Summary
我们描述了准备的胶体量子点与最小化的流体力学尺寸为单分子荧光成像。相比传统的量子点，这些纳米颗粒的尺寸类似于球状蛋白质单分子反对光降解，亮度，稳定性和耐非特异性结合的蛋白质和细胞进行了优化。
Abstract
单分子成像是一个重要的工具，对于理解生物分子功能的机制和可视化的空间和时间异质性的分子行为的基础细胞生物学1-4。要图像的个别分子的利益，它是典型的共轭到一个荧光标记（染料，蛋白质，小珠，或量子点），并与落射荧光或总内部反射荧光显微镜（TIRF）观察。它们的荧光染料和荧光蛋白质已被几十年来的荧光成像的主体，是不稳定的必要观察单个分子的高光子通量下，得到信号完全丧失之前只需要几秒钟的观察。乳胶珠和染料标记的珠提供改进的信号的稳定性，但在急剧放大的流体动力学尺寸，它可以有害地改变所研究的分子的扩散和行为的牺牲。
ntent“量子点（量子点）之间的平衡这两个问题的制度。这些纳米粒子组成的半导体材料，可以设计一个水动力紧凑的尺寸，优异的抗光降解5。因此，近年来，量子点已经在使长期观察单分子水平上的复杂大分子的行为。然而，这些粒子仍然表现出受损的扩散分子在拥挤的环境中，如细 胞的细胞质和神经元突触间隙，它们的尺寸仍然过大，4,6 ，7。最近，我们已设计的流体动力学尺寸最小化的量子点的芯和表面涂层，而平衡的偏移量的胶体稳定性，耐光性，亮度，和在过去8,9阻碍紧凑量子点的实用程序的非特异性结合。这篇文章的目的是展示这些优化的纳米晶的合成，修饰和表征，由汞的合金X CD-X SE核心涂有绝缘CDŸ锌1-Y的外壳，再涂上一多与短聚乙二醇修饰的高分子配体（ PEG）链（ 图1）。与传统的CdSe纳米晶体相比，汞X CD 1-X SE合金提供了更大的荧光量子产率，在增强的信号噪声在细胞中，和在非细胞毒性的可见光波长的激发的红光和近红外波长的荧光。多齿聚合物涂层的纳米晶体的表面，在一个封闭的和平面的构象结合的流体动力学尺寸最小化，并，PEG中和表面电荷，以尽量减少非特异性结合的细胞和生物分子。最终的结果是一个明亮的荧光纳米晶与排放之间550-800 nm和总的水动力大小近12处。这是在sAME许多可溶性的球形细胞中的蛋白质，远小于传统的聚乙二醇化量子点（25-35纳米）的尺寸范围。
Protocol
以下的合成程序涉及标准的无空气的技术和使用的真空/惰性气体歧管;参考文献10和11中可以找到详细的方法。所有潜在的有毒和易燃物质的MSDS应咨询在使用之前，所有的易燃和/或空气不稳定的化合物应分装到隔垫密封的小瓶，在手套箱中或手套袋。
1。合成的汞硒化镉量子点（汞X CD-X SE）核心
- 准备辛基膦（TOP）为0.4的溶液中的硒。硒（0.316克，4毫摩尔）加入到一个50毫升三颈烧瓶中，然后进行抽真空和填写使用的Schlenk线用氩气。在无空气的条件下（干燥的氮气或氩气气氛下），加入10 ml的TOP和热至100°C，同时搅拌1小时，得到一种清澈，无色的溶液。溶液冷却至室温，并设置将烧瓶放在一边。
- 在一个250毫升的三颈烧瓶中，添加氧化镉（CdO的0.0770克，0.6毫摩尔），tetradecylphosphonic磺酸（TDPA0.3674克，1.32毫摩尔），和十八碳烯（ODE，27.6毫升），并撤离溶液，搅拌的同时使用的Schlenk线。的温度上升至100℃，另外的15分钟，以除去低沸点杂质和疏散。
- 在氩气或氮气下，将混合物加热到300℃1小时，充分溶解的CdO的。该解决方案将一个红色的颜色为无色透明。溶液冷却至室温。
- 十六烷基（HDA，7.0克）的镉溶液，加热至70°C，并撤离。一旦达到一个恒定的压力，提高温度至100-110℃，回流该溶液30分钟。将舒伦克线阀切换到惰性气体和热电偶直接插入到溶液中。
- 在无空气的条件下，添加二苯基膦（DPP，100微升）到该溶液的温度上升至310℃。取出7.5毫升0.4 M TOP-SE解决方案（3毫摩尔硒）在连接到一个16号针头的一次性使用的塑料注射器。
- 一旦温度平衡在310℃，温度控制器设置为0℃，迅速注入的TOP硒溶液直接进入镉溶液。该解决方案将改变从无色到黄色，橙色和温度会迅速下降，再次增加〜280°C。反应1分钟后，从加热套中取出烧瓶中，并迅速冷却空气流中，直到温度小于200℃。
