Summary
במודל של בעלי החיים המתוארים בעבודה הנוכחית שלנו, מטוהרי נוגדני IgG נגד מתיחה של 200 חומצות אמינו (aa 757-967) של קולגן VII מוזרקים שוב ושוב לעכברים להתרבות פנוטיפ שלפוחיות כמו גם histo וimmunopathological תכונות אופייניות לאדם epidermolysis ולוזה acquisita (EBA)
Abstract
תופעות אוטואימוניות להתרחש אצל אנשים בריאים, אבל כאשר סובלנות עצמית נכשלה, התגובה אוטואימונית עלולה לגרום לפתולוגיה ספציפית. לדברי Witebsky של נחות היסוד, אחד מהקריטריונים באבחון מחלה אוטואימונית כהיא השעתוק של המחלה בחיות מעבדה על ידי ההעברה הפסיבית של נוגדנים עצמיים. לepidermolysis ולוזה acquisita (EBA), מחל אוטואימונית איבר ספציפי לאבטיפוס של קרום עור ורירי, מספר מודלים ניסיוניים שהוקמו לאחרונה. במודל של בעלי החיים המתוארים בעבודה הנוכחית שלנו, מטוהרי נוגדני IgG נגד מתיחה של 200 חומצות אמינו (aa 757-967) של קולגן VII מוזרקים שוב ושוב לעכברים להתרבות פנוטיפ שלפוחיות כמו גם histo וimmunopathological תכונות אופייניות לאדם 1 EBA. מחלה נפוצה במלוא מובן מילה נתפסת בדרך כלל 5-6 ימים לאחר הזריקה הראשונה והיקף המחלה בקורלציה עם המינון של c מנוהלollagen השביעי ספציפי IgG. הניזק לרקמות (היווצרות שלפוחית) בEBA הניסיוני בהתאם לגיוס וההפעלה של גרנולוציטים ידי נוגדנים עצמיים רקמות בכריכת 2, -4. לכן, מודל זה מאפשר לנתיחה של המסלול הדלקתי granulocyte התלוי המעורבים בניזק לרקמה אוטואימונית, כמודל מתרבה רק שלב T תא העצמאי של התגובה אוטואימונית efferent. יתר על כן, הערך שלו מודגש על ידי מספר המחקרים הממחישים את פוטנציאל שלפוחית וישכנע של נוגדנים עצמיים בגוף חי וחוקרים את מנגנון היווצרות הכיב בEBA 1,3, -6. לבסוף, מודל זה יהיה מאוד להקל על הפיתוח של טיפולים חדשים נגד הדלקת במחל autoantibody מושרות. בסך הכל, מודל חית ההעברה הפסיבית של EBA הוא מודל מחלה נגישה ומאלף ויסייע לחוקרים לנתח לא רק פתוגנזה EBA אבל לענות בסיסי ביולוגי וקלינישאלות אוטואימוניות חיוניות.
Protocol
1. הכנת הנוגדנים פתוגניים
הערה: טיהור וריכוז של הנוגדנים צריכות להתבצע באותו היום, כפי שנוגדנים אינם להיות מאוחסנים ב0.1 מ 'גליצין pH 2.5-3 (חיץ elution) במשך הלילה (ON).
טיהור זיקה של IgG: 25 מ"ל של שימוש בסרום ארנבת חיסוני:
- הפשר סרום הארנב על ב 4 ° C, לערבב אותו עם 01:01 1xPBS (ריצת חיץ) וחובצה את זה ב1260 XG למשך 10 דקות בטמפרטורה של 20 מעלות צלזיוס לחלופין, צעד סינון עם מסנן נייר יכול להיכלל לאחר צנטריפוגה במקרה הסרום הוא שומן.
- בינתיים, לשטוף את חלבון G מטריצה מלאת עמודה עם 10 כרכי מיטה (נפח המיטה = נפח מטריצה) של 1XPBS (ריצת חיץ).
- החל מדוללים ומסונן סרום לעמודה ודגירה 1 שעה על הפלטפורמה מתנדנדת בטמפרטורת חדר (RT).
- אסוף את הזרימה באמצעות (FT) בצינור 50 מיליליטר Flacon. אל תמחק אותו עד הריכוזוכייל של המטוהרים IgG ידוע.
