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Medicine

Myocardial ischemia और reperfusion की एक murine बंद छाती मॉडल

Published: July 17, 2012 doi: 10.3791/3896

Summary

शल्य आघात एक भड़काऊ प्रतिक्रिया को प्रेरित करता है. साइटोकिन्स और अंतर्जात ligands के ischemia और reperfusion के बाद दौरे रोधगलितांश आकार मिलाना जाना जाता है. हम एक संशोधित murine ischemia और reperfusion फांसी वजन का उपयोग करने के लिए thoracotomy के प्रभाव को कम करने की बंद छाती मॉडल प्रस्तुत करते हैं.

Abstract

कोरोनरी बंधाव की खुली छाती मॉडल में thoracotomy के द्वारा शल्य आघात के एक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया है जो अलग ischemia और reperfusion में शामिल तंत्र को संशोधित लाती है. प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया cytokine अभिव्यक्ति और रिहाई या सहज प्रतिरक्षा रिसेप्टर्स की अंतर्जात ligands के स्राव शामिल हैं. सहज रोगक्षमता के सक्रियकरण संभावित रोधगलितांश आकार मिलाना कर सकते हैं. हम एक मौजूदा murine बंद छाती मॉडल फांसी वजन है जो दौरे के पूर्व और postconditioning और myocardial ischemia और reperfusion में सहज रोगक्षमता की भूमिका का अध्ययन करने के लिए उपयोगी हो सकता है का उपयोग करते हुए संशोधित किया है. इस मॉडल को जानवरों की शल्य आघात से myocardial ischemia के शुरू होने से पहले ठीक करने के लिए अनुमति देता है.

अस्थिर anesthetics के तीव्रता से अध्ययन किया गया है और उनके हृदय के लिए शर्त प्रभाव अच्छी तरह से जाना जाता है. हालांकि, इस सुरक्षात्मक प्रभाव कोरोनरी धमनी बंधाव की खुली छाती मॉडल में इसके उपयोग precludes. इस प्रकार, एक और लाभ वें का उपयोग हो सकता हैई एक पुराने मॉडल बंद छाती में उपकरण के लिए अच्छी तरह से चलाया अस्थिर anesthetics, के बाद से उनकी शर्त प्रभाव 72 घंटे तक रहता है. आंतरायिक ischemia और कई हिट मॉडल के साथ पुरानी हृदय रोग के लिए इस मॉडल के अन्य संभावित आवेदन कर रहे हैं.

पुरानी बंद छाती मॉडल के लिए, intubated और हवादार चूहों 4 पसलियों के बीच अंतरिक्ष के माध्यम से एक पार्श्व कुंद thoracotomy गुजरना. बाएँ एक संयुक्ताक्षर अवरोही पूर्वकाल के बाद पहचान पोत नीचे पारित हो जाता है और दोनों सीवन समाप्त होता है एक occluder के माध्यम से पिरोया जाता है. फिर, दोनों सिरों सीवन छाती दीवार, knotted के माध्यम से पारित कर रहे हैं के लिए एक पाश के रूप में और उपचर्म ऊतक में छोड़ दिया. सीने में 5 दिनों के लिए बंद करने और वसूली के बाद, चूहों anesthetized फिर रहे हैं, सीने में त्वचा फिर से खोल दी और फांसी वजन ईसीजी नियंत्रण के तहत पाश के शौकीन हैं.

प्रोटोकॉल / ischemia reperfusion के अंत में, दिल टीटीसी साथ रोधगलितांश के लिए कलंकित किया जा सकता हैआकार मूल्यांकन या ऊतक विज्ञान और immunohistochemistry के अलावा morphometric अध्ययन की अनुमति छिड़काव निर्धारण गुजरना.