- 当温度达到〜40℃，用30毫升己烷稀释;大部分剩余的镉前体的溶液将沉淀出来。移除该沉淀物，通过离心分离（5,000 xg离心10分钟）。
- 六个50ml聚丙烯离心管中，在每个稀释的粗的纳米晶体溶液12毫升，用40毫升丙酮，离心（5,000×g离心10分钟），并仔细滗析并丢弃上清液。
- 溶解nanocr石英晶体粒料的己烷溶液（25毫升的总体积）。提取此溶液3次，用等体积的甲醇中，保持最佳的相位。对于第三次抽提，甲醇的体积可以被调整，以〜15毫升纯CdSe量子点，获得浓缩的己烷溶液，在大约200μM。该反应的典型产率是3μmol的CdSe纳米晶体的直径为2.3纳米（50〜60％的反应收率）。
- 确定的纳米晶体的直径和浓 度通过测量的UV-Vis吸收光谱和咨询的马瓦尼和同事12和消光的Bawendi和同事13的相关性的大小配合图表。有关详细信息，请参阅附录。
- 汞阳离子交换部分交换的纳米晶体可以与汞的吸收和荧光发射红移。以下混合在一起，以便在与搅拌棒的20毫升玻璃小瓶中（该反应可根据需要缩放）：3毫升己烷，2毫升氯仿，1毫升200μM镉硒QD溶液（为200 nmol），15微升的油胺（OLA），汞（OT）2在氯仿中的0.1M溶液和500μl。可以准备，水星octanethioate（HgOT 2）反应在甲醇醋酸汞和辛硫醇（见附录）。作为阳离子交换反应的进行，红移的程度可能会被监控采用UV-Vis吸收分光光度测定法。后已经达到所需的吸收带，测量在350 nm处的吸收的纳米晶体溶液，并确定新的消光系数，假设的纳米晶体的浓度并没有改变（30.7μM在这个例子中）。淬灭反应，通过除去未反应的汞：添加癸烷，5毫升10毫升己烷，和7毫升甲醇中，并提取该溶液中，保持最佳的相，含有纳米晶体。提取两次以上，用己烷和甲醇中，并调整体积的甲醇中，使最高相〜7毫升。如果相位是缓慢分离，可将溶液离心（5,000 xg离心，10分钟）。添加100μl的顶部，100微升OLA，和100μl油酸其次是40毫升丙酮以生成沉淀的纳米晶体。通过离心收集的纳米晶体，并分散在3 mL正己烷。再次离心除去不溶物，并再次确定的纳米晶体的浓度，使用新的在350nm处的消光系数。允许年龄的纳米晶体溶液在室温下至少24小时，然后进行到下一步骤。
2。锌镉硫化物增长（CDŸ锌1-Y S）壳牌
- 准备0.1M的壳前体溶液，在50毫升的三颈烧瓶中。镉的前体：醋酸镉水合物（230.5毫克，1毫摩尔）和10毫升油胺（OLA）。锌前驱物：醋酸锌（183.5毫克，1毫摩尔）和10毫升OLA。硫前体：硫（32.1毫克，1毫摩尔）和10毫升ODE。真空条件下，加热回流1小时，每个解决方案得到明确的解决方案，然后充以氩气。硫的解决方案可能待冷却至室温，但镉和锌的前体保持在约50℃下壳前体的数量的计算，可以在参考文献14中找到。
- 3颈烧瓶中加入：汞柱X CD 1-x Se的量子点（120 nmol，直径为2.3纳米），ODE（2毫升），及三辛基氧化膦（TOPO中，250毫克）。疏散己烷在室温下使用的Schlenk线。的温度上升到100℃，回流15分钟。更改的Schlenk线阀的氩气或氮气和插入热电偶的纳米晶体溶液中。
- 的温度上升至120℃，加入0.5单层硫前体溶液（140微升），并让反应继续进行15分钟。小等分试样（<50微升），可以使用的玻璃注射器除去监视使用荧光和/或UV-Vis吸收分光光度法测定的反应的进展。的温度上升至140℃，添加0.5镉单层的前体溶液（140微升），然后使反应继续进行15分钟。加入500μl无水OLA向反应溶液。
- 在160℃下添加0.5单层硫前体溶液（220微升），接着由同等数量的锌前体溶液在170℃下用15分钟每次加入之间。然后在180℃下添加0.25单层硫前体溶液（150微升）和锌的前体溶液，在15分钟的间隔。
- 溶液冷却至室温，并再次计算出一个新的消光系数为这些颗粒使用的UV-Vis光谱，假设不改变纳米晶体的数目（120 nmol在3.8毫升的反应溶液）。粗混合物的反应溶液作为存放在冷冻柜;纳米晶体可以解冻，并根据需要使用的第1.8节和1.9节中描述的方法相同的方法纯化。
- 的纳米晶体的特征可使用电子显微镜，UV-Vis吸收光谱和荧光光谱。量子产率可计算绝对使用积分球或相对比较，使用参考文献15的方法，公知的标准。
3。相转移