- לשטוף מטריצה עם 5 כרכי מיטה של 1XPBS ובינתיים להכין 50 צינורות מ"ל פלקון לאיסוף שבריר IgG eluted. חיץ פיפטה 1 מיליליטר חומציות נטרול: 1 ז TRIS pH 10 בכל צינור (שיעור של חיץ 1:20 TRIS יחסית לכמות eluate שתיגבה בדרך אחרת).
- החל חיץ 100-150 מ"ל elution: 0.1 מ 'גליצין pH 2.5-3 לעמודה ולאסוף חלק 50 מ"ל (הים). הפוך את צינור 2-3x, למדוד את רמת החומציות ולהוסיף חיץ נטרול עד שהגעת לרמת החומציות 7.2-7.4.
- לאסוף כמה טיפין של eluate IgG ובאמצעות חיץ elution כetalon למדוד OD ב 280 ננומטר. אם OD הוא <איסוף עצירה 0.1.
- להתחדש מטריצת G חלבון ולאחסן אותו בהתאם להוראות היצרן.
ריכוזיות לפי ultrafiltration עם צינורות Amicon:
- שטוף Amicon Ultra (15 מ"ל / 30KDa) צינורות ultrafiltration עם 1XPBS ידי צנטריפוגה דקות 15-20ב3220 XG ב 4 ° C. השלך את FT מAmicon.
- מלא את Amicons עם 15 מ"ל של שבריר IgG eluted וצנטריפוגות ל25-30 דקות ב 3220 XG ו 4 מעלות צלזיוס; זמן צנטריפוגה תמיד תלוי בתכולת החלבון של eluate.
- השלך FT ולחזור ultrafiltration עד שאין לך חלק eluted עזב.
- שטוף IgG המרוכז בהרחבה, פעמים, עם 25-30 דקות 1XPBS ידי צנטריפוגה.
- אסוף את הפתרון "הדביק", הצהבהב נוגדנים מAmicon המסנן בנפח סופי של 1,500-2,000 μl של 1XPBS.
- ריכוז אמצעי להתכונן IgG באמצעות ספקטרופוטומטר או NanoDrop:
קונצרט כלשהו. (מ"ג / מ"ל) = A (280 ננומטר) X פקטור דילול / 1,4 - לשטוף ולאחסן את Amicons בעקבות הוראות היצרן.
2. הזרקת קולגן VII הספציפי IgG לעכברים
לפני שתתחיל בהליך הניסוי בפועל, לוודא שהפר הניסיוניtocol כתוב ואת כל החומרים מוכנים לניסוי.
- הכן את גיליונות נתונים עבור ניקוד המחלה, ELISAs, immunofluorescence (IF) הניתוח וmyeloperoxidase (MPO) assay 4.
- תייג את צינורות דם ואיברים, cryomolds כמו גם היסטולוגיה העיבוד והטבעת קלטות.
- פתרוני הנוגדנים צריכים להיות מוכנים טריים או מופשר ממניות ומאופיינות ביחס לתגובתיות שלהם (אם כייל ידי מיקרוסקופי ו / או ELISA). פתרון הנוגדן המסונן סטרילי צריך להיות מדולל ב PBS באופן שהמינון הנדרש להזרקה נע בין 250-1000 μl. ודא שיש לך מספיק נוגדנים כדי לבצע את הניסוי כולו.
- הכן טרי קרישה: הפרין 20 U / מ"ל ו -8.7 מ"ג / המ"ל קטמין / תערובת 1.3 מ"ג / מיליליטר xylazine להרדמה. כאשר להקריב את העכברים שכותרת צינורות עם פורמלדהיד 3.7% מוכנים.
- לעקר מכשירי ניתוח (אזמל, מספריים, צבע עדין והכמתמ"כforcipes ED) ולהכין את מזרקים (מזרקי אינסולין, 1 ו 2 מזרקי מ"ל), מחטים, מצלמה דיגיטלית וכרטיס זיכרון נוסף.
הערה: בצע את כל ההליכים על עכברים מסוממים קטמין / או xylazine isoflurane isoflurane הוא האופציה המועדפת להרדמת בדיקות העור היומיות, כמו עכברים להתאושש במהירות.. עם זאת, בעת צילום תמונות, קטמין 87 מ"ג / ק"ג וxylazine 13 מ"ג / ק"ג בדרך כלל מוזרקת מתחת לעור. להמתת חסד מינון קטמין / xylazine גדל ל קטמין 130 מ"ג / ק"ג וxylazine 20 מ"ג / ק"ג.
