के लिए इलेक्ट्रोड सरणी पर सोना पैड फिर से कनेक्ट और "स्थापना" पर क्लिक करें. कुओं कि ठीक से जुड़े रहे हैं हरे रंग में प्रकाश डाला जाएगा. यदि कुओं लाल हैं, वे जुड़ा हुआ है और नहीं इस इलेक्ट्रोड सरणी धारक में repositioned किया जा चाहिए.
- सॉफ्टवेयर पैनल में ड्रॉप डाउन मेनू से "8WE1" का चयन करें (8 1 अच्छी तरह से इलेक्ट्रोड) सरणी विन्यास का संकेत है.
- सॉफ्टवेयर contr में "जाँच" का चयन करेंराजभाषा पैनल के लिए एक अच्छी तरह के लिए प्रारंभिक प्रतिरोध और समाई मूल्यों का निर्धारण. प्रतिरोध मूल्यों 1600 और 2000 के बीच ohms होना, है जबकि समाई मूल्यों के बीच 5 और 6 nanofarads होना चाहिए.
- कई आवृत्तियों पर प्रतिरोध को मापने के लिए एकाधिक आवृत्तियों का चयन करें. वहाँ आवृत्तियों अनुरूपण, या सिफारिश की आवृत्तियों का एक सेट का उपयोग करने का एक विकल्प है. मानक एकाधिक आवृत्ति अधिग्रहण सेटिंग्स 8 कुओं / मिनट की दर पर 11 पूर्व निर्धारित आवृत्तियों (52.5, 125, 250, 500, 1,000, 2,000, 4,000, 8,000, 16,000, 32,000 और 64,000 हर्ट्ज) में डेटा पर कब्जा. माप के बीच समय अंतराल भी अनुकूलित किया जा सकता है. एकाधिक आवृत्ति डेटा एकत्रित समाई, प्रतिबाधा प्रतिरोध, और विश्लेषण के लिए अनुमति देता है. +४,००० हर्ट्ज पर प्रतिरोध मूल्यों इकट्ठा स्तनधारी सेल chemotaxis अध्ययन के लिए आमतौर पर पर्याप्त है, लेकिन अतिरिक्त आवृत्तियों अन्य 12,13 संदर्भों में जानकारी प्रदान कर सकता है.
- कुल प्रयोग की अवधि के दाहिने हाथ पर सेट कर सकते हैंपैनल, या प्रयोग मैन्युअल रूप से रोका जा सकता है "खत्म" पर क्लिक एक बार कोशिकाओं प्रतिरोध है कि इलेक्ट्रोड पर आने का संकेत कर रहे हैं उत्पादन किया है,. यह समय लेता है के लिए कोशिकाओं इलेक्ट्रोड में आने के लिए सेल का इस्तेमाल किया पर निर्भर करता है.
- पर क्लिक करें "आरंभ" डेटा संग्रह आरंभ करने के लिए.
7. आँकड़ा प्रबंधन
- हालांकि डेटा Excel के लिए निर्यात किया जा सकता है, ECIS 1600R सॉफ्टवेयर, जो ECISθ प्रणाली के साथ ECIS / टैक्सी डेटा का विश्लेषण करने के लिए सबसे कारगर पद्धति है.
- सॉफ्टवेयर डेटा विश्लेषण उपकरण पट्टी रेडियो बटन Z, अनुसंधान, और सी. ये तय है कि प्रतिबाधा, प्रतिरोध, या समाई, क्रमशः, x अक्ष (बीता हुआ समय) के खिलाफ अनुलंब अक्ष पर प्लॉट किए जाते हैं.
- ECIS / टैक्सी डेटा सबसे अधिक कुशलता से समय पर ४००० हर्ट्ज पर प्रतिरोध के रूप में प्रदर्शित किया जाता है. प्रतिरोध में तेजी से उतार - चढ़ाव, या microtransients (चित्रा 1), इलेक्ट्रोड पर सेलुलर आंदोलन के सबूत हैं. संकलन, ओआर binning डेटा बिंदुओं ताकि सभी अंक ग्राफ नहीं कर रहे हैं, ECIS / टैक्सी के लिए अनुशंसित नहीं है, के बाद से यह डेटा औसत microtransients के बाहर होगा.