- 加入纯化的芯/壳汞X CD 1-X SE /镉Ŷ锌1-Y S量子点（5毫升，20μM），一个50毫升三颈烧瓶中，并在高真空下，以得到干燥的膜中除去己烷。填充用氩气的烧瓶中，加入无水吡啶（3ml）中的纳米颗粒薄膜和热的淤浆至80℃。超过1-2小时的过程中，纳米粒子将完全溶解。
- 1 - 硫代甘油（1毫升）加入到该溶液中，并在80℃下搅拌2小时。然后冷却溶液至室温，并添加三乙胺（0.5毫升）中去质子化硫甘油。搅拌30分钟。该解决方案可能会变得混浊，加入三乙胺后由于极性纳米晶体在该溶剂混合物中的溶解性差。
- 的QD的溶液转移到50毫升锥形离心管续癌宁20毫升己烷和20ml丙酮的混合物，搅拌均匀。通过离心（5,000×g离心10分钟），分离析出的纳米晶体，并用丙酮洗涤沉淀。
- 溶解在DMSO（5ml）中的QD颗粒与浴中超声处理，然后离心（7,000 xg离心，10分钟），以除去可能的聚集体。确定的纳米粒子的浓度，从UV-Vis吸收光谱。应当使用这种纯量子点的溶液在3小时之内，作为表面硫醇可以慢慢地在环境条件下在空气中氧化。
- 稀释至10μM或更少用DMSO的QD的溶液，并转移到50毫升的烧瓶中。准备5毫克/毫升的溶液（在附录中的所述合成）在DMSO中的巯基化的聚丙烯酸。添加的聚合物溶液（0.15毫克每nmol量子点的聚合物）滴加到QD的溶液中，同时搅拌和脱气的溶液，在室温下5分钟。
- 吹扫QD /聚合物溶液用氩气并加热到80℃下进行90分钟。然后冷却至室温的溶液ð逐滴加入等体积的50mM硼酸钠，pH值为8。搅拌10分钟。
- 净化量子点通过透析（20 kDa的截止频率）在50mM硼酸钠，pH 8，然后使用离心过滤器（10 kDa的截止频率）的粒子集中。从UV-Vis吸收光谱确定的浓度。
4。聚乙二醇涂层
- 在一个4毫升玻璃小瓶中，用搅拌棒，1纳摩尔量子点在硼酸盐缓冲液混合，用40,000×750沓单氨基-聚乙二醇（30毫克，40微摩尔）的摩尔过量的。如果一个特定的化学功能是要添加到的纳米晶体（ 例如，酰肼或马来酰亚胺），它可引入的取代的氨基-PEG与异型双氨 基-PEG（30％摩尔分数通常运作良好）的一小部分。的纳米晶体溶液稀释至1μM用硼酸盐缓冲液。该反应可以根据需要进行缩放。
- 准备一个新鲜DMTMM（20毫克，72微摩尔）在DMSO（144微升）溶液中。该解决方案可以简单地加热ü各州温暖的自来水或淹没在洗澡超声波仪，充分溶解DMTMM的流。快速添加25,000×摩尔过量的产品0.5M的DMTMM溶液（50微升）到QD的溶液中，并在室温下搅拌30分钟。
- 重复步骤4.2四次PEG纳米晶体表面饱和。最后，加入200μl1 M Tris缓冲液，淬灭反应，并使用透析，离心过滤器，或超速离心纯化的纳米晶体。
- 可分析的单分散性，水动力的大小，和表面电荷，使用液相色谱法，琼脂糖凝胶电泳，和荧光显微镜的纳米晶体。为了确定使用一个自动化的液相色谱系统（GE AKTAprime Plus）的流体动力学尺寸和粒度分布，使用的Superose 6柱，用PBS缓冲液洗脱剂，流速为0.5毫升/分钟，并在260或280 nm处的吸收检测。比较纳米粒子洗脱时间与分子量标准。琼脂糖凝胶电泳电阻，制备0.5％的琼脂糖凝胶在50mM硼酸钠缓冲液（pH8.5）或50mM磷酸钠缓冲液（pH7.4），10％甘油和加载到井1μM的样品混合，并运行在100 V 30分钟。图片中的纳米晶体的凝胶，使用UV手棒或UV透射仪和荧光激发。图像用荧光显微镜在单分子水平的纳米晶体，在10mM磷酸盐缓冲液稀释为0.2nM的颗粒，下降2.5微升该溶液的玻璃盖玻片上，并小心地将顶部的液珠上的第二盖玻片传播电影之间的盖玻片。图像的表面结合的使用高数值孔径的物镜（理想情况下至少1.40）的粒子在任一落射荧光或的TIRF模式与在400-580 nm和电子倍增CCD相机之间的波长的激发。精确的成像显微镜设置参数之间会有所不同。
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Representative Results
