Summary
クモの糸の傑出した機械的および生化学的特性にもかかわらず、この材料は、従来の手段によって大量にで収穫されたすることはできません。ここで我々は次世代の生体材料としてクモの糸生産とその使用方法を勉強し調査官するための重要なプロセスである人工的なクモの糸繊維をスピンするための効率的なの戦略を、について説明します。
Abstract
社会が進行するとリソースがscarcerになるにつれ、それは、高性能特性を持つエンジニアの次世代バイオマテリアル、新しい技術を開拓するためにますます重要になっています。これらの新しい構造材料の開発は、コスト効率の高い、迅速で、処理の方法論と環境に優しい持続可能な製品を含んでいる必要があります。スパイダーはライバル最高の人工と天然素材というバイオミミクリーのために次世代のエンジニアリング材料の豊富なソースを提供し、多様な機械的性質の異なる繊維の種類の多数のスピン。天然のクモの糸の大量のコレクションが現実的ではありませんので、合成絹の生産は、スレッドの無制限の供給へのアクセス権を持つ科学者を提供する能力を持っています。紡糸工程の合理化と完成することができますそのため、人工のクモの繊維がボディアーマーに至るまで幅広いアプリケーションに、縫合糸のための潜在的な用途を持っているS、綱及びケーブル、タイヤ、楽器用文字列、および航空宇宙技術の複合体。合成絹の生産工程を進めるために、スピン、スピンからその材料の特性で、低分散を表示する繊維を得るために、我々は、細菌、精製やタンパク質の濃度の組換えクモの糸タンパク質の発現を統合し、湿式紡糸プロトコルを開発しました、繊維の押出及び機械的なポスト·スピン治療が続く。これは、実験室規模での人工絹の繊維をスピンし、分析するステップ·バイ·ステップのプロセスを明らかにする最初の視覚的に表現したものです。また、同じ紡糸をつむいだ糸繊維間のばらつきの発生を最小限に抑えるため、詳細情報を提供します。総称して、これらの方法は、天然のクモの糸を凌駕する高品質の繊維につながって、人工絹の生産のプロセスを推進します。
Introduction
クモの糸が出高張力鋼、ケブラーとナイロンを含むいくつかの人工材料を、実行する特別な機械的特性を持っています。1スパイダーは、多様な機械的特性を表示し、少なくとも6月7日の異なる繊維の種類、引張強さと拡張性の様々な量で設計をそれぞれスピン特定の生物学的なタスクを実行することができます。2研究の科学者が急速にために共食いの3,4。ので、その優れた機械的性質、それらの生体適合性、およびそれらの非毒性と緑の材料の性質の次世代バイオマテリアルとしてのクモの糸を使用して追求され、農業を通してクモの糸を収穫クモの毒の性質は、工業規模の製造のために必要な需要を満たすための実践的な戦略ではありません。したがって、科学者たちは、から合成繊維の紡糸をin vitroで組み合わせるトランスジェニック生物における組換え絹タンパク質の生産になっているSE精製したタンパク質。フルレングスの組換えクモの糸タンパク質の5-8表現が彼らの非常に反復的な性質と物理的な長さ（> 15キロバイト）、GC-リッチコンテンツとバイアスを含むそれらの遺伝子配列の固有の性質与えられた技術的に困難であったアラニンとグリシンのコドン使用。現在までに9-11、ほとんどのラボは、部分的なcDNA配列または合成遺伝子を用いて主要なampullate糸タンパク質MaSp1またはMaSp2の切り捨てられた形を表現に焦点を当てている。12月15日スピニング合成クモの絹が必要とする困難なプロセスです。いくつかの科学分野、および紡糸プロセスの複雑さの習得と知識が完全に映像表現で一般大衆に明らかにされていない。実際には、世界中のラボのほんの一握りでは、クモの糸のcDNAを発現する絹タンパク質を精製、合成繊維を回転させ、ポストスピンドローを実行するための専門知識を持っているし、最後にそれらの生体材料の特性をテストします。 図8に示すように、紡績の合成繊維の16,17異なるアプローチは、湿式と乾式紡糸などエレクトロの方法を包含している16,18,19すべての手順は、一般的な1つの目標がある-機械的性質と合成クモの糸を生成するプロトコルの開発をそのライバル、自然のスレッド大規模な商業的な製造プロセスのために。
