Summary
In diesem Protokoll w e identifiziert eine neue Population von Melanozyten-ähnlichen Zellen (auch als Herz Melanozyten) in den Herzen von Mäusen und Menschen, die an Vorhofrhythmusstörungen löst bei Mäusen bei.
Abstract
Wir identifizierten eine neue Population von Melanozyten-ähnlichen Zellen (auch als Herz Melanozyten) in den Herzen von Mäusen und Menschen, die an Vorhofrhythmusstörungen Trigger in Mäusen bei. Um die elektrischen und biologischen Eigenschaften von Herz Melanozyten untersuchen wir ein Verfahren, um sie von Mäuseherzen, die wir von denen zur neonatalen Kardiomyozyten Maus zu isolieren abgeleitet isolieren entwickelt. Um gesünder Herz Melanozyten geeignet für umfangreichere Patch-Clamp-oder biochemische Untersuchungen zu erhalten, ein raffiniertes Verfahren entwickelt, die wir für die Isolierung und Beschichtung Herz Melanozyten basierend auf den ursprünglich entwickelt, um Haut-Melanozyten zu isolieren. Die raffinierte Vorgehensweise wird in diesem Beitrag gezeigt und produziert eine größere Anzahl von gesunden Melanozyten-ähnlichen Zellen, die als reine Population oder mit Kardiomyozyten beschichtet werden können.
Introduction
Wir haben vor kurzem identifiziert eine neuartige Zellpopulation im Herzen von Mäusen und Menschen, die Melanin-Synthese Enzyme zu exprimieren und morphologisch ähneln kutanen Melanozyten. Wir als "Herz Melanozyten" Diese Zellen und fanden sie in anatomischen Stellen, an denen Vorhofarrhythmie löst häufig bei Menschen stammen vorhanden sind. Wir fanden auch, Herz Melanozyten dazu beitragen, Vorhofrhythmusstörungen bei Mäusen mit Keimbahn Löschung von DCT. Herz Melanozyten dünn gesamten Maus Vorhof, wo sie weniger als 0,1% aller atrialen Zellen umfassen verteilt. Um die elektrischen und biologischen Eigenschaften von Herz Melanozyten untersuchen wir ein Verfahren, um sie von der Maus mit Herz Cre-induzierbare Melanozyten spezifische Marker zu isolieren entwickelt. Unsere ersten Verfahren wurde von denen zur neonatalen Kardiomyozyten murinen und ergab sehr kleine Zahl von geeigneten für Patch-Clamp-Aufnahmen oder PCR-Analyse entwickelt, Zellen zu isolieren. Jedoch zur Verbesserung der heilenten und die Lebensfähigkeit von Herz Melanozyten, für tiefer gehende Analyse elektrophysiologische oder biochemische Studien entwickelten wir ein verfeinertes Verfahren entwickelt, um von den Melanozyten der Haut zu isolieren. Die beschriebene und in diesem Beitrag gezeigt, Vorgehensweise hat den Vorteil, gesündere Herz Melanozyten, die als reine Population oder mit Kardiomyozyten beschichtet werden können.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Vorbereitung die notwendigen Lösungen und Anlagen
- Erstens, die chirurgischen Instrumente zu sterilisieren (gerade Form einer Pinzette