- בדקו את החיות כבר סומנו למצבו הבריאותי, העור והמראה הכללי שלהם פרווה, לשקול אותם ולמדוד את עובי האוזן שלהם (תמיד מקל על אותה האוזן).
- הרשמת ערכים ושינויים בגיליון ההערכה הקלינית שנצפו.
- לאסוף 20-30 μl (2-3 טיפין) דם מוריד הזנב במזרק המכיל את אותו הנפח של קרישה.
- לחטא את הפרווה ועור באמצעות אתנול 80%.
- הזרק פתרון הנוגדן תת עורי לחלק האחורי באמצעות מזרק אינסולין. (עבור אתרים מסוימים (לדוגמה, האוזניים) רק בנפחים קטנים (10-50 μl) הם ריאליים כדי להיות מוזרק.)
זריקות יש לחזור כל יום שני, 4 פעמים. BALB / ג וC57BL6 עכברים של משקל גוף של כ 20 גרם להתחיל לפתח את מחל 3-4 ימים לאחר שהממשל הראשון של 400-500 עד 750 מיקרוגרם נוגדנים עצמיים / g משקל גוף / הזרקה.
כשסיים את הניסוי:
- לשים את העכברים תחת הרדמה עמוקה על ידי הזרקת 130 מ"ג / ק"ג ו 20 מ"ג / ק"ג תת עורי קטמין / xylazine, לגרום לדימום המחודש מהווריד הנבוב האחורית ולחתוך את הלב.
- איסוף איברים / דגימות רקמות כגון עור: זנבות, אוזן, דם וושט ולשים אותם בצינורות שכותרתו בעבר ופורמלדהיד% PBS או 3.7 מלאים.
כאשר חוזריםמעבדה:
- צנטריפוגה הדם ב1200 XG, 10 דקות ב RT לפלזמה נפרדת, להעביר את הפלזמה לצינורות שכותרתו כראוי ולאחסן אותם בהתאם.
- שבץ עור הביופסיה בטמפרטורה בינונית Cut אופטימלי באמצעות cryomolds, כראוי למותג, ולאחסן אותם ב-80 ° C.
- מניח את דגימות הרקמה שנועדו ליסטולוגיה בתבניות הטבעת התוויות ולשמור אותם בפורמלין 3.7% עד הטבעת פרפין.
3. הערכה קלינית של חומרת מחלה
עכברים יש לבחון מדי יום לנגעים בעור ובריריות והממצאים צריכים להיות מוקלטים באמצעות טפסים מתאימים. הקריטריונים להמתת החסד מוקדמת הם נגעי עור המשפיעים יותר, כי 20% משטח הגוף וירידה במשקל של 5-10% ממשקל הגוף בשלושה ימים רצופים, ספירה לציון מחלה של 5 (טבלה 1).
- הנח את העכבר על בטנו. התחל עם אזור הראש, כלומר עם הזכותאוזן ולבדוק לשלפוחיות, שחיקות, קרום בפנימי, כמו גם בצד החיצוני. תמשיך באותה הדרך עם אוזן השמאל.
- עיני ימין ושמאל נשלטות סימנים של אודם, התקרחות, שחיקה ו / או קרום.
- אזור חוטם מצח והם עברו דרך הבאה, ממשיכים בחלק הגחוני של החוטם, בשפות ובקרום הרירי של הפה.
- בחן את הרגל הימנית הקדמית החל מהכפה, נע כלפי מעלה; לעבור לרגל הקדמית השמאלית. הליך אותו דבר עם רגליו האחוריות הימניות ושמאליות.
- צחצח דרך הפרווה בצוואר ובגב האזור עם מלקחי נקודה עדינים מעוקלים.
- הפך את העכבר על גבה ולבדוק את חלק הגחון, כמו גם את צדדי הגחון של גפיים באותו אופן כמו בעבר.
- בדקו את הזנב.
- קח תמונות של חלקי גוף הרלוונטיים שבו העכברים לפתח מחלה. יש לשים לב לכמות והאיכות של תמונות.
- לחשב את ציוני מחלה הקליניות.
4. בדיקת דגימות עור ופלזמה
- היכון, חנות, ו / או לעבד את כל הרקמות שנאספו על פי התכנית.
- לחתוך חלקי רקמה קפוא לאם זיהוי של נוגדני ארנבת ורכיבי מערכה משלימה עכבר.