ここでは、湿式紡糸方法を用いて実験室規模で人工的なクモの糸を生成する手順を説明します。他の紡績方法と比較して、湿式紡糸は、繊維分析のための最も一貫した結果を生み出しています。私たちは彼らの精製に続いて細菌における組換え絹タンパク質の発現と、この手順の開始を概説し、その後でスレッドを生成する "などの紡糸"繊維に適用後のスピンドローの方法論を含めて、紡績のためのタンパク質の準備手順について説明します。天然のクモの糸の品質に近づく材料特性。私たちのmethodologyは密接に絹繊維の自然な紡糸プロセスを模倣し、それがオーブとCOB-織りスパイダーから絹生産腺のアーキテクチャおよび機能の専門知識に大きく描画するよう設計されています20から22はまた、我々が必要と結論研究者は究極の強さ、究極の歪み、繊維の靭性を計算できるように応力 - ひずみ曲線をプロットする張力計を用いた合成繊維の材料特性を決定するための手順を実行します。最後に、しかし重要な価値が、紡績スプール、および描画装置は、かなり手の込んだ、高価なカスタマイズされた機器を購入するより、市販の部品を使用して、自宅に構築することができます。
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Protocol
グラフィカル概要：紡糸プロセスのバイオミミクリー
天然のクモの糸の生産経路のバイオミミクリー：合成絹を製造するためのルートは、このイメージは、金色のオーブウィーバー、 ジョロウグモclavipes、天然シルク生産（白のテキスト）のために利用コンポーネントから主要なampullate腺を示しています。テール領域は膨大部、紡糸用の記憶領域に輸送される絹タンパク質の大量合成することができます。この濃縮されたドープは、溶液は、従来の繊維押し出しへのイオン交換および脱水が発生した回転ダクトを通して押し出される。我々の研究室で使用されているバイオミメティックプロセスは赤色のテキストで示されています。組換えシルクの生産はクロマトグラフィーを用いてタンパク質精製に続いてトランスジェニック細菌を使用して生成されます。次に、精製されたタンパク質は、サブです材料を濃縮する凍結乾燥ジェクト。最後に、タンパク質は、HFIPに再溶解し、イソプロパノール浴に注射針から押し出されています。
1。プラスミドの構築と、細菌の細胞培養の準備
- 希望するクモの糸cDNAと特異的プライマーセットを用いてPCRを実行します。原核生物の発現ベクターなどのpBAD / TOPO ThioFusion（ 図1A）に増幅したcDNAをゲル抽出し、ライゲーション。このベクターは、絹タンパク質の可溶化とタンパク質精製のための彼のタグ、C末端6Xを容易にするために、N末端チオレドキシンタグがあります。コンピテントE.にライゲーション産物を形質転換大腸菌細胞。
- 組換えクローニングベクターを含み、アンピシリン（ 図1B）を添加した滅菌LB 200 mLを接種する1つのコロニーを使用してコロニーを選択します。 37℃インキュベーターで200 rpmで振盪することによって飽和状態に一晩この文化を育てる℃に
- saturat 200mLを組み合わせる新鮮なLB培地800mlでEDの文化。 0.2％アラビノース（W / V）を追加することによって、4時間クモの糸タンパク質の発現を誘導する。抗生物質選択の下に文化を維持することを確認してください。
- ペレット4℃、10分間16,000 xgで細胞°C（ 図1C）。簡単にするために、ペレット1コンテナ内のボリューム全体。複数の遠心ステップは、遠心チューブのボリュームの容量に応じて必要となる場合があります。紡糸後の液量とペレットを1つのコンテナにあるすべてのセルを確実にするために再ペレット追加の材料をデカントし、必要に応じて。必要になるまで細胞ペレットを-80℃で保存することができます。
- 費やした培地を配置する前に、滅菌する漂白剤やオートクレーブを追加します。
2。細胞溶解
- 1 L細胞ペレット（ 図2A）に1×溶解緩衝液20mLを追加します。完全に細胞ペレットを再懸濁することを確認します。