图2描述了有代表性的吸收光谱和荧光光谱CdSe纳米晶，汞X CD-X SE阳离子交换后，汞纳米晶X CD 1-X SE / CDŸ锌1-Y S纳米晶后壳的增长。核心CdSe纳米晶有一个荧光量子产率接近15％（包括深阱长波长发射），但这样的效率下降到不到1％，汞交换，可能是由于引入通过表面原子扰乱9充电载流子陷阱。然而，增长的薄壳CDŸ锌1-Y S提高了效率提高70％以上，这在很大程度上是后转移到水（50％典型值）保持。相反，硒化镉/镉Ÿ锌1-Y S纳米晶无汞成立失去，除非厚壳生长在水中的量子产率相当大的一部分。因此，通过结合到核心nanocrysta汞L，可保持小尺寸的纳米晶体（TEM 图3）不会牺牲亮度。重要的是要注意，封盖与CdŶ锌1-Y S的光谱移位的红色由于泄漏到的壳材料中的电子的电荷载体，这种转变是约20至30纳米的CdSe芯16，并随核心（至多100nm）中的汞含量增加。
不需要进一步的大小排序，以移除集群和聚集体的纳米晶体，获得均匀的人口使用一个两步骤的水相转移是关键的。在第一步骤中，纳米晶体转移到DMSO中，使用1 - 硫代甘油，取代油胺的纳米晶体的表面上。硫甘油，然后取代的直链多齿聚合物，从而在高度稳定的粒子产生的有机涂层（<4nm的贡献的流体动力学尺寸增加最少的流体力学直径）。 图4a中描绘的尺寸排阻色谱确认的大小是相似的，伴清蛋白（75 kDa的），以及750沓氨基-PEG修饰后，增加的大小仅仅为12nm，类似的IgG抗体的。 PEG修饰中和表面电荷，如在图4b中所示的琼脂糖凝胶电泳实验证实。我们经常使用体积排阻色谱和凝胶电泳快速表征的大小，粒度分布和表面电荷。动态光散射和zeta电位法也可以使用，但是，这些超小颗粒的散射横截面是非常小的，并且我们已经发现，从商业工具的结果是不可再现的， 图5a示出这些纳米晶体的落射荧光显微镜照片沉积在一盖玻片545纳米的可见光和兴奋。这些纳米晶体很容易Øbserved在每秒30帧的具有电子倍增CCD相机在单分子水平。 图5b示出在每个帧中的观察到的荧光发色粒子的数量随着时间的推移连续激励波动，这是由于到闪烁和光致降解的组合。闪烁占主导地位为第一〜7分钟前氧化光降解慢慢变得明显的。
图1原理图的纳米粒子的合成方法的描述。 （一）镉和硒的前体反应生成CdSe纳米晶，这是处理汞硫醇，诱导局部CD→汞阳离子交换产生汞X CD-X SE三元合金纳米晶。的CdŶ锌1-Y S A壳，然后使用乙酸镉，锌，乙酸锌，和硫的核心上生长。 （b）由于SYNThesized涂覆，这些纳米晶体与非极性的有机配位体（油胺）。以溶解在水相缓冲液中这些颗粒，所取代的配位体的多齿的聚合物配位体，它是共价偶联到氨基-PEG。
图2。汞X CD 1-X SE / CDŸ锌1-Y S纳米晶体的光学性质。 （一）吸收（黑色）和荧光光谱（红色）的CdSe纳米晶体核，汞X CD-X SE后阳离子交换的核心，和Hg X CD-X SEŸ锌/镉1-Y S纳米晶后壳的增长。清晰（B）的荧光光谱汞X CD 1-X SEŸ锌/镉与汞结合不同的相对量的1-Y S的光谱偏移。蓝色光谱描绘零汞含量（X = 0，硒化镉）的核心。
图3示出的平均直径的透射电子显微镜照片（a）和粒径分布（b）的Hg X CD 1-X SE /镉Ŷ锌1-Y S纳米晶体，±标准偏差为3.2±0.6纳米。
图4。Hg的X CD 1-X SE /镉Ŷ锌1-Y S量子点在水溶液中的流体动力学特性。 （一）的纳米晶体的尺寸排阻色谱之前涂在一个多齿的聚合物配位体（红色）和后（蓝色）共轭的氨基-PEG。分子量蛋白质标准以上述情节。 （二）琼脂糖凝胶电泳实验的量子点中的硼酸钠缓冲液（pH值〜8.5）前（左）和之后（右侧）氨基-PEG的缀合。该井被标记为与表示在右侧的箭头和电极极性，示出，前共轭的纳米晶体迁移作为阴离子颗粒和聚乙二醇化的纳米晶体是静电中性。
图5。汞X CD-X SE / CDŸ锌1-Y S量子点的吸附在盖玻片磷酸盐缓冲液，荧光显微镜成像的。 （一）QD获得的图像在33帧每秒。图片为15微米×15微米。 （二）荧光量子点，每场来看，在连续照明20分钟，汞弧光灯545纳米（30纳米带通）激发滤片和625纳米（20纳米带通）排放过滤器和100x 1.4 NA目标。 3视场的测量结果进行平均在12.5帧每秒超过20分钟。
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Discussion