- לנתח את תכולת החלבון ואנזים השונה (בדיקת MPO) של תמציות איברי רקמות ו / או קפוא.
- סעיף פרפין מוטבע רקמות וכתם עם H & E כדי להמחיש את מידת ניזק לרקמות.
- נתח את הפלזמה על ידי ELISA, immunoblot.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
ההעברה הפסיבית של אנטיגן ספציפיות נוגדני תוצאות במחלה מלאת מפוצץ בעכברים, המזכירים ברמות קליניות, היסטולוגית וimmunopathological EBA האנושי. שלפוחיות, קרומיים, השחיקות וההתקרחות יתפתחו באוזניים, הזרבובית, הרגליים, כפות הרגליים, גב ומסביב לעיניים של העכברים. הסימנים הקליניים הראשונים של המחלה ככל הנראה יופיעו באוזניים ו / או באזור הראש. תצהיר של הארנב IgG הספציפי, ועכבר המשלים C3 הוא זוהה על ידי ישיר אם בצומת אפידרמיס העור בcryosections של עור perilesional. בשלפוחיות בעור lesional subepidermal ודלקתי לחדור נתפסים על ידי היסטולוגיה.
עם זאת, אם ההזרקה של נוגדנים פתוגניים קולגן VII הספציפיים בו תופסק, פעילות המחלה בהדרגה הופכת נמוכה יותר, ובתוך כמה שבועות את הנגעים לרפא. עם זאת, במידה מסוימת של מצולקת התקרחות postinflammatory עלולה להימשך ללא הגבלה זמן.
Characterization של autoantigen רקומביננטי (ושל פתוגניים IgG)
קולגן Murine הספציפי IgG נקשר בצומת עורי, אפידרמיס (איור 2 ב '). הספציפיות מוערכות על ידי immunoblot (האיור 2C, נתיבים 3, 4 ו 7).
ניקוד פעילות מחלה
ההערכה הקלינית של המחלה מתבססת על שיטת ניקוד שפתחנו (טבלה 1): 0, ללא נגעים; 1, פחות מ -1% מפני העור; 2, 1-5% משטח העור; 3, 5 - 10% משטח העור; 4, 10-20% משטח העור מושפעים. IgG נגד עכברי קולגן VII גורם נגעים עוריים כגון אודם, התקרחות, שלפוחיות, ארוזיות, קרומים על אוזניים, עיניים, חוטם, גפיים וגוף של עכברי BALB / C (איור 3).
מניתוח נוגדני כורכי רקמת קולגן ומחזור ספציפיים
תצהיר של הארנב IgG, ומשלימים C3 העכבר הוא detec טד בסעיפי רקמות קפואים, perilesional (האיור 4D ו-E בהתאמה). שלפוחיות subepidermal והדלקתי לחדור נראות בדגימות ההיסטולוגיים (4F איור). נוגדני ארנבת במחזור מנותחים ELISA (איור 5). תמציות איברי רקמות ו / או קפוא מנותחות לפי מבחנים שונים לחלבון שלהם ותוכן אנזים (assay MPO).
איור 1. מערך כולל של in vivo שלפוחיות הנגרם על ידי ההעברה הפסיבית של נוגדני קולגן VII ספציפיים. ארנבים מחוסנים עם קולגן VII העכברי והארנב IgG מטוהר מהסרום החיסוני. לאחר מכן, נוגדנים העצמיים הספציפיים מוזרקים מתחת לעור בעכברים בעקבות הזרקה / לוח זמנים של דימום. עכברים נבדקים למצב בריאות כללי וסימני מחלה יומית.
ילדה = "jove_content" fo: לשמור-together.within עמודים = "תמיד"> 
איור 2. אפיון פתוגניים קולגן VII IgG הספציפי. עקיף אם ניתוח של סעיפי מלח מפוצל רגילים עכבר עור מודגרות עם סרום ארנבת מראש חיסוני ועם תוצאות Murine קולגן VII ספציפיים חיסוניות ארנב בסרום בשום תצהיר () ותצהיר של נוגדנים עצמיים ב צומת עור אפידרמיס (ב '), בהתאמה. הנוגדנים הספציפיים להכיר אנטיגן (ים) שהועלו נגדו כאשר immunoblot עם סט של חפיפת רקומביננטי ברי Murine קולגן VII מתבצע (C, נתיבים 3, 4 ו 7).