- さらに促進するために1 mg / mLの濃度にリゾチームを追加します。細胞溶解。 DNase処理は、溶液の粘度を軽減するために染色体DNAを消化するために、このステップで追加することができます。オービタルシェーカー上でサンプルを置き、穏やかに20分間ロック。
- 1分間の最大の溶液を超音波処理してください。
- ソリューションは、4°C（ 図2B）で10分間16,000 xgで遠心分離を明確にする。
3。タンパク質の精製：Ni-NTAアフィニティーカラムクロマトグラフィー
- 上清を除去してクリーンな25mLのクロマトグラフィーカラムにそれを転送します。上清は、非粘性、明確であることを確認します。ソリューションは、粘性と曇っている場合は、より多くのDNase処理または超音波処理および/または再ペレット上清（繰り返しステップ2.3から2.4）を追加します。
- 列へのNi-NTAスラリー（0.5 mLのビーズ）1 mLを加える。しっかりとキャップとコックを確保し、のNi-NTAビーズ（ 図3A）に6X Hisタグの結合を許可する1時間平衡化するためのロッカーに設定された。
- に直立カラムを設定スタンドとNi-NTAビーズが約2分のために解決することができます。ビーズが完全に決済されるときに水色の層は下部で見ることができます。
- キャップを外し、溶液が栓を介して流れるようになります。さらに分析する（ 図3B）この溶液を収集します。
- 1X洗浄バッファー20mLを追加し、ビーズが沈殿することができます。コックを開き、ソリューションが流れることができます。さらなる分析のための4つの5mLのアリコートで、このソリューションを収集する注：追加の洗浄ボリュームが夾雑タンパク質を低減するために使用することができますが、最終的なタンパク質収量の減少の可能性があります。
- 1xの溶出緩衝液20mLを追加し、樹脂が沈殿することができます。コックを開き、ソリューションが流れることができます。さらなる分析のための4つの5mLのアリコートで、このソリューションを収集する注：溶出が完了していない場合は、追加の溶出量は、Ni-NTA樹脂から収集することができます。
- サンプルは4に格納される°Cまたは-80°Cの短期または長期記憶は、それぞれのために。
- サイズ分画をSDS-PAGE分析を用いたサンプル。銀又はクマシーブリリアントブルーR-250（ 図3C）を有するタンパク質を可視化することができます。唯一の純粋な画分は、次の手順に使用されるべき注：ウェスタンブロット分析は、精製タンパク質の身元を確認するために使用することができます。
4。透析および凍結乾燥
- 2日間に少なくとも100倍のサンプル量（脱イオン水を使用して）に対してサンプルを透析。すべての塩を除去するために水溶液を6時間ごとに変更注：分子量の大きさのカットオフ透析チューブの組換え絹タンパク質のサイズによって異なります。
- 6 1.5 mLの空のマイクロチューブを秤量し、その質量を記録します。それは前の（ 図4A）凍結乾燥を容易にするために、凍結乾燥のための計量にチューブのキャップに穴をあけ、小さな穴やスリットの役に立つかもしれません。
- AFTER透析、6事前に秤量したマイクロフュージチューブ（ 図4B）の各への透析したサンプルの転送1 mLの。 Flashは、液体窒素を使用してフリーズと凍結乾燥機（ 図4C）を使用してダウンのサンプルを乾燥させてください。
- 一度乾燥した、6本のチューブの各々に透析サンプルの別の1 mLのを転送します。全体の透析サンプルがマイクロフュージチューブ内でダウンして乾燥させされていますまで、この操作を繰り返します。
- フリーズ乾燥させたサンプルは、-80℃長期ストレージ用のCに格納されているすることができます。
5。紡績ドープの準備
- 乾燥させた蛋白質粉末を含むマイクロフュージチューブの各々を重量を量る。合計乾燥した蛋白質の質量を取得するために空のチューブの初期質量を減算しますに注意してください：。タンパク質収量に応じて、あなたは、紡績プロセスのために追加の材料を精製するために必要があるかもしれません。
