Diyabetik Fare Böbrek Kapsül içine, Pankreas Islets Nakli
Summary
Protokolü, temiz ve kolay bir adacık veya hücreleri farelerin böbrek kapsülü altında sunmak için geliştirildi. Hücreler, böbrek kapsül altında hücrelerinin nakli için kullanılan son tüp pelet içine yoğunlaşmıştır. Bu tekniğin kolaylığı hücreleri ve fare stresi azaltır.
Abstract
Protokolü, temiz ve kolay bir şekilde diyabetik veya normal farelerin böbrek kapsülü altında adacıklar veya hücreleri sunmak için geliştirildi. Biz böbrek kapsülü altında hücre nakli için kullanılan son teslim boru (PE50) pelet içine adacıklar veya hücrelerin konsantre kolay olduğu bulundu. Bu teknik, hücrelere ya da fare herhangi bir aşırı stres azaltırken hem hız ve kolaylık sağlar.
Yükleme: oturanlar, el adacıklar veya tohum hücreleri dikkatle P200 pipetteman ve düz, ince duvar pipet kullanarak 1,5 mL mikrosantrifüj tüp alt aspire, aldı. PE50 boru uzunluğu, küçük bir silikon adaptörü tüp kullanarak pipet ucu takılır. Hücreler ucu, yerleşmeye ve sonra yavaş yavaş pipetteman arama PE50 boru aktarılır izin verilir. PE50 boru sonuna yakın hücrelerin sonra, bir bükülme yapılır ve silikon adaptör boru kink üzerine yerleştirilir. PE50 tüp 15 ml içeren konik bir kesim 5 ml pipetlemeyin aktarılır ve PE50 tüp santrifüj sırasında kıvrık önlemek için 5 ml pipetlemeyin yan üzerinde bantlanmış. Hücreler 1.000 rpm ulaşmak için izin ve durdu.
Nakli: Alıcı fareler anestezi, traş ve temizlenmelidir. Farenin sol kanadında küçük bir kesi yapılır ve böbrek maruz kalmaktadır. Böbrek, yağ ve doku normal tuzlu çubukla nemli tutulmalıdır. PE50 distal ucu silikon adaptörü boru kullanarak, pipet içeren, Hamilton vidalı tahrik şırınga eklenir. Küçük bir nick çok büyük ne de çok derin değil, böbrek sağ kanadında yan üzerinde yapılır. PE50 boru kesik uç, hücrelerin en yakın dikkatle kapsül altına yerleştirilir, tüp normal salin sürüntü sırasında yer açmak için hafifçe dolaştı; kuru bir kapsülü kolayca yırtılabilir. Kapsül altında küçük bir hava kabarcığı, yavaş yavaş şırınga vida sürücü arama tarafından teslim edilir. Adacıklar sonra yavaş yavaş hava kabarcığı arkasında teslim edilir. Adacıklar teslim edilmiştir böbrek homeostazı korunur ve ıvır düşük ısı ile koterize. Böbrek boşluğuna yerleştirilir ve periton ve cilt sütüre ve zımbalanmış. Fare hemen Flunixin ve Buprenorfin ² ile tedavi edilen ve bir ısıtma yastığı bir kafes yerleştirilir.
Protocol
Discussion
Bu protokol, temiz ve kolay bir şekilde diyabetik veya normal farelerin böbrek kapsülü altında adacıklar veya hücreleri sunmak için pratik ve etkili bir seçenek sunmaktadır. Hücrelere herhangi bir aşırı stres ya da fare azaltırken hücrelerin nakli, böbrek kapsül altında hücre nakli için kullanılan son teslim boru (PE50) adacıklar veya hücreleri zenginleştirme ve peletleme tekniği kolay ve etkili bir yöntem sunmaktadır.
Acknowledgements
UCSF Diyabet Merkezi. NIH UCSF DERC Islet Core. JDRF. LIFESCAN A.Ş. Johnson & Johnson Company.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Surgical gloves | Fisher | 11-394-95(sz) | ||
| Surgical scrub sponges | Moore medical | 42940AK | ||
| Forceps | Miltex | 6-114 and 6-26 | 2 with teeth, 2 straight | |
| Dissecting scissors n=2 | Miltex | 5-290 | ||
| Oster razor (sz. 40 blade) | Fisher | 01-305-10B | ||
| 4×4 Sterile gauze pads | Moore Medical | 08252AK | ||
| Povidone Iodine pads | Moore Medical | 08486AK | ||
| Alcohol pads | Fisher | 14-819-2 | ||
| Heating pad | Moore Medical | 42508AK | ||
| 23G or 25G needles | 1″ long | |||
| Cidex solution | Moore Medical | 07535AK | for cleaning/santizing instruments | |
| PE50 polyethylene tubing | BD | 427411 | PE50, 0.965mm O.D. x 0.58mm I.D. | |
| Cidex + 28 day soln | Moore | 35625AK | ||
| Silicone tubing | Spectrum Chromat. | 123732 | 5/32”OD x 1/32” ID | |
| Instrument sterilizing container | Moore Medical | 39074AK | ||
| Straight Pipet Tips | TipOne | 1111-0810 | sterile | |
| Glass syringe w/screw-drive | Hamilton | 1001 | ||
| Cauterizing tool | Roboz | RS230 | ||
| Needle Holder | Moore Medical | 41-067 | ||
| 5-0 silk | Look | 754B | for suture (6-C) | |
| Cotton tipped swab | Moore Medical | |||
| 9mm autoclip stapler | BD | 7630 | ||
| 9mm staples | BD | 7631 | ||
| 9mm staple remover | BD | 7637 |
References
- Tang, Q., Henriksen, K. J., Bi, M., Finger, E. B., Szot, G., Ye, J., Masteller, E. L., McDevitt, H., Bonyhadi, M., Bluestone, J. A. In vitro-expanded antigen-specific regulatory T cells suppress autoimmune diabetes. J Exp Med. 199, 1455-1465 (2004).
- Rulifson, I. C., Szot, G. L., Palmer, E., Bluestone, J. A. Inability to induce tolerance through direct antigen presentation. Am J Transplant. 2, 510-519 (2002).
- Lenschow, D. J., Zeng, Y., Hathcock, K. S., Zuckerman, L. A., Freeman, G., Thistlethwaite, J. R., Gray, G. S., Hodes, R. J., Bluestone, J. A. Inhibition of transplant rejection following treatment with anti-B7-2 and anti-B7-1 antibodies. Transplantation. Transplantation. 60, 1171-1178 (1995).
- Lenschow, D. J., Zeng, Y., Thistlethwaite, J. R., Montag, A., Brady, W., Gibson, M. G., Linsley, P. S., Bluestone, J. A. Long-term survival of xenogeneic pancreatic islet grafts induced by CTLA4lg. Science. 257, 789-792 (1992).