相对于传统的CdSe量子点，三元合金汞X CD-X SE纳米晶体可调谐的大小和荧光波长独立。在合成过程中的CdSe纳米晶体核的大小是第一次选择，和荧光的波长选择在二次汞阳离子交换步骤中，基本上不改变纳米晶体尺寸9。重要的是要允许纯化汞X CD 1-X SE纳米晶体在室温下孵育，在至少24小时前封盖。这允许一些弱吸附汞阳离子扩散到的纳米晶体晶格。不使这个过程中发生，在近红外荧光的第二频带的情况下往往是观察到由于从解离的汞离子硫化汞纳米晶体的均匀成核。
在这项工作中所示的例子中，我们准备了与附近的尺寸的2.3纳米的CdSe芯，它可以是调谐通过改变纳入核心晶格的汞的量的封端后，在550-800纳米之间的荧光。具有2.5单层壳，这些量子点的最终直径为3.2 nm的附近，这基本上是最小的尺寸的纳米颗粒，我们可以准备，既充分的光稳定性和足够亮的单分子成像（350,000 M -1厘米附近的消光系数-1，在400 nm和量子产率接近50％在水中）。这些纳米晶体是大幅明亮，更耐光比前面描述的在这个光谱范围（ 如碲化镉，砷化铟，磷化铟）发出的同等大小的纳米晶体。最喜欢的荧光基团，这些粒子在单分子水平上的荧光是间歇性的（闪烁）5,6。
在某些应用中，它可能是有利的使用稍大的纳米晶体。通过使用一个更大的CdSe纳米晶体的核心，荧光bandwi嗞嗞窄后汞阳离子交换。汞X CD-X SE的纳米晶体在600〜650 nm窗口的排放是典型的荧光峰宽50〜70 nm的为2.3纳米核心和40-50波长为320 nm的核心。因此，较大的纳米晶体，使更大容量的频谱复用。另外，增加的大小将同样增加的吸收横截面的纳米晶体。的CdS中期壳层的厚度增加也将增加亮度，并进一步延长的荧光的激发过程中的稳定性。简单的合成CdSe核的持续时间延长，并通过紫外 - 可见吸收光谱法监测的有效尺寸的CdSe核的大小可能会增加。
我们已经发现，涂有羧酸的水溶液量子点容易产生非特异性吸附到细胞和蛋白质，其在生理缓冲液的负电荷强，中和是河孙兰萍，张斌，赵大庆，许晖，化学工程CHEMICAL ENGINEERING 2008年，为最大限度地减少非特异性相互作用17。在这里的例子中，我们使用的短链PEG中的表面电荷，并保持在水中的稳定性。 PEG可以被引入到聚合物主链，无论是安装前的量子点，或涂布后。这两个过程的结果在近中性的颗粒，但这些第一涂覆有羧基的聚合物基本上是小的，大概是由于改进的多齿与表面相互作用。对于完整的表面中和用PEG，我们已经发现，重复加入羧酸活化剂是必要的，因为短的半衰期的反应物种。我们使用DMTMM在更常见的碳二亚胺试剂（ 例如 EDC），因为存储DMTMM中的改进的稳定性，由于改进的反应效率，在水中18的地方。
最后，重要的是要注意，量子点和许多其它类型的纳米晶体包含细胞毒性元素。镉和汞离子可以影响正常的活细胞和生物体的过程中，并可能致癌19-21。然而，常规的CdSe / ZnS纳米晶体的细胞毒性已被广泛研究的，它已被报道，鲁棒稳定的有机配位体的涂覆纳米晶不引起公开的细胞毒反应相比，其构成元素，仅仅是因为它们的有毒元素被有效地螯合远离氧化剂5。此外，对于单分子成像应用，毒性作用是不太可能因用于成像（通常为1纳米或更小），订单级小于检测到毒性作用（50-100纳米）的发病的极其小的浓度。大多数实施最新的量子点的单分子实验利用市售的CdSe / ZnS纳米晶体，这基本上是大于本文所述的那些。通过最小化的nanocrystal大小，每个粒子的表面原子和有毒原子每个粒子的总数的总数大幅减少，从而降低了总的电位为毒性的影响。汞的掺入到纳米晶体有望进一步降低潜在的毒性，作为二价汞是已知的毒性小于二价镉在许多类型的细胞19-21。
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Disclosures
没有利益冲突的声明。
Acknowledgments
作者想感谢香港易在埃默里大学综合显微镜核心的电子显微成像。这项工作是由美国国立卫生研究院拨款赞助（PN2EY018244，R01 CA108468，U54CA119338的，1K99CA154006-01）。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Selenium | Sigma-Aldrich | 229865 | |