- 200 mgを/ mLの〜500 mg / mLの、または20％〜50％の体積あたりの重量を取得するために各チューブに追加するには、ヘキサフルオロイソプロパノール（HFIP）のボリュームを計算します。 appropriを追加します。各チューブ（ 図4D）にHFIPの量を食べました注：HFIPは慎重に、ピペットの高い揮発性と毒性があり、できるだけ早くチューブをキャップ。 HFIPは、安全フードの下に処理する必要があります 。
- タンパク質を可溶化するためのロッカー上にパラフィルムチューブと場所。渦と可溶化を促進するために時折遠心します。これは、2日以内にかかる場合があります。
6。注射器の準備と装置のセットアップ
- シリンジに可溶化した紡糸の少なくとも25μLをロードします。それは注射器を詰まらせる可能性があるので、集計が存在しません（注）があることを確認してください。ピペッティング時にこのサンプルは非常に粘性があるので、注意してください。
- すべての気泡を（ 図5A）を除去する、垂直に注射器の前面にドープを押してください注：気泡が繊維に不整合が生じます。
- ポンプにシリンジをロックします。 95パーセントのイソプロパノールアップで満たされた400 mLのビーカーを上げるので、シリンジの先端ただアルコールの表面（ 図5B）を破壊されています。
- 15μL/ minにシリンジポンプを設定し、プログラムを起動します。完全に平衡化するために20分間イソプロパノールに座るように紡糸繊維を許可します注：これらの繊維は依然として繊維中のタンパク質の身元を確認するためにMS / MS分析で使用することができます。
7。ポストスピンドローとサンプルコレクション
- スプーリングデバイスの櫛の両側に両面テープを適用します。スプーリングデバイスは、接着金属の櫛からデジタルキャリパー（ 図6A）に作成されました。 （ 図6B）モータへのスプーリングデバイスを接続します。私たちは2回転でのスレッドのスプールをお勧めします注：繊維質と再現性の変動を大量に速くスプール率の結果。
- 鉗子を使用すると、優しく光ファイバの一方の端をつかんで、ゆっくりとイソプロパノールから引き出し、スプール上に櫛の腕のいずれかの端にそれを取り付ける（図。 6C）。次のいくつかの手順は、乾燥から繊維を防ぐために停止せずに実行する必要があります。
- モーターの電源をオンにし、穏やかにスプールデバイスに光ファイバをガイド注：スプール中に、繊維はダブルアップと互いの上にスタックすることはできません。
- 全体の繊維がスプールされると、モーターからスプールを切り離し、両面テープ上の各絹繊維の端（ 図6D）に接着剤を適用します。これは装置の上にクモの糸を固定している。 注：前のポストスピン図面に両面テープを接着剤を適用することによって、それが滑りから全体の繊維を防止し、キャリパー内の繊維の内部セグメントのストレッチ選択することができ武器。
- リニアアクチュエータ（ 図7A）にスプールを取り付けます。キャリパーを使用して繊維の長さの初期値を記録し、これが繊維の内部の長さであることに注意してください 。 それは接着長さが含まれており、ARラップはありませんスプールをound。
- 75パーセントイソプロパノール浴中にスプールを下げます。繊維は10分間平衡化することができます注：その他の脱水のソリューションは、例えば、メタノール、アセトン、硫酸アンモニウムのように、紡糸工程に使用することができます。
- 1.5ミリメートル/秒にリニアアクチュエータの速度を設定します。初期の長さに基づいて、希望するポストスピンドロー比の最終的な長さを計算します。伸び量は、セットアップに応じて、速度や長さに基づいて制御することができます。たとえば、15 mmと3倍の希望するポストスピンドロー比の初期長さで、最後の長さが45ミリメートルでなければなりません。これは、1.5ミリメートル/秒の速度で20秒間リニアアクチュエータに電力を供給するように計算することができます。
- 希望するポストスピンドローが完了したら、ゆっくりとイソプロパノールのスプールを上げる。イソプロパノールの液滴が1分間乾燥し、試料（ 図7B）を収集することができます。サンプルはPURをテストするために厚紙や箔フレームにマウントする必要がありますポーズ。