- एक बार ग्राफ ECIS1600R सॉफ्टवेयर के साथ बनाया गया है, यह फ़ाइल मेनू से "निर्यात ग्राफ" का चयन, और एक tif. या. Jpg फाइल के रूप में सहेजा से निर्यात किया जा सकता है.
8. प्रतिनिधि परिणाम
सेलुलर chemotaxis ४००० हर्ट्ज पर प्रतिरोध में वृद्धि ने संकेत दिया है. लक्ष्य इलेक्ट्रोड पर कोशिकाओं के आगमन भी प्रतिरोध, microtransients या micromotion कहा ऑप एट में वर्णित के रूप में तेजी से उतार - चढ़ाव की उपस्थिति से संकेत दिया है. अल., 2009 (चित्रा 1) 14. एक नकारात्मक परिणाम संगत ने संकेत दिया है, या प्रतिरोध में एक मामूली कमी, हर्ट्ज पर ४,०००, जैसा कि चित्र 1 में लाल रंग में देखा. microtransients का अभाव भी सेल इलेक्ट्रोड के लिए आंदोलन की अनुपस्थिति का एक संकेत है. प्रतिरोध में वृद्धि सीधे समर्थक हैportional संख्या कोशिकाओं है कि 10 इलेक्ट्रोड पार करने के लिए. मोनोक्लोनल एंटीबॉडी के अलावा chemoattractant के लिए विशिष्ट विषाक्त पदार्थों या जी प्रोटीन युग्मित रिसेप्टर्स के साथ हस्तक्षेप करने के लिए जाना जाता है 11 chemotaxis ब्लॉक कर सकते हैं.
आकृति 1. एसडीएफ 1α की एक ढाल SDF1α मानव Jurkat टी कोशिकाओं (2.0x10 6 सेल / एमएल) के जवाब में मानव Jurkat टी कोशिकाओं की chemotaxis अवगत कराया गया एक नकारात्मक नियंत्रण के रूप में या RPMI 1640 (एकाग्रता 100 एनजी / एमएल शुरू). 4000 हर्ट्ज पर सामान्यीकृत प्रतिरोध का रेखांकन किया गया था. मानव Jurkat टी कोशिकाओं एसडीएफ 1α जवाब में ले जाया गया है, के रूप में प्रतिरोध और microtransients में वृद्धि द्वारा evidenced, जबकि कोई आंदोलन 1640 RPMI जोखिम के साथ देखा गया था.
चित्रा 2. ECIS / टैक्सी के शीर्ष दृश्य withou इलेक्ट्रोडटी agarose प्रत्येक इलेक्ट्रोड / ECIS टैक्सी 8 अलग - अलग कक्षों में से शामिल है. प्रत्येक कक्ष में एक बड़ी इलेक्ट्रोड (क) के शेयरों, और एक व्यक्तिगत लक्ष्य इलेक्ट्रोड (ख) शामिल हैं. प्रत्येक कक्ष भी 2 सोना (ग) हलकों है, जो एक गाइड के रूप में उपयोग किया जाता है जब cannulae साथ agarose में कुओं को काटने है. सोने वर्गों (घ) संपर्क पैड कि पोगो पिंस के लिए कनेक्ट करने में इलेक्ट्रोड के लिए एसी चालू लागू कर रहे हैं. व्यक्तिगत लक्ष्य इलेक्ट्रोड बड़ा काउंटर इलेक्ट्रोड (ई) के साथ प्रत्येक सर्किट में.