Protocol

1. संज्ञाहरण की प्रेरण

  1. Isoflurane साथ शामिल होने के लिए, जो 3.0 खंड% और 0.5 एल / मिनट की ऑक्सीजन का प्रवाह वाष्प सेट करने के लिए जुड़ा हुआ है एक प्रेरण बॉक्स में माउस जगह है.
  2. बेहोशी के बाद स्पर्श उत्तेजना के लिए एक प्रतिक्रिया और forelimb या hindlimb पेडल वापसी अनुपस्थित प्रतिवर्त प्रेरित करने में नाकाम रहने के साथ हासिल की है, और तापमान नियंत्रित ऑपरेटिंग मेज पर एक लापरवाह स्थिति में माउस जगह है. एक नाक शंकु जो प्रेरण बॉक्स के माध्यम से वाष्प से जुड़ा है पर संज्ञाहरण बनाए रखें. इंटुबैषेण की सुविधा के लिए एक 5-0 नायलॉन सीवन के साथ ऊपरी incisors फिक्सिंग सिर झुका.
  3. 37 में शरीर कोर का तापमान बनाए रखने के लिए गुदा तापमान जांच डालें डिग्री सेल्सियस टेप के साथ extremities को ठीक करें. क्रॉस कम सही पैर पर पैर छोड़ दिया करने के लिए बाएं सीने खोलने और दिल बेहतर बेनकाब.
  4. गर्दन और बाएं सीने लोमनाशक क्रीम लगाओ. 1 मिनट के बाद क्रीम साफ कर लें. स्थानीय त्वचा के लिए povidone आयोडीन लागू करेंकीटाणुशोधन. दर्द से राहत के लिए buprenorphine शरीर 0.05 मिलीग्राम / किग्रा वजन subcutaneously इंजेक्षन.
  5. एक छोटी सी कैंची के साथ एक midline गर्दन की त्वचा चीरा. कुंद ग्रंथियों और मांसपेशियों कि ट्रेकिआ कवर काटना. वेंटीलेटर पर बारी. वेंटीलेटर सेटिंग्स शारीरिक मापदंड के लिए समायोजित किया जाना चाहिए. हम एक Minivent, ह्यूगो सैक्स Elektronik एक सांस 105/min की दर के साथ हार्वर्ड उपकरण और 200 μl का एक ज्वार की मात्रा का उपयोग करें. एक संदंश के साथ जीभ खींच और धीरे से एक 22 जी धातु ट्यूब डालने. ट्रेकिआ और छाती आंदोलन के अंदर ट्यूब के प्रत्यक्ष दृश्य द्वारा इंटुबैषेण की पुष्टि करें.
  6. गैस टयूबिंग बर्बाद प्रयोगशाला अंतरिक्ष के प्रदूषण को रोकने के लिए स्विचन द्वारा प्रेरण बॉक्स बाईपास. 2.0 खंड% वाष्प समायोजित करें.

2. Thoracotomy

  1. बाईं midclavicular लाइन में त्वचा चीरा. बगल की ओर उपचर्म ऊतक काटना कुंद. प्रमुख pectoralis मांसपेशी की सीमा को पहचानें और यह नाबालिग पी से काटना कुंदectoralis मांसपेशी नीचे. सही करने के लिए मामूली pectoralis मांसपेशी खींच. आप रिब पिंजरे के एक सीधा दृश्य लाभ होगा.
  2. पहचानें और दो टूक एक संदंश के साथ 4 पसलियों के बीच अंतरिक्ष pentetrate. संदंश के सुझावों पसलियों के बीच जगह अपने आप से retractors जो ऑपरेशन टेबल से जुड़ी रबर बैंड के साथ समायोजित कर रहे हैं डालने के लिए अनुमति की अवधि है. आप बाईं अलिन्द सहित दिल की एक स्पष्ट दृष्टिकोण होना चाहिए. इस का उपयोग आमतौर पर किसी भी रक्त की हानि के बिना हासिल की है और इस प्रकार बिजली जमावट की आवश्यकता के बिना.

3. दिल की तैयारी

  1. धीरे से दिल घायल बिना पेरीकार्डियम खींच.
  2. बाएं वेंट्रिकल की पूर्वकाल दीवार से बाएं आलिंद अलिन्द उठाने के द्वारा छोड़ दिया पूर्वकाल अवरोही धमनी (लाड) को पहचानें. लाड धुंधला सीमाओं और चमकीले लाल रंग के रूप में नसों की तुलना के साथ एक छोटी सीधे पाठ्यक्रम पर ही देखा जाएगा.