- さらにポストスピンドロー比が必要な場合は、75％イソプロパノール浴中にスプールバックを下げます。繊維は10分間平衡化させ、そして次のポストスピン延伸比に進みます。
8。引張試験
- 採取した試料は、機械的なテストの前に少なくとも1時間の標準的なラボ環境に平衡化することができます。彼らは繊維の機械的特性に影響を及ぼす可能性があるので湿度と温度を記録する必要があります。標準的な湿度と温度条件は、それぞれ約40％、25°Cなければなりません。
- 接着剤は、厚紙や箔の端がフレームの上に繊維を固定します。フレームの開口部の大きさに注意してください。これは、テスト繊維の初期状態の長さです。 1インチ（25.4 mm）開口部のフレームが（ 図8A）ここに示されています。
- 100倍以上の倍率の光学顕微鏡を使用して、長手方向の繊維軸に沿って径の測定を行う。少なくとも3つの測定値が記録されなければならない。高倍率では、使用され、より多くの測定には、優れた精度を撮影。
- 張力計の機械的負荷フレーム（ 図8B）にフレームを固定します。テンションだけで繊維を介して実行されるように、両側のフレームをカットします。タレは張力計とデータを収集します。毎秒2％の標準的なひずみ速度が推奨されます。
- 収集したデータと平均粒径を使用して、応力ひずみ曲線をプロットすることができます。
- 壊れた繊維は、現在の形態学的分析とブレークポイントの直径測定用走査型電子顕微鏡（SEM）スタブにマウントすることができます。離れてブレークポイントからの繊維セグメントは、光学顕微鏡によって測定された初期直径を推定し、チェックするために使用することができます。
9。代表的な結果
手順3から、別の画分をSDS-PAGE分析により分析されるべきであり、タンパク質は銀で可視化またはクマシーブリリアントブルーR-250。標準的なNi-NTAカラム条件から、> 90％純度で溶出画分を得ることができた（ 図9）。小さな夾雑タンパク質は、さらに大規模な透析によって除去することができます。 20％（w / v）でドープを紡糸の25μLを使用して、少なくとも30独立した繊維のサンプルは、スプール（初期13ミリメートルの長さが使用されているものと想定しています）上に連続的な傷の繊維から収集することができます。機械的性質は、張力計のテスト（ 図10）によって分析することができます。紡糸工程に使用される組換え絹タンパク質に応じて、最大のポストスピンドロー比は経験的に決定する必要があります。一般に、スピンが4.0倍の比を描くポストファイバの障害（ 図10）を使用せずに達成することができます。紡糸繊維は、ポストスピンドローの前または後に、超微細構造（ 図11A、B）を可視化する走査型電子顕微鏡で分析することができます。紡糸繊維はまた、結果が表示され、機械的なテストのために使用することができますそのポストスピン延伸比のサンプル·グループ内のローの変動（ 図10）。
図1：細菌のcDNAクモの糸の発現。 A）目的のcDNAクモの糸を含んでいるのpBAD TOPO /チオベクトルは、コンピテントE.に変換されます大腸菌細胞。 B）シングルコロニーをLB 200 mLに接種し、一晩飽和状態に栽培されています。接種後、新鮮なLB 800 mLを添加して培養は、アラビノースを用いた発現のために誘導される。 C）誘導の結論では、文化は、遠心分離によりペレット化する。 拡大図を表示するには、ここをクリックしてください 。
図2：クモの糸タンパク質の誘導後、細菌細胞の溶解。 A）二十millili1×溶解緩衝液およびDNaseのTERSは細胞ペレットに添加し、オービタルシェーカー上に配置され、細胞を溶解するために超音波処理されています。 B）細胞ライセートは細胞残渣の上清をクリアするために遠心機でスピンされ、上清を回収しています。 拡大図を表示するには、ここをクリックしてください 。