चित्रा 3. दो वेल्स प्रत्येक agarose भर चेंबर में कटौती कर रहे हैं जब chemoattractant एक करने के लिए जोड़ा जाता है अच्छी तरह से के agarose में chemoattractant के लिए अच्छी तरह से निकटतम chemoattract के सर्वोच्च एकाग्रता के साथ एक ढाल बनाने diffuses. कोशिकाओं की उच्च सांद्रता chemoattractant के agarose नीचे की ओर यात्रा और अधिक लक्ष्य इलेक्ट्रोड पारित कर सकते हैं. के रूप मेंकोशिकाओं को लक्ष्य इलेक्ट्रोड पार, प्रतिरोध की वृद्धि ECIS 1600R सॉफ्टवेयर द्वारा दर्ज की गई है.
चित्रा 4. दो plexiglass में 14 गेज cannulae की प्रविष्टि. ए) 5/64 "ड्रिल बिट प्रवेशनी टिप पैनापन करने के लिए प्रयोग किया जाता है. बी) plexiglass में दो छेद drilled किया जाना चाहिए लिए लेआउट शॉट के अनुसार 14 गेज cannulae समायोजित सी) एक ड्रिल प्रेस के प्रयोग के छेद को सुनिश्चित करने के लिए. सीधा कर रहे हैं pleixglass सतह डी) दो तेज cannulae ¼ ", plexiglass, 2 अलग मिमी भीतरी किनारों से मापा के माध्यम से डाला जाता है. इन तेज cannulae ध्यान agarose कुओं कटौती में डाला जाता है.
चित्रा 5. Cannulae ECIS / टैक्सी कक्ष में सोने की डॉट्स के साथ संरेखित करने के लिए कुओं में कटौती, तेज cannulaeसोना ECIS / टैक्सी कक्ष के तल पर लक्ष्य इलेक्ट्रोड flanking डॉट्स के साथ गठबंधन है. cannulae खड़ी डाला जाना चाहिए, किसी भी क्षैतिज आंदोलन के बिना, और एक ही तरीके से हटा दिया.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
परख / ECIS टैक्सी के उपन्यास विशेषताओं इसकी वास्तविक समय डेटा के संग्रह को स्वचालित रूप कोशिकाओं chemoattractant का जवाब करने की क्षमता शामिल हैं. हालांकि इस तकनीक का सबसे आम आवेदन व्यक्ति chemotactic gradients सेलुलर प्रतिक्रियाओं को मापने के लिए, या chemotaxis agonists और विरोधी के मिश्रण के शामिल ढ़ाल के लिए है, ECIS / टैक्सी दृष्टिकोण भी इन विन्यास के लिए रूपांतरों है कि काफी में सहायक हो सकता करने के लिए उत्तरदायी है सेलुलर जवाबदेही का मूल्यांकन. वहाँ अच्छा सबूत है कि अतिव्यापी या अनुक्रमिक ढ़ाल उपन्यास मायनों में सेलुलर व्यवहार को प्रभावित कर सकते हैं. इसके अलावा, यह संभावना है कि इन अधिक जटिल ढ़ाल 12 सीटू, 13 में आदर्श रहे हैं.
ECIS / टैक्सी परख तरीके है कि अन्य प्रौद्योगिकियों के साथ संभव नहीं हैं में इन अलग ढाल विन्यास की मॉडलिंग के लिए सक्षम कर सकते हैं. उदाहरण के लिए, अतिरिक्त कुओं को जोड़ने के द्वारा, एक जी के उन्मुखीकरण वितरित कर सकते हैंसेल अच्छी तरह से और लक्ष्य इलेक्ट्रोड के संबंध में radient (ओं). यह भी संभव है परख कॉन्फ़िगर chemotactic कारकों के स्रोत के रूप में कुओं में से एक में कोशिकाओं की जगह.
