糖尿病マウスの腎臓のカプセルに膵島の移植
Summary
我々のプロトコルは、きれいに、簡単にマウスの腎被膜下膵島または細胞を提供するために開発されました。細胞は、腎臓の被膜下に細胞を移植に使用される最終的なチューブのペレットに集中している。このテクニックの使いやすさは、細胞とマウスへのストレスを軽減。
Abstract
我々のプロトコルは、きれいにし、容易に糖尿病や正常マウスの腎臓被膜下に膵島または細胞を提供するために開発されました。我々は、腎被膜下に細胞を移植するために使用される最終的な配信のチューブ（PE50）のペレット状に島や細胞を集中しやすいことがわかった。細胞にまたはマウスへの過度のストレスを軽減しながらこの手法は、速度と使いやすさの両方を提供します。
ローディング：定住、手で選んだもので、島やペレット化した細胞を注意深くP200 pipettemanとストレート、薄肉ピペットチップを用いて1.5 mlのマイクロチューブの底部を吸引している。 PE50チューブの長さは、小さなシリコンのアダプタチューブを使用して、ピペットの先端に取り付けられています。細胞は先端に、静置され、その後、徐々にpipettemanをダイヤルしてPE50チューブに転送されます。細胞はPE50チューブの終わり近くになったら、キンクが行われ、シリコンのアダプターチューブはキンク上に配置される。 PE50チューブを15 mLの入ったコニカルカット5 mLのピペットに転送され、PE50チューブを遠心中にカーリングを防止するために5 mLのピペットの側面にテープで留めています。細胞を1,000 rpmに到達させ、停止されています。
移植：レシピエントマウスは、麻酔剃毛、そしてクリーンアップされます。小切開は、マウスの左脇腹に行われ、腎臓を露出している。腎臓、脂肪、および組織の生理食塩水綿棒と湿った保たれます。 PE50の遠位端は、シリコンのアダプタチューブを使用して、ピペットの先端を含む、ハミルトンねじ駆動の注射器に接続されています。小さな刻み目が大きすぎたり深すぎない、腎臓の右側腹部側で行われます。細胞最寄りのPE50チューブの斜めに終わりが、、慎重にカプセルの下に配置され、チューブは通常の生理食塩水を拭き取りながら、スペースを作るために静かに周りに移動され、乾燥したカプセルが破れやすいこともできます。小さな気泡はゆっくりとシリンジのねじ駆動をダイヤルすることにより、カプセルの下に配信されます。小島は、その後徐々に空気の泡の後ろに配信されます。かつての島が配信されて腎臓の恒常性が維持され、小物を低熱で焼灼されています。腎臓は、空洞に戻されますし、腹膜と皮膚を縫合してステープルされる。マウスはすぐにフルニキシンとブプレノルフィン平方で処理し、加熱パッド上にケージに入れています。
Protocol
Discussion
このプロトコルは、きれいにし、容易に糖尿病や正常マウスの腎臓被膜下に膵島または細胞を提供するための実用的かつ効率的なオプションが用意されています。腎被膜下に細胞を移植するために使用される最終的な配信のチューブ（PE50）に膵島または細胞を集中し、ペレット化の技術は、細胞、またはマウスへの過度のストレスを軽減しながら細胞を移植するのは簡単で効果的な方法を提供しています。
Acknowledgements
UCSFの糖尿病センター。 NIH UCSF DERC膵島コア。 JDRF。 LIfeScan株式会社ジョンソン＆ジョンソン社。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Surgical gloves | Fisher | 11-394-95(sz) | ||
| Surgical scrub sponges | Moore medical | 42940AK | ||
| Forceps | Miltex | 6-114 and 6-26 | 2 with teeth, 2 straight | |
| Dissecting scissors n=2 | Miltex | 5-290 | ||
| Oster razor (sz. 40 blade) | Fisher | 01-305-10B | ||
| 4×4 Sterile gauze pads | Moore Medical | 08252AK | ||
| Povidone Iodine pads | Moore Medical | 08486AK | ||
| Alcohol pads | Fisher | 14-819-2 | ||
| Heating pad | Moore Medical | 42508AK | ||
| 23G or 25G needles | 1″ long | |||
| Cidex solution | Moore Medical | 07535AK | for cleaning/santizing instruments | |
| PE50 polyethylene tubing | BD | 427411 | PE50, 0.965mm O.D. x 0.58mm I.D. | |
| Cidex + 28 day soln | Moore | 35625AK | ||
| Silicone tubing | Spectrum Chromat. | 123732 | 5/32”OD x 1/32” ID | |
| Instrument sterilizing container | Moore Medical | 39074AK | ||
| Straight Pipet Tips | TipOne | 1111-0810 | sterile | |
| Glass syringe w/screw-drive | Hamilton | 1001 | ||
| Cauterizing tool | Roboz | RS230 | ||
| Needle Holder | Moore Medical | 41-067 | ||
| 5-0 silk | Look | 754B | for suture (6-C) | |
| Cotton tipped swab | Moore Medical | |||
| 9mm autoclip stapler | BD | 7630 | ||
| 9mm staples | BD | 7631 | ||
| 9mm staple remover | BD | 7637 |
References
- Tang, Q., Henriksen, K. J., Bi, M., Finger, E. B., Szot, G., Ye, J., Masteller, E. L., McDevitt, H., Bonyhadi, M., Bluestone, J. A. In vitro-expanded antigen-specific regulatory T cells suppress autoimmune diabetes. J Exp Med. 199, 1455-1465 (2004).
- Rulifson, I. C., Szot, G. L., Palmer, E., Bluestone, J. A. Inability to induce tolerance through direct antigen presentation. Am J Transplant. 2, 510-519 (2002).
- Lenschow, D. J., Zeng, Y., Hathcock, K. S., Zuckerman, L. A., Freeman, G., Thistlethwaite, J. R., Gray, G. S., Hodes, R. J., Bluestone, J. A. Inhibition of transplant rejection following treatment with anti-B7-2 and anti-B7-1 antibodies. Transplantation. Transplantation. 60, 1171-1178 (1995).
- Lenschow, D. J., Zeng, Y., Thistlethwaite, J. R., Montag, A., Brady, W., Gibson, M. G., Linsley, P. S., Bluestone, J. A. Long-term survival of xenogeneic pancreatic islet grafts induced by CTLA4lg. Science. 257, 789-792 (1992).