4. कोरोनरी धमनीउपकरण

  1. यह एक U-आकार में बनाने के द्वारा एक पतली सुई टिप के साथ एक 8-0 prolene सीवन तैयार. सुई लाड नीचे काफी गहरे मायोकार्डियम के माध्यम से गुजरती हैं.
  2. सीवन सीवन के प्रत्येक पक्ष पर 1 सेमी की सुई अंत में कटौती.
  3. किसी भी तेज कोनों को रोकने occluder के रूप में 1 मिमी पीई 10 टयूबिंग अनुभाग कटौती. . Occluder शराबी desinfection में भिगोना करने के लिए और उपयोग के नोट से पहले बाहर नल की अनुमति दें: टयूबिंग 24 घंटे के लिए 100% इथेनॉल में जज्ब किया जाना चाहिए यह उचित 4 बाँझ.
  4. धागा दोनों सीवन occluder के माध्यम से समाप्त होता है.
  5. एक आकार 3 Kalt सीवन सुई का उपयोग करने के लिए मार्गदर्शन के लिए दोनों सीवन ऊपरी पसलियों के बीच अंतरिक्ष के बाहर समाप्त होता है.

5. चेस्ट बंद

  1. में खोला पसलियों के बीच अंतरिक्ष के ऊपरी और निचले रिब साथ टाई एक 6-0 prolene सीवन के साथ में. इससे पहले कि आप छाती बंद आप 5.2 करने के लिए आगे बढ़ना चाहिए.
  2. कुछ श्वसन चक्र को खोलने के लिए फेफड़ों Hyperinflateexpiratory ट्यूब clamping के द्वारा श्वासरोध के ऊपर. यह तिकड़म भी वेंटीलेटर का प्रकार पर निर्भर हो सकता है. ज्वार की मात्रा 300 μl करने के लिए सेट करें जब तक सीने में बंद कर दिया है.
  3. वेंटीलेटर ज्वार मात्रा वापस 200 μl करने के लिए सेट.
  4. 8-0 लाड बंधाव सीवन के दोनों समाप्त होता है टाई करने के लिए उन्हें एक पाश फार्म.
  5. एक ईसीजी देते हैं.
  6. ऊपर वजन 8-0 पाश के लिए और हुक वजन ध्यान से लटका. आप कुछ दिल की धड़कन के भीतर एक अनुसूचित जनजाति ऊंचाई महत्वपूर्ण देखना चाहिए. रिलीज. वजन नोट: इन प्रयोगों का वजन 5.5 ग्राम का उपयोग करते हैं, लेकिन वजन तनाव और चूहों के शरीर के वजन के आधार पर भिन्न हो सकता है.
  7. प्लेस एक उपचर्म जेब में पाश और 6-0 एकल गाँठ sutures के साथ त्वचा बंद.
  8. माउस वार्मिंग दीपक के नीचे extubation के बाद ठीक हो.

6. Myocardial ischemia और reperfusion

  1. के बाद कम से कम 5 दिन एक वसूली अवधि ketamine, xylazine के एक मिश्रण के साथ संज्ञाहरण प्रेरितऔर atropine ketamine (4 BW / मिलीलीटर किलो, 10 मिलीग्राम / एमएल, xylazine 2 मिलीग्राम / एमएल, atropine 0.06 मिलीग्राम / एमएल, 1.
  2. नली लगाना और ischemia और reperfusion प्रयोगों के लिए कमरे में हवा के साथ हवादार.
  3. छाती की त्वचा sutured खोलें. तैयार 8-0 सीवन पाश. एक ईसीजी देते हैं.
  4. वजन हुक और उन्हें फांसी. अपने ischemia के प्रोटोकॉल का पालन करें. 2 अनुसूचित जनजाति ऊंचाई की संभावित विघटन के लिए ईसीजी देखो.
  5. Ischemia के अंत में रिलीज वजन. त्वचा बंद करें, माउस extubate के और यह ठीक है.