איור 3. הערכה קלינית של עכברים. IgG לעכברי קולגן VII גורמת נגעים עוריים כגון התקרחות, שלפוחיות, ארוזיות, קרומים על האוזניים, עיניים, חוטם, LiMBS וגוף של עכברי BALB / ג (AD). עכברים שהוזרקו עם נוגדנים עצמיים מסוימים להגיע לציון של 4, ואילו אלה שהוזרקו עם NRIgG או לבטן נגד חלבון אדיש היה ציון של 0 (E). הציון הקליני היה מחושב באופן הבא: 0, ללא נגעים; 1, פחות מ 1% מפני העור; 2, 1-5% משטח העור; 3, 5-10% של פני שטח העור; 4, 10 - 20% משטח העור מושפעים. ירידה במשקל של 5-10% ממשקל הגוף הכולל במהלך שלוש אישומי ימים רצופים כנקודה נוספת בציון הסופי.
תרשים 4. ממצאים וhisto immunopathological בעכברים שהוזרקו עם קולגן IgG. הפקדה השביעית ספציפית של הארנב IgG (ד '), ומשלימים C3 העכבר (ה') הוא זוהה על ידי ישיר אם בצומת אפידרמיס העור בcryosections של עור perilesional, in vivo. בשלפוחיות בעור lesional subepidermal וinf הדלקתיiltrate נתפס על ידי היסטולוגיה (F). אין בתצהירו של הארנב IgG (), העכבר המשלים C3 (ב '), ולא הוא היווצרות שלפוחית subepidermal ראתה בפקדים (C).
איור 5. רמות בפלזמה של פלזמה מimmunoassay עכברים שהוזרקו עם קולגן VII הספציפי IgG. של מחזור נוגדני ארנב נמדדו על ידי ELISA.
טבלת 1. עור שלפוחיות גיליון ניקוד מחלה. לחץ כאן לקבלת לוח גדול.
ניקוד מערכת:
- 0, ללא נגעים;
- 1, פחות מ 1% מפני העור;
- 2, 1-5% מפני העור;
- 3, 5-10% מsu העורrface;
- 4, 10-20% משטח העור מושפעים.
רמזים מיותרים כאשר ניקוד:
- ירידה במשקל של 5-10% ממשקל הגוף הכולל במהלך שלוש אישומי ימים רצופים כנקודה נוספת בציון הסופי 17.
- אריתמה על האוזניים, מסביב לעיניים בכפות הן רק הסימנים הראשונים של תגובה חיסונית מתמשכת, אם לא זיווג עם שלפוחיות או התקרחות הם אינם כמותיים, פשוט לקחו תחת השגחה.
- סימנים על הזנב יכולים להיות סימני נשיכה או להילחם, ולכן אם הם קיימים מראשיתם החמרה בהכרח לא יכול להיות כתוצאה מהמחלה. שקול היטב מזג אוויר כדי לספור אותם!
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
ההעברה הפסיבית של נוגדנים עצמיים לחיות ניסוי היא גישה עיקרית להוכחת פתוגניות 7, -12. מודלים של בעלי חיים שהושגו באמצעות שיטה זו, בנוסף להיות עדות העקיפה לאוטואימוניות 13, לאפשר את חקירתו של שלב efferent של המנגנון הפתוגני. מודל ההעברה הפסיבית של נוגדני עור המושרה granulocyte תלוי שלפוחיות epidermolysis ולוזה acquisita (EBA) שמש לנתח את המנגנונים של ניזק לרקמה בדלקות עור אוטואימוניות. התבררתי גם, כמחלת מודל להפליא מאלפת ללמוד יסוד ביולוגי וקליניים, היבטים מכריעים של מחלות בתיווך נוגדנים ספציפיות לאיבר אוטואימוניות שמרחיבות גם מעבר לגבולות אוטואימוניות נגד קולגן VII. לבסוף, מודל זה יכול לשמש כדי לחקור תהליכי יסוד ביולוגי וpathophysiological, כולל ביולוגית קרום מרתף, הפעלת granulocyte ידי קומפלקסים חיסונייםהפעלה משלימה ד.