जब तक परख की स्थापना, यह महत्वपूर्ण है कि जेल और प्रत्येक कक्ष में लक्ष्य overlays काउंटर इलेक्ट्रोड की पूरी जलयोजन बनाए रखने, और कुओं कि सही लक्ष्य इलेक्ट्रोड के लिए स्थानिक संबंध में कटौती. इसके अलावा, सेल के नीचे अच्छी तरह से तरल की पतली फिल्म है कि agarose परत के तहत रूपों के साथ सटे होने की जरूरत है, यह इस फिल्म में है कि कोशिकाओं overlying ढाल के जवाब में कदम होगा. ऐसा करने के लिए, एक जेल टुकड़े के पीछे छोड़ने के बिना agarose प्लग के सभी महाप्राण (व्यंजन) चाहिए. प्रवेशनी के agarose प्लग कटौती को हटाने के दो कुओं, जो ढाल विरूपण और कोशिकाओं को आसानी से लक्ष्य इलेक्ट्रोड के पार ले जाने के लिए अनुमति का प्रभाव पड़ता है के बीच एक सुरंग बना सकते हैं. यह महत्वपूर्ण है कि वैक्यूम दबाव के एएसपीक्रुद्ध जेल प्लग agarose अच्छी तरह अखंडता समझौता से बचने के लिए कम है.
हमने पाया है कि agarose जेल में इस्तेमाल का प्रतिशत में बदलाव कोशिकाओं है कि जंगली प्रकार की कोशिकाओं से में cytoskeletal दोष एक्सप्रेस, सुझाव है कि इस हेरफेर करने के लिए बलों है कि कोशिकाओं अपने पर्यावरण पर लागू कर सकते हैं पूछताछ के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है अंतर कर सकते हैं. यदि जेल संस्कृति दौरान dehydrates, परिवर्तन है कि प्रभाव है कि सेल आंदोलन और घुला हुआ पदार्थ एकाग्रता में वृद्धि हुई है कि कुल प्रणाली प्रतिबाधा कम धीमी गति से होता जेल कठोरता में एक रिश्तेदार वृद्धि सहित प्रयोगात्मक परिणाम, घटित होगा.
परख leukocytes और अन्य कोशिका प्रकार है कि सेल शरीर के माध्यम से वर्तमान प्रवाह की अनुमति नहीं देते आंदोलन की माप के साथ संगत है. कक्षों की एक सार्वभौमिक विशेषता नहीं है: तंत्रिका कोशिकाओं और कुछ उपकला कोशिकाओं (उदाहरण के लिए) सेल शरीर के माध्यम से वर्तमान संचारित और इस प्रकार अब तक कम प्रतिरोध valu उत्पादन होगाव्यक्तिगत सेल प्रति तों.
जबकि इन तरीकों विशेष रूप से chemotactic ढ़ाल के लिए सेलुलर प्रतिक्रियाओं का पता लगाने के लिए परिभाषित कर रहे हैं, यह आसान है के रूप में इसी तरह मेटास्टेसिस और बाह्य संकेत है कि metastatic सेल आंदोलन को बढ़ाने के शामिल अध्ययन के लिए लागू परख कल्पना. इसके अलावा, वहाँ अतिरिक्त सरणी विन्यास है कि अन्य सेल सब्सट्रेट बातचीत अध्ययन में इस्तेमाल किया जा सकता है.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
डेविड Knecht और माइकल एक Lynes प्रौद्योगिकी ECIS / टैक्सी, जो के रूप में कनेक्टिकट विश्वविद्यालय से एप्लाइड बायोफिज़िक्स इंक, के लिए लाइसेंस प्राप्त किया गया है के लिए जारी किए गए पेटेंट
Acknowledgments
इस काम के स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थान (ES07408 और EB00208) से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| ECIS Zθ | Applied Biophysics | www.biophysics.com/prodducts_Ecisz0.php | |
| ECIS Electrode Array | Applied Biophysics | 8W Chemotaxis | www.biophysics.com/cultureware.php |
| Seakem GTG agarose | BioWhittaker | 50070 | |
| RPMI1640 | Cellgro | 10-040 | |
| HyClone Fetal Bovine Serum | Thermo Fisher Scientific, Inc. | SH300703 | |
| Penicillin/Streptomycin | MP Biomedicals | 1670049 | Penicillin 5,000 IU/ml; Streptomycin 5 mg/ml |
| HEPES Buffer | MP Biomedicals | 1688449 | 1M solution, cell culture grade |
| 14 Gauge stainless steel Cannula (2) 4 inch | General Supply | 5-8365-1 | Blunt point |
References
- Boyden, S. The chemotactic effect of mixtures of antibody and antigen on polymorphonuclear leucocytes. J. Exp. Med. 115, 453-466 (1962).