7. Reperfusion समय के साथ infarct आकार 3 दिन आकलन

  1. चतनाशून्य करना और वांछित reperfusion की समय की समाप्ति पर माउस नली लगाना.
  2. Xyphoid के लिए midline में छाती त्वचा कट. पेट खोलें और रिब पिंजरे के नीचे डायाफ्राम कटौती. छाती midclavicular लाइन के दोनों पक्षों पर खुला कटौती.
  3. फड़फड़ाते दिल को unobstructed पहुँच प्राप्त सीवन के साथ पूर्वकाल छाती दीवार को ठीक करें.
  4. ध्यान से 8-0 सीवन पाश तैयार. पाश कटौती और एक गाँठ टाई करने के लिए लाड रोक देना.
  5. बाएं आलिंद में 10% phthalo नीला इंजेक्षन. हृदय की मात्रा अधिभार को रोकने के लिए, धीरे धीरे डाई और समय - समय पर महाप्राण (व्यंजन) इंजेक्षन.
  6. बाएं आलिंद में पोटेशियम क्लोराइड इंजेक्षन. इस बराबर रोधगलितांश आकार मूल्यांकन के लिए हृत्प्रसार में दिल की गिरफ्तारी जाएगा.
  7. दिल बाहर कटौती, के रूप में ज्यादा extracardial ऊतक के रूप में संभव है छोड़ने के लिए दिल काटने को कम.
  8. फॉस्फेट बफर समाधान में दिल धो लें.
  9. Isopentane और तरल नाइट्रोजन में दिल रुक. वैकल्पिक रूप से, दिल एक फ्रीजर में रखा जा सकता है जब तक हल्के ढंग से जमे हुए है.
  10. दिल को मिमी 1 स्लाइस में काट. हम एक टुकड़ा करने की क्रिया रेज़र ब्लेड के बराबर स्लाइस (चित्रा 4) में दिल कटौती डिवाइस है. सुनिश्चित करें कि सही ढंग से दिल दिल की लंबी अक्ष को सीधा कटौती करने के लिए गठबंधन किया है.
  11. 37 ° सेल्सियस पर 20 मिनट के लिए 1.5% टीटीसी में स्लाइस सेते हैं. हम एक साथ 96 प्लेट का उपयोग करें जहांप्रत्येक टुकड़ा एक कुएं में डाल दिया है. यह टीटीसी बचाने और आप वाटमान फिल्टर का उपयोग करने के लिए कलाकृतियों को रोकने छोड़ूँगा.
  12. 4% formaldehyde के साथ स्लाइस रातोंरात फिक्स. यह स्लाइस हटना है लेकिन इसके विपरीत डाई को बढ़ाता है.
  13. एक खुर्दबीन स्लाइड पर डाल टुकड़ा. एक और स्लाइड के साथ कवर. स्लाइड के प्रत्येक के अंत में 1 मिमी धातु spacers का प्रयोग करें और स्लाइड पेपर क्लिप के साथ एक साथ पकड़.
  14. प्रत्येक टुकड़ा के दोनों पक्षों से एक डिजिटल छवि लो. हमेशा एक ही सेटिंग्स का उपयोग करें और में छोटे स्लाइस के लिए ज़ूम नहीं है.
  15. धरातल - मापन के लिए एक सॉफ्टवेयर का प्रयोग करें. हम NIH द्वारा ImageJ का उपयोग करें. हमेशा infarcted क्षेत्रों के लिए एक ही मापदंड का उपयोग करें, जैसे केवल सफेद क्षेत्रों की infarcted कर रहे हैं. सफेद गुलाबी क्षेत्रों की infarcted कर रहे हैं. हम के रूप में अच्छी तरह से हस्तक्षेप और धरातल - मापन के लिए जांचकर्ताओं को अंधा है.