למרות שמספר הגדרות ניסיוניות, כולל vivo לשעבר ומודלים של בעלי חיים, זמינות למחלת העור אוטואימונית EBA 14, ללא ספק המתאים ביותר ללמוד את המסלולים הדלקתיים granulocyte התלויים הוא ההעברה הפסיבית של נוגדנים עצמיים לבעלי חיים. בניגוד למודל vivo לשעבר, שבו גרנולוציטים מתווספים לסעיפי העור מודגרות עבר עם נוגדנים העצמיים 15, כאן החדירה של לויקוציטים משוכפל באופן ספונטני על ידי העכברים. יתר על כן, אם אנחנו בוחרים לעבוד עם נוגדנים ספציפיים שהועלו כנגד אנטיגן באורגניזמים אחרים, כמו ארנב ועז, אנו נמנעים מהבעיה של זמינות סרום חולה מוגבלת ויש לנו גם סיכוי טוב יותר להתרבות הפעלת משלים וגיוס granulocyte 16.
לרבייה המוצלחת של שלפוחיות granulocyte תלויים במצב ההעברה הפסיביתl של EBA, חשוב להיות מסוגל כראוי כדי להבקיע את הסימנים של מחלה, החל מאודם ובצקת בשלפוחיות, שחיקות עם קליפות והתקרחות. ההערכה של עכברים היא תהליך שצריך ללמוד את העבר. הניקוד של המחלה יש לבצע על ידי אותו האדם, לאורך הניסוי ותמיד הושאל ע"י משת"פ או אדם סיוע. הפיתוח והשימוש בשיטת ניקוד אחידה לכל מחלה ניסויית הוא בחשיבות קצוני ביותר. גיליון הניקוד הסגור צריך לתת לקורא תובנה כיצד דלקות עור עור מוערכות בעכברים.
כשבצע כמוצג בסרטון, המודל של שלפוחיות subepidermal autoantibody מושרות יהיה מאוד להקל על הנתיחה הנוספת של המסלולים הדלקתיים granulocyte התלויים מופעלים על ידי נוגדנים עצמיים וכתוצאה מכך נגרמו ניזק לרקמות. הערך שלו במחקר רפואי נתמך על ידי הפרספקטיבה המבטיחה של פיתוח ובדיקה של אנטיגן חדשpecific T ותא B ממוקד טיפולים אנטי דלקתיים. לבסוף, זה יעזור לענות על שאלות בסיסיות אוטואימוניות ביולוגית וקלינית חיוניות.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
אין ניגודי האינטרסים הכריזו.
Acknowledgments
החוקרים מכירים בתמיכה על ידי מענקים מForschungsgemeinschaft דויטשה SI-1281/4-1 וBIOSS מהפקולטה לרפואה באוניברסיטת פרייבורג (לCS).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| recombinant antigen | The plasmids encoding for the recombinant forms of murine collagen VII are available from the corresponding author. | ||
| immune rabbit serum | www.eurogentec.com | We had New Zealand White rabbits immunized with 200 μg of antigen, 3 times at 2 week intervals. For this purpose we have used the services of Eurogentec S.A., Belgium. | |
| Protein G agarose | Roche Applied Science | 11243233001 | |
| Balb/c mice | Charles River Laboratories | ||
| OCT compound, Tissue-Tek | Sakura Finetek | 4583 | OCT, optimal cutting temperature |
| Cryomold standard | Sakura Finetek | 4557 | 25 mm × 20 mm × 5 mm |
| Cryomold intermediate | Sakura Finetek | 4566 | 15 mm × 15 mm × 5 mm |
| Uni-Link-Einbettkassette | R. Langenbrinck | 09-0503 | Histology processing and embedding cassettes |
| Spezial-Tatowierfarbe Schwarz | H. Hauptnerund Richard Herberholz GmbH Co. KG | 71492000 | tattooing paste |
| Tatowierzange TZ1 | EBECO E. Becker Co GmbH | tattooing device | |
| Heparin | Carl Roth GmbH Co. | 7692.1 | |
| Formaldehyde 37% | Carl Roth GmbH Co. | 7386 | |
| Ketamine hydrochloride | Sigma-Aldrich Chemie GmbH | K2753-1G | |
| Xylazine hydrochloride | Sigma-Aldrich Chemie GmbH | X1251-1G | |
| sterile PBS | Biochrom | L182-50 | |
| digital camera | Nikon | Coolpix 5400 | |
| Syringe driven filter unit 0.45 μm | Millipore | ||
| Caliper | Mitutoyo 7309 | 1667338 | Farnell (distributor) |
| disease scoring sheet | example enclosed |
References
- Sitaru, C., Mihai, S., Otto, C., Chiriac, M. T., Hausser, I., Dotterweich, B. Induction of dermal-epidermal separation in mice by passive transfer of antibodies specific to type VII collagen. J. Clin. Invest. 115, 870-878 (2005).
