补肾胶囊对糖尿病小鼠的胰岛移植
Summary
我们的协议是干净，便捷地提供胰岛细胞或细胞小鼠肾囊下。集中使用，用于移植的肾囊下细胞最终油管颗粒细胞。这项技术的易用性，减少压力的细胞和鼠标。
Abstract
我们的协议是干净，便捷地提供胰岛细胞或细胞，糖尿病患者或正常小鼠肾囊下。我们发现，这是更容易集中到最终交付油管，用于移植的肾囊下细胞（PE50）颗粒的胰岛细胞或细胞。这种技术提供的速度和易用性，同时减少任何不必要的压力细胞或鼠标。
载入：落户，手工采摘，胰岛细胞或颗粒细胞仔细吸气使用P200 pipetteman和一条直线，薄壁枪头的1.5 ml离心管底部。 PE50管材的长度是使用一个小的硅胶适配器管连接到枪头。细胞是可以解决，在一角，然后慢慢拨号pipetteman PE50管材。一旦细胞附近PE50管材年底，扭结和硅胶适配器管放置在扭结。 PE50管材被转移到一个15毫升锥形含有削减5毫升吸管，PE50管材超过5毫升吸管一边录音，以防止在离心冰壶。细胞可以达到1000转和停止。
移植受体小鼠麻醉，剃光，并清理。一个小切口鼠标左翼和肾脏暴露出来。肾，脂肪和组织保持与生理盐水棉签湿润。使用硅适配器管，是连接到远端的PE50汉密尔顿螺杆驱动注射器，包含一个枪头，。一个小缺口是对肾脏的右侧边，不是太大，也不太深。 PE50管材的斜面结束，最近的细胞，是经过精心包膜下，油管是移动轻轻地擦拭时生理盐水以腾出空间;干胶囊可以容易撕裂。一个小气泡慢慢拨号注射器螺杆驱动包膜下交付。胰岛细胞，然后慢慢地交付背后的气泡。一旦胰岛已交付的肾动态平衡是维持和装饰品是低热量烧灼。肾脏是放回腔和腹膜和皮肤缝合装订。老鼠立即治疗氟尼辛和丁丙诺啡平方米，并放置在笼子里加热垫。
Protocol
Discussion
该协议提供了一个干净，方便地提供糖尿病患者或正常小鼠肾被膜下胰岛细胞或细胞的实际和有效的选择。集中和造粒最终交付油管，用于移植的肾囊下细胞（PE50）的胰岛细胞或细胞的技术，提供了一个移植的细胞，而减少任何不必要的压力细胞或鼠标简单而有效的方法。
Acknowledgements
加州大学旧金山分校糖尿病中心。美国国立卫生研究院加州大学旧金山分校DERC胰岛核心。 JDRF。 LIFESCAN公司强生公司。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Surgical gloves | Fisher | 11-394-95(sz) | ||
| Surgical scrub sponges | Moore medical | 42940AK | ||
| Forceps | Miltex | 6-114 and 6-26 | 2 with teeth, 2 straight | |
| Dissecting scissors n=2 | Miltex | 5-290 | ||
| Oster razor (sz. 40 blade) | Fisher | 01-305-10B | ||
| 4×4 Sterile gauze pads | Moore Medical | 08252AK | ||
| Povidone Iodine pads | Moore Medical | 08486AK | ||
| Alcohol pads | Fisher | 14-819-2 | ||
| Heating pad | Moore Medical | 42508AK | ||
| 23G or 25G needles | 1″ long | |||
| Cidex solution | Moore Medical | 07535AK | for cleaning/santizing instruments | |
| PE50 polyethylene tubing | BD | 427411 | PE50, 0.965mm O.D. x 0.58mm I.D. | |
| Cidex + 28 day soln | Moore | 35625AK | ||
| Silicone tubing | Spectrum Chromat. | 123732 | 5/32”OD x 1/32” ID | |
| Instrument sterilizing container | Moore Medical | 39074AK | ||
| Straight Pipet Tips | TipOne | 1111-0810 | sterile | |
| Glass syringe w/screw-drive | Hamilton | 1001 | ||
| Cauterizing tool | Roboz | RS230 | ||
| Needle Holder | Moore Medical | 41-067 | ||
| 5-0 silk | Look | 754B | for suture (6-C) | |
| Cotton tipped swab | Moore Medical | |||
| 9mm autoclip stapler | BD | 7630 | ||
| 9mm staples | BD | 7631 | ||
| 9mm staple remover | BD | 7637 |
References
- Tang, Q., Henriksen, K. J., Bi, M., Finger, E. B., Szot, G., Ye, J., Masteller, E. L., McDevitt, H., Bonyhadi, M., Bluestone, J. A. In vitro-expanded antigen-specific regulatory T cells suppress autoimmune diabetes. J Exp Med. 199, 1455-1465 (2004).
- Rulifson, I. C., Szot, G. L., Palmer, E., Bluestone, J. A. Inability to induce tolerance through direct antigen presentation. Am J Transplant. 2, 510-519 (2002).
- Lenschow, D. J., Zeng, Y., Hathcock, K. S., Zuckerman, L. A., Freeman, G., Thistlethwaite, J. R., Gray, G. S., Hodes, R. J., Bluestone, J. A. Inhibition of transplant rejection following treatment with anti-B7-2 and anti-B7-1 antibodies. Transplantation. Transplantation. 60, 1171-1178 (1995).
- Lenschow, D. J., Zeng, Y., Thistlethwaite, J. R., Montag, A., Brady, W., Gibson, M. G., Linsley, P. S., Bluestone, J. A. Long-term survival of xenogeneic pancreatic islet grafts induced by CTLA4lg. Science. 257, 789-792 (1992).