8. प्रोटोकॉल के लिए वैकल्पिक हार्ट तैयारी

  1. 7.2-7.1 चरणों का पालन करें. और 8.2 करने के लिए आगे बढ़ना. टीटीसी धुंधला साथ विश्वसनीय रोधगलितांश के मूल्यांकन 7 भीतर किया जा सकता हैReperfusion के निशान संकोचन की वजह से 2 घंटे.
  2. किसी भी extracardial ऊतक तैयार है और महाधमनी जड़ को कवर थाइमस काटना कुंद.
  3. संदंश साथ आरोही महाधमनी पकड़ो और संभव के रूप में के रूप में और कम extracardiac ऊतक के साथ दिल बाहर कटौती.
  4. धो और दिल cardioplegic समाधान में धीरे निचोड़.
  5. एक P35 cardioplegic समाधान के साथ भरा पकवान में दिल रखें.
  6. आरोही महाधमनी तैयार करें.
  7. एक प्रवेशनी कि formaldehyde के साथ प्रीफिल्ड साथ आरोही महाधमनी Cannulate के. हम जस्ता formalin लगानेवाला और एक 24 जी चार 3 लाइन का उपयोग.
  8. बाईं अलिन्द और बाएं आलिंद के बीच एक छेद में कटौती.
  9. बाएं आलिंद में एक 16 सेमी लंबे समय तक इसे संलग्न टयूबिंग के साथ एक 26 जी कैथेटर डालें. तुम भी एक PE50 टयूबिंग का उपयोग कर सकते हैं.
  10. Formalin लगानेवाला साथ दस मिनट के लिए दिल छिड़कना.
  11. 7 डिग्री सेल्सियस पर 24 घंटे की एक अधिकतम के लिए लगानेवाला से भरा ट्यूब में दिल प्लेस
  12. प्रस्तुत करने के साथ जारी रखेंऊतक विज्ञान / immunohistochemistry के लिए aration.

9. प्रतिनिधि परिणाम

चिरकारी कोरोनरी धमनी की ligation के कई नुकसान के साथ एक जटिल तकनीक है. हालांकि, एक बार इसे महारत हासिल है यह बहुत कम मृत्यु दर और अत्यंत विश्वसनीय परिणामों के साथ किया जा सकता है. चूहों और दिल के लिए उपयोग का इष्टतम स्थिति सफल लाड की पहचान उपकरण के लिए महत्वपूर्ण हैं. बंधाव की स्थिति जाहिर रोधगलितांश आकार को प्रभावित करेंगे, इस तरह एक मानकीकृत बंधाव साइट की आवश्यकता है. इसके अलावा, अगर वंशीय शाखाओं को प्रभावित कर रहे हैं यह एक बंडल शाखा के बजाय अनुसूचित जनजाति ऊंचाई ब्लॉक करने के लिए ले जा सकता है. नसों से epimyocardial या निलय से रक्त स्राव, अगर बंधाव भी गहरी होती है, और चूहों अगर अत्यधिक खून बह रहा है बाहर रखा जाना चाहिए कर सकते हैं. Pericard संभव के रूप में के रूप में पूरी तरह से हटा दिया जाना चाहिए. Pericard छोड़कर ligation के लिए myocard में सुई धक्का बढ़ जाएगा. इसके अलावा, यह pericarditis कारण, अंततःadhesions से प्रेरित और histological परीक्षा मुश्किल कर देगा. पीई occluder किसी भी तेज कोनों के बिना के रूप में संभव के रूप में कम हो myocard के लिए आघात को कम करना चाहिए. फेफड़ों के hyperinflation पूरी तरह से सीने में बंद होने के बाद तनाव वातिलवक्ष को रोकने के लिए महत्वपूर्ण है. सीने में जल निकासी के लिए कोई ज़रूरत नहीं है. सीवन समाप्त होता है खींच द्वारा खुले सीने में बंधाव की सही स्थिति का परीक्षण क्योंकि खींच तनाव को नियंत्रित करने के लिए मुश्किल है लोप किया जाना चाहिए. यदि लाड के उपकरण विफल रहता है, आगे प्रयास है क्योंकि इस मायोकार्डियम आघात और edema जोड़ने बचा जाना चाहिए.

आदेश में विश्वसनीय परिणाम प्राप्त करने के लिए, प्रोटोकॉल पैरामीटर तय की जानी चाहिए. इसलिए, चूहों intubated और कमरे में हवा और शरीर के तापमान को कसकर एक राय प्रणाली के साथ नियंत्रित किया जाता है के साथ हवादार है. फांसी वजन का उपयोग पहले से ही जोर दिया गया है. अन्य खींच उपकरणों तनाव घटाने और गैर मानकीकृत खींच तनाव का नुकसान है. इस्कीमिकreperfusion की और रोड़ा के कई चक्र के साथ - पूर्व और postconditioning के प्रोटोकॉल और अधिक आसानी से वजन फांसी क्योंकि वे बस जरूरत है और उठाया जा लटका (चित्रा 1) जाने के साथ प्रदर्शन कर रहे हैं.