- Kopecki, Z., Arkell, R. M., Strudwick, X. L., Hirose, M., Ludwig, R. J., Kern, J. S. Overexpression of the Flii gene increases dermal-epidermal blistering in an autoimmune ColVII mouse model of epidermolysis bullosa acquisita. J. Pathol. 225, 401-413 (2011).
- Kulkarni, S., Sitaru, C., Jakus, Z., Anderson, K. E., Damoulakis, G., Davidson, K. PI3Kβ plays a critical role in neutrophil activation by immune complexes. Sci. Signal. 4, 23-23 (2011).
- Chiriac, M. T., Roesler, J., Sindrilaru, A., Scharffetter-Kochanek, K., Zillikens, D., Sitaru, C. NADPH oxidase is required for neutrophil-dependent autoantibody-induced tissue damage. J. Pathol. 212, 56-65 (2007).
- Mihai, S., Chiriac, M. T., Takahashi, K., Thurman, J. M., Holers, V. M., Zillikens, D. The alternative pathway of complement activation is critical for blister induction in experimental epidermolysis bullosa acquisita. J. Immunol. 178, 6514-6521 (2007).
- Sesarman, A., Sitaru, A. G., Olaru, F., Zillikens, D., Sitaru, C. Neonatal Fc receptor deficiency protects from tissue injury in experimental epidermolysis bullosa acquisita. J. Mol. Med. 86, 951-959 (2008).
- Huang, X. R., Holdsworth, S. R., Tipping, P. G. Th2 responses induce humorally mediated injury in experimental anti-glomerular basement membrane glomerulonephritis. J. Am. Soc. Nephrol. 8, 1101-1108 (1997).
- Matsumoto, I., Staub, A., Benoist, C., Mathis, D. Arthritis provoked by linked T and B cell recognition of a glycolytic enzyme. Science. 286, 1732-1735 (1999).
- Oswald, E., Sesarman, A., Franzke, C., Wölfle, U., Bruckner-Tuderman, L., Jakob, T. The flavonoid luteolin inhibits Fcγ-dependent respiratory burst in granulocytes, but not skin blistering in a new model of pemphigoid in adult mice. PLoS One. 7, e31066 (2012).
- Liu, Z., Diaz, L. A., Troy, J. L., Taylor, A. F., Emery, D. J., Fairley, J. A. A passive transfer model of the organ-specific autoimmune disease, bullous pemphigoid, using antibodies generated against the hemidesmosomal antigen, BP180. J. Clin. Invest. 92, 2480-2488 (1993).
- Anhalt, G. J., Labib, R. S., Voorhees, J. J., Beals, T. F., Diaz, L. A. Induction of pemphigus in neonatal mice by passive transfer of IgG from patients with the disease. N. Engl. J. Med. 306, 1189-1196 (1982).
- Toyka, K. V., Brachman, D. B., Pestronk, A., Kao, I. Myasthenia gravis: passive transfer from man to mouse. Science. 190, 397-399 (1975).
- Rose, N. R., Bona, C. Defining criteria for autoimmune diseases (Witebsky's postulates revisited. Immunol. Today. 14, 426-430 (1993).
- Sitaru, C. Experimental models of epidermolysis bullosa acquisita. Exp. Dermatol. 16, 520-531 (2007).
- Sitaru, C., Kromminga, A., Hashimoto, T., Bröcker, E. B., Zillikens, D. Autoantibodies to type VII collagen mediate Fcgamma-dependent neutrophil activation and induce dermal-epidermal separation in cryosections of human skin. Am. J. Pathol. 161, 301-311 (2002).
- Sesarman, A., Oswald, E., Chiriac, M. T., Csorba, K., Vuta, V., Feldrihan, V. Why human pemphigoid autoantibodies do not trigger disease by the passive transfer into mice. Immunol. Lett. , (2012).
- Ishii, N., Recke, A., Mihai, S., Hirose, M., Hashimoto, T., Zillikens, D. Autoantibody-induced intestinal inflammation and weight loss in experimental epidermolysis bullosa acquisita. J. Pathol. 224, 234-244 (2011).