図3：アフィニティークロマトグラフィーを使用して、クモの糸の組換えタンパク質の精製。 A）細胞ライセート上清をNi-NTAビーズをクロマトグラフィーカラムに添加し、1時間インキュベートされています。フロースルーを収集された後にB）、洗浄バッファー、溶出バッファーを20 mLの20 mLのは、シーケンスで使用され、5 mLの画分に収集されます。 C）の異なる画分をSDS-PAGEで分析され、標的タンパク質を含む純粋なサンプルは、透析バッグに移し、純水に対して透析されている完成は拡大図を見るにはここをクリック 。
図4湿式紡糸用精製されたクモ糸タンパク質の調製。 A）透析製品は、1mLのアリコートで事前に計量遠心チューブに移しています。 B）を1mLのアリコートを液体窒素で凍結が点滅しています。 C）凍結試料を凍結乾燥され、より多くの透析サンプルが追加されます。 D）乾燥質量が計算され、HFIPは20％（w / v）の紡糸ドープを生成するために乾燥粉末に追加されます。 拡大図を表示するには、ここをクリックしてください 。
図5の湿式紡糸用ガラスシリンジに紡糸の読み込み。 A）syrinを押しながらGE垂直に、紡糸は、気泡を除去し、シリンジの列の一番上にプッシュされます。 B）ロードされたシリンジをシリンジポンプに取り付けられ、先端がちょうどお風呂の表面を破壊されるように、95パーセントのイソプロパノール浴中に低下します。
図6カスタム製糸デバイスに合成クモの糸繊維のスプール。 A）スプールデバイスが接続された金属の櫛を持つデジタルキャリパーから構成されています。両面テープは、ファイバ端を添付する櫛の両側に適用されます。 B）スプールは、ワニ口クリップを使用した低速モーターに接続されています。 C）繊維が徐々にアルコール浴から取り出し、スプールに巻かれています。 D）接着剤はその場でそれらを保持するために、各ファイバーセグメントのエッジに適用されます。示されるような別のタンパク質から紡がつの異なる繊維である。
図7。自家製の装置を用いた合成繊維のポストスピンドロー。 A）スプーリングデバイスは、ワニ口クリップを使用したリニアアクチュエータのセットアップに接続されています。 B）後のスピンのドロー·ステップの後、スプールは浴から解除されます。イソプロパノール液滴が繊維のコレクションの前に蒸発させるために許可されています。
図8は、機械的研究のために厚紙の上に合成絹繊維の取り付け。 A）収集された繊維は、1 "×1"切り欠きと厚紙フレームにマウントされています。繊維は、最初に両面テープで固定し、接着剤で固定されています。 B）厚紙フレームは張力計の上に固定されています。テンションだけで繊維かかわらず実行されているので、双方は、その後切断されています。
図9。サイズ組換えMaSp1 proteiの精製分別銀染色で可視化に続いてSDS-PAGE分析を用いてn個の分画。タンパク質ラダーは分子量に描かれています。溶出サンプルは総タンパク質の回収率を確保するため、6コレクションの必要性を明らかにするときに2つの洗浄のサンプルは、ビーズへの非特異的結合を示しています。
図10組換えTuSp1タンパク質から紡糸繊維の応力ひずみ曲線は8色が2.5倍から6倍に至るまで、さまざまなポストスピンドロー比の対象となった繊維を示す。繊維は、それらの比グループ内のローの変動を示し、拡張性が減少している間にポストスピンドロー比が増加するにつれて、繊維の強度が増加します。
図11は、組換えタンパク質TuSp1から紡糸繊維の電子顕微鏡画像をスキャン。 500倍の倍率で）、滑らかな外部表面を見ることができます。 B）5000Xでは、緻密な内部コアは、繊維の自然の休憩から観察することができます。
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Discussion
この方法論をつむいだ糸合成繊維は天然繊維に比べて機械的に同じ大きさのオーダーである。スプーリングとポストスピンドロープロセスを機械化によるヒューマンエラーの量を減少させることによって、サンプル間の実験的な変動は、より制御されており、大幅に減少しました。