Infarct क्षेत्रों (सफेद) (लाल) (नीला) (चित्रा 2A बी) जोखिम पर जोखिम और गैर क्षेत्र में क्षेत्रों से साफ़ होना चाहिए. Infarct आकार ischemia की अवधि पर निर्भर हैं. Reperfusion समय कम से कम 2 घंटे के लिए सफल टीटीसी धुंधला हो जाना (चित्र 1 और 2) की अनुमति चाहिए. सबसे महत्वपूर्ण बात, साइटोकाइन शाही सेना अभिव्यक्ति दिखावा संचालित जानवरों जो ischemia और reperfusion के अलावा सभी शल्यचिकित्सा की प्रक्रियाओं का था के रूप में जो जानवरों रोधगलन (चित्रा 3A सी) लिया की तुलना में कम है.

चित्रा 1
चित्रा 1. क्षेत्र के प्रतिशत में जोखिम (है / एएआर%) पर के आकार रोधगलितांश. चूहे 30 मिनट 1 से पीछा ischemia लियाReperfusion की 20 मिनट (मैं / आर, n = 10). आईपीसी: Ischemic postconditioning, चूहों ischemia के 30 मिनट 3 / reperfusion की 20 रोड़ा सेकंड प्रत्येक चक्र के बाद लिया (n = 6, इंगित करता है * पी <0.05).

चित्रा 2A
चित्रा 2A प्रतिनिधि टीटीसी से सना हुआ दिल टुकड़ा. व्हाइट: रोधगलितांश क्षेत्र, लाल: खतरे में क्षेत्र, ब्लू: गैर - occluded क्षेत्र.

चित्रा 2B
आंकड़ा 2B एक infarcted क्षेत्र (सफेद) का प्रतिनिधि टुकड़ा. ध्यान दें कि बाएं वेंट्रिकल सुप्रीम के करीब के चोटीदार आकार के कारण, epimyocard विमान क्षेत्र के रूप में दिखाई देते हैं और धरातल - मापन संबंधी माप (गुलाबी / नीले बाहरी क्षेत्र) के लिए नहीं माना जाना चाहिए. लाल = टीटीसी व्यवहार्य myocard दाग.

चित्रा 3A
चित्रा 3A मेरे में कोई महत्वपूर्ण अंतरocardial TNF-α 30 मिनट ischemia और 120 मिनट reperfusion के बाद mRNA अभिव्यक्ति. n = समूह प्रति 4-6.

चित्रा 3B
चित्रा 3B Myocardial mRNA अभिव्यक्ति आईएल 1β. 30 मिनट ischemia और 120 मिनट reperfusion की (मैं / आर) के बाद. नियंत्रण के बीच कोई महत्वपूर्ण अंतर (सर्जरी) और दिखावा (कोई ischemia / reperfusion की) संचालित समूह है. n = समूह प्रति 4-6, * पी <0.05 इंगित करता है.

चित्रा 3C
चित्रा 3C. Myocardial ischemia के 30 मिनट के बाद आईएल -6 mRNA अभिव्यक्ति और 120 मिनट reperfusion (आई / आर). नियंत्रण के बीच कोई महत्वपूर्ण अंतर (सर्जरी) और दिखावा (कोई ischemia / reperfusion की) संचालित समूह है. n = समूह प्रति 4-6, * पी <0.05 इंगित करता है.

चित्रा 4
4A - सी सुनो. आंकड़ाटी काटने डिवाइस. एक: काटने की स्थिति में रेज़र ब्लेड के साथ बंद हुए थे. बी: खुला, ओर देखने. सी: खुला, सामने दृश्य. दिल अपने लंबे अक्ष रेज़र ब्लेड (तीर) के लिए सीधा साथ सफेद प्लास्टिक बिस्तर के नाली में गठबंधन हो जाएगा.

