Dieser Artikel und das dazugehörige Video präsentieren unser Protokoll zur Erzeugung von Tissue-Engineering-Darm der Maus, mit einem organoiden Einheiten-on-Gerüst Ansatz.
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Methodenartikel
Tissue Engineering des Darms in einem Mausmodell
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Tissue-Engineering Dünndarm (TESI) erfolgreich verwendet worden, um Lewis Ratten nach massiven Dünndarmresektion zu retten, was im Gegenzug die präoperative Gewichte innerhalb von 40 Tagen. 1 Bei Menschen, massive Dünndarmresektion in Kurzdarmsyndrom, eine funktionelle malabsorptive führen Staat, der erheblichen Morbidität, Mortalität und Kosten im Gesundheitswesen einschließlich der parenteralen Ernährung abhängig, Leberversagen und Zirrhose, und die Notwendigkeit für multiviszerale Organtransplantation. 2 In diesem Papier verleiht, beschreiben und dokumentieren wir unser Protokoll für die Erstellung von Tissue-Engineering-Darm in einem Mausmodell mit einem vielzelligen organoide Einheiten-on-Gerüst Ansatz. Organoiden Einheiten sind mehrzellige Aggregate aus dem Darm abgeleitet, die sowohl mukosale und mesenchymalen Elemente enthalten, 3 die Beziehung zwischen denen die intestinale Stammzellnische bewahrt. 4 In laufende und zukünftige Forschung, der Übergang der Technik in derMaus zur Untersuchung der Vorgänge während TESI Bildung durch die Nutzung der transgenen Instrumenten in dieser Art beteiligt zu erlauben. 5 Die Verfügbarkeit von immungeschwächten Mausstämmen auch erlauben uns, die Technik für die menschliche Darmgewebe anwenden und optimieren die Bildung des menschlichen TESI als Maus-Xenograft vor dessen Übergang in den Menschen. Unsere Methode beschäftigt Good Manufacturing Practice (GMP)-Reagenzien und Materialien, die bereits für die Verwendung bei menschlichen Patienten zugelassen wurden, und bietet somit einen deutlichen Vorteil gegenüber Ansätzen, die auf dezellularisierten tierischen Geweben verlassen. Das ultimative Ziel dieser Methode ist die Übersetzung für den Menschen als regenerative Medizin therapeutische Strategie für Kurzdarmsyndrom.
Protokoll
Ein. Organoid Units Vorbereitung
- Instrumente geeignet für Maus Dissektion (Schere und Pinzette) sollte im Autoklaven sterilisiert werden.
- Menschlich einschläfern den Spender Maus nach lokalen IACUC Protokolle. Stellen Sie sicher, dass das Tier tot ist, bevor Sie fortfahren.
- Einen Mittellinieneinschnitt um Zugang zu dem Peritonealraum gewinnen. Hautlappen können reflektiert je nach Bedarf, um die Exposition zu verbessern.
- Ausweiden des Dünndarms und teilen sie knapp distal des Lig. Treitz. Trennen Sie den Dünndarm von seinem Mesenterium mit scharfen und sanften stumpf. Identifizieren Sie die ileocecal Kreuzung und unterteilen d....
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Ergebnisse
Abbildung 1 zeigt eine Gesamtansicht Schema für das Protokoll dokumentiert. Das Endergebnis dieses Protokolls ist eine Kugel oder kugelförmige Struktur des Tissue-Engineering murinen Darm mit einem Lumen, Schleimhaut, submucosa, Muscularis und Umgebung. 2A zeigt eine typische Globus im Vergleich zum Ausgangsmaterial Polymergerüst. 2B zeigt dasselbe Konstrukt zweiklappigen scharf zu sein Lumen offenbaren. Abbildung 3 zeigt eine Hämatoxylin / Eosin-gefärb.......
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Diskussion
Wir präsentieren ein Protokoll zur Herstellung Tissue-Engineering-Darm der Maus über ein organoides Einheiten-on-Gerüst Ansatz. Die wichtigsten Schritte sind solche der organoiden Einheiten Zubereitung. Es ist darauf zu reinigen und ausreichend mechanisch verarbeiten das Gewebe, aber gleich ist darauf nicht overdigest oder overtriturate die organoiden Einheiten werden nach dem Verdau durchgeführt (Schritt 1.11). Wenn dies erledigt ist, die organoiden Einheiten zu Einzelzellen, die in dem Überstand von Schritt 1,12 verlo.......
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Offenlegungen
Keine Interessenskonflikte erklärt.
Danksagungen
Tracy C. Grikscheit, Erik R. Barthel, und Frédéric G. Sala von der California Institute for Regenerative Medicine (CIRM), Gewährung Zahlen RN2-00946-1 (TCG) und TG2-01.168 (ERB, FGS) unterstützt. Allison L. Speer ist eine Gesellschaft der Universität Surgeons Ethicon Gelehrter. Yasuhiro Torashima wird von einem Kinderkrankenhaus in Los Angeles Saban Institut Forschung Career Development Fellowship gefördert.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Name des Reagenzes | Firma | Katalog-Nummer | Kommentare (optional) |
| HBSS | Gibco | 114170-112 | |
| Antibiotikum-Antimykotikum 100X | Invitrogen | 15240-062 | |
| Dispase | Gibco | 17105-041 | |
| Collagenase Typ 1 | Worthington | LS004194 | |
| DMEM high glucose 1X | Gibco | 11995-065 | |
| Hitzeinaktiviertem FBS | Invitrogen | 16140-071 | |
| Biofelt 100% PGA | Concordia Medical | FELT01-1005 | Für Polymer Zubereitung nach Ref.4 |
| Poly-L-Milchsäure | Durect | B6002-1 | Für Polymer Zubereitung nach Ref. 4 |
| Typ-I-Kollagen, Rattenschwanz | Sigma-Aldrich | C3867-1VL | Für Polymer Zubereitung nach Ref. 4 |
| Ketoprofen 100 mg / ml | Fort Dodge Animal Health | 71-KETOI-100-50 | |
| LabDiet 5001 Nagetierfutter | LabDiet | 5001 | |
| Septra 200 mg / 40 mg pro 5 ml, USP | Hallo-Tech Pharmacal | 50383-824-16 | |
| Isofluran, USP | Phoenix Pharmaceuticals | 57319-507-06 |
Referenzen
- Grikscheit, T. C., Siddique, A., Ochoa, E. R., et al. Tissue-engineered small intestine improves recovery after massive small bowel resection. Ann. Surg. 240, 748-754 (2004).
- Wales, P. W., Christison-Lagay, E. R. Short bowel syndrome: epidemiology and etiology. Sem....
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Nachdrucke und Genehmigungen