私たちの方法論は、クモの遺伝子ファミリーの他のメンバーのcDNAからエンコードされた組換えタンパク質から紡糸された他の繊維の機械的性質を調査する可能性を提供しています。潜在的に、それはフィブロイン内、または異なるフィブロインタイプ間の異なったタンパク質モジュールの機械的な役割を決定することができる23以上の絹タンパク質または他の分子を結合または追加することができますようにまた、複合材料としてのシルク繊維のテストが可能とタンパク質の混合物として分社。
この紡績方法論は、APPAのように、簡単に上に展開する他の研究室のためのプラットフォームです。ratusesは、安易な方法で構築することができます。これはまた、ユニークな機械的性質を持つ特定の繊維の設計を最適化またはカスタマイズするために、各ステップに沿ってパラメータを調整することができます。将来の増加のために緑の生体材料の必要性として、この方法論は、次世代アプリケーションのホストを提供する繊維を生産するために適応させることができます。
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Disclosures
利害の衝突が宣言されません。
Acknowledgments
この作品は、それぞれ "ブラックウィドウスパイダーシルクとスパイダー接着剤シルクの力学的挙動の分子特性"と題されたNSF RUI助成MCB-0950372およびDMR-1105310によってサポートされていました。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| pBAD/TOPO ThioFusion Expression Kit | Invitrogen | K370-01 | |
| FastBreak Cell Lysis Reagent, 10x | Promega | V857C | |
| Ni-NTA Agarose | Qiagen | 30210 | Includes instructions for buffers |
| ProteoSilver Silver Stain Kit | Sigma-Aldrich | PROTSIL1-1KT | |
| FreeZone Lyophilizer | Labconco | 7960041 | FreeZone 12Plus |
| Hexafluoroisopropanol (HFIP) | Sigma-Aldrich | 52512 | |
| Syringe | Hamilton | 7657-01 | 250 μL |
| Needle | Hamilton | 7780-01 | 26s Gauge, Blunt end removable needle |
| Syringe Pump | Harvard Apparatus | 702208 | 11Plus |
| Digital Caliper | Carrera | CP5906 | 0-150 mm range |
| Stainless steel forceps | World Precision Instruments | 501764 | Mini Dumont #M5S |
| Motor | Nature Mill | 7090529 | 12VDC, 2 rpm speed |
| Linear Actuator | Warner Electric | 01-D024-0050-A06-LP-IP65 | 24VDC, 6 inch range |
| Dissecting microscope | Leica Microsystems | Leica MZ16 | |
| Digital microscope camera | Leica Microsystems | DFC320 | Software: Leica Application Suite v2.8.1 |
| Vannas scissors | World Precision Instruments | 500260 | |
| Microtensometer | Aurora Scientific | 310C | 5N Dual-Mode System |
References
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