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Discussion

हम एक बाएं पार्श्व पसलियों के बीच thoracotomy के माध्यम से दिल तक पहुँचने और बाहर प्रमुख बाएँ midclavicular लाइन में छाती को लाड sutures के द्वारा एक murine मॉडल बंद छाती को संशोधित किया है. बोनी रिब पिंजरे बरकरार छोड़कर आघात को कम करने के लिए, दर्द दवा, शल्य साइट संक्रमण और इस प्रकार के लिए की जरूरत है, वसूली की सुविधा. बाईं आंतरिक स्तनपायी धमनी के संरक्षण विद्युतदहनकर्म के लिए कोई ज़रूरत नहीं है. हम बाद में आसान उपयोग के लिए चमड़े के नीचे ऊतक में सीवन पाश छोड़ दो और एक परिभाषित रोड़ा के लिए फांसी वजन सिस्टम का उपयोग करें. एक बंद छाती मॉडल शल्य आघात और बाद में प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया 4 के लिए सम्मान के साथ myocardial ischemia और reperfusion के सभी अध्ययन प्रोटोकॉल के आवेदन की अनुमति देता है. हालांकि, साइटोकाइन आरएनए अभिव्यक्ति के लिए बढ़ जाती है 3 दिनों चूहों, चूहों, और 4-6 कुत्तों में शल्य आघात के कारण के लिए. इस प्रकार, 5 दिन की वसूली अंतराल के बाद किया जाना चाहिए. इसके अतिरिक्त, इस मॉडल को अस्थिर anest के उपयोग की अनुमति देता हैउपकरण के लिए hetics जो 72 7,8 घंटे के लिए एक ज्ञात शर्त प्रभाव है. पश्चात दर्द के लिए Opioids भी रोधगलन उन्नति कर सकते हैं. यह buprenorphine के लिए दिखाया गया है कि myocardial समारोह वैश्विक दौरे 9 ischemia के बाद सुधार हुआ है. हालांकि, चूहों आमतौर पर buprenorphine के अतिरिक्त dosages की जरूरत नहीं है के रूप में व्यवहार अवलोकन द्वारा न्याय. वहाँ सबूत है कि शल्य आघात पूर्ववर्ती रोधगलन cytokine अभिव्यक्ति की "पृष्ठभूमि" शोर का कारण है और इसके अलावा, रोधगलितांश आकार व्यवस्थित है. Ren एट अल. पता चला है कि दूरदराज के शल्य आघात 10 दिल की शर्त लाती है. उच्च गतिशीलता समूह 1 बॉक्स (HMGB1) या गर्मी झटका प्रोटीन जो जारी कर रहे हैं या आघात के बाद secreted के रूप में अन्य अंतर्जात ligands के दौरे 11-13 समारोह मिलाना दिखाया गया है.

एक prehospital सेटिंग में myocardial infarction आम तौर पर एक prece के बिना होता हैडिंग आघात या चोट. इस प्रकार, एक पुरानी बंद छाती मॉडल myocardial ischemia और reperfusion के लिए एक अधिक lifelike दृष्टिकोण की अनुमति देता है.

संभावित अध्ययन प्रोटोकॉल इस्कीमिक और pharmacologic पूर्व और postconditioning और आक्रामक hemodynamic माप शामिल हैं. इस मॉडल का भविष्य अनुप्रयोगों के लिए उपकरण की शल्य आघात पर विचार करने के लिए बिना कई हिट मॉडल शामिल हो सकते हैं.

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Disclosures

ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.

Acknowledgments

हम छिड़काव - निर्धारण तकनीक के बारे में सलाह डैनियल Duerr के लिए धन्यवाद.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Vapor Drägerwerk AG Isoflo
Microscope Leica M80
Light source Schott KL 1500 LCD
Homeothermic Blanket Control Unit Harvard Apparatus
MiniVent Type 845 Hugo Sachs Elektronik
8-0 Prolene Ethicon BV130-5 6.5mm 3/8c
6-0 Prolene Ethicon BV-1 9.3 mm 3/8c
Kalt suture needle size 3 FST 12050-03
Triphenyltetrazolium Sigma Aldrich 93145
Phthalo blue Heucotech LTD
PowerLab ADInstruments

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References

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Kim, S. C., Boehm, O., Meyer, R.,More

Kim, S. C., Boehm, O., Meyer, R., Hoeft, A., Knüfermann, P., Baumgarten, G. A Murine Closed-chest Model of Myocardial Ischemia and Reperfusion. J. Vis. Exp. (65), e3896, doi:10.3791/3896 (2012).

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