| Tri-n-octylphosphine | Strem | 15-6655 | 97% pure, unstable in air |
| Cadmium oxide | Sigma-Aldrich | 202894 | Highly toxic: use caution |
| Tetradecylphosphonic acid | PCI Synthesis | 4671-75-4 | |
| Octadecene | Alfa Aesar | L11004 | Technical grade |
| Hexadecylamine | Sigma-Aldrich | H7408 | |
| Diphenylphosphine | Sigma-Aldrich | 252964 | Pyrophoric |
| Mercury acetate | Sigma-Aldrich | 456012 | Highly toxic: use caution |
| 1-Octanethiol | Sigma-Aldrich | 471836 | Strong odor |
| Oleic acid | Sigma-Aldrich | W281506 | |
| Zinc acetate | Alfa Aesar | 35792 | |
| Cadmium acetate hydrate | Sigma-Aldrich | 229490 | Highly toxic: use caution |
| Oleylamine | Fisher Scientific | AC12954 | Unstable in air |
| Sulfur | Sigma-Aldrich | 344621 | |
| Trioctylphosphine oxide | Strem | 15-6661 | 99% |
| Pyridine | VWR | EM-PX2012-6 | Anhydrous |
| Thioglycerol | Sigma-Aldrich | M1753 | Strong odor |
| Triethylamine | Sigma-Aldrich | 471283 | Anhydrous |
| Dialysis tubing | Spectrum Labs | 131342 | 20 kDa cutoff |
| Centrifugal filter | Millipore | UFC801024 | 10 kDa cutoff |
| Monoamino-PEG | Rapp Polymere | 12 750-2 | 750 Da |
| DMTMM, 4-(4,6-Dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl)-4-methylmorpholinium chloride hydrate | Alfa Aesar | H26333 | |
| AKTAprime Plus Chromatography System | GE HealthCare | ||
| Superose 6 10/300 GL chromatography column | GE HealthCare | 17-5172-01 | |
| Agarose, OmniPur | VWR | EM-2120 | |
Appendix Synthesis of mercury octanethiolate: Slowly add a methanol solution of mercury acetate (1 eq.) to a stirring solution of 1-octanethiol (3 eq.) and potassium hydroxide (3 eq.) in methanol at room temperature. Isolate the mercury(II) octanethiolate precipitate via filtration, wash two times with methanol and once with ether, and then dry