- Lauffenburger, D. A., Tranquillo, R. T., Zigmond, S. H. Concentration gradients of chemotactic factors in chemotaxis assays. Methods Enzymol. 162, 85-101 (1988).
- Nelson, R. D., Quie, P. G., Simmons, R. L. Chemotaxis under agarose: a new and simple method for measuring chemotaxis and spontaneous migration of human polymorphonuclear leukocytes and monocytes. J. Immunol. 115, 1650-1650 (1975).
- Newton-Nash, D. K., Tonellato, P., Swiersz, M., Abramoff, P. Assessment of chemokinetic behavior of inflammatory lung macrophages in a linear under-agarose assay. J. Leukoc. Biol. 48, 297-305 (1990).
- Giaever, I., Keese, C. R. Monitoring fibroblast behavior in tissue culture with an applied electric field. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 81, 3761-374 (1984).
- Keese, C. G. I. A Whole Cell Biosensor bsed on Cell-Substrate Interactions. IEEE Engineering in Medicine and Biology Society. 12, 500-501 (1990).
- Laevsky, G., Knecht, D. A. Cross-linking of actin filaments by myosin II is a major contributor to cortical integrity and cell motility in restrictive environments. J. Cell. Sci. 116, 3761-3770 (2003).
- Condeelis, J., Bresnick, A., Demma, M., Dharmawardhane, S., Eddy, R., Hall, A. L., Sauterer, R., Warren, V. Mechanisms of amoeboid chemotaxis: an evaluation of the cortical expansion. 11, 5-6 (1990).
- Hadjout, N., Laevsky, G., Knecht, D. A., Lynes, M. A. Automated real-time measurement of chemotactic cell motility. Biotechniques. 31, 1130-1138 (2001).
- Hadjout, N., Yin, X., Knecht, D. A., Lynes, M. A. Automated real-time measurements of leukocyte chemotaxis. J. Immunol. Methods. 320, 70-80 (2007).
- Yin, X., Knecht, D. A., Lynes, M. A. Metallothionein mediates leukocyte chemotaxis. BMC Immunol. 6, 21-21 (2005).
- Lundien, M. C., Mohammed, K. A., Nasreen, N., Tepper, R. S., Hardwick, J. A., Sanders, K. L., Van Horn, R. D., Antony, V. B. Induction of MCP-1 expression in airway epithelial cells: role of CCR2 receptor in airway epithelial injury. J. Clin. Immunol. 22, 144-152 (2002).
- Zudaire, E., Cuesta, N., Murty, V. The aryl hydrocarbon receptor repressor is a putative tumor suppressor gene in multiple human cancers. J. Clin. Invest. 118, 640-650 (2008).
- Opp, D., Wafula, B., Lim, J., Huang, E., Lo, J. C., Lo, C. M. Use of electric cell-substrate impedance sensing to assess in vitro cytotoxicity. Biosens. Bioelectron. 24, 2625-269 (2009).
- Foxman, E. F., Kunkel, E. J., Butcher, E. C. Integrating conflicting chemotactic signals. The role of memory in leukocyte navigation. J. Cell. Biol. 147, 577-588 (1999).
- Heit, B., Tavener, S., Raharjo, E., Kubes, P. An intracellular signaling hierarchy determines direction of migration in opposing chemotactic gradients. J. Cell. Biol. 159, 91-102 (1999).