under vacuum. Synthesis of multidentate polymer: Dissolve polyacrylic acid (1 g, 1,773 Da) in 25 ml dimethylformamide (DMF) in a 150 ml three-necked flask and bubble with argon for 30 min. Add an anhydrous solution of cysteamine (374 mg, 4.87 mmol) in 10 ml DMF. At room temperature with vigorous stirring, slowly add anhydrous diisopropylcarbodiimide (DIC, 736 mg, 5.83 mmol) over 30 min, followed by triethylamine (170 μl, 1.22 mmol), and allow the reaction to proceed for 72 hr at 60 °C. Add mercapt–thanol (501 mg, 6.41 mmol) to quench the reaction, and stir for 2 hr at room temperature. Remove DMF via rotary evaporation and isolate the polymer with the addition of a 2:1 mixture of ice-cold acetone:chloroform, followed by centrifugation. Dissolve the polymer in ~5 ml anhydrous DMF, filter, precipitate again with diethyl ether, and repeat. Dry the product under vacuum and store under argon. Determination of CdSe core diameter: From the UV-Vis absorption spectrum determine the wavelength of the first exciton peak (λ, in nm), which is the longest-wavelength peak (e.g. roughly 498 nm for CdSe in Figure 2a), and use the sizing curve of Mulvaney and coworkers 12:
Determination of CdSe nanocrystal concentration: From a background-subtracted UV-Vis spectrum of an optically clear solution of CdSe nanocrystals, determine the absorption at 350 nm wavelength. Serial dilutions can be used to determine if the optical absorption is within the linear range of Beer's Law. The nanocrystal concentration (QD, in M) can be determined by plugging in the nanocrystal diameter (D, in nm), the optical absorption value (A3sa), and the cuvette path length (l, in cm) into the following equation from the empirical correlation of Bawendi and coworkers 13:
|
|||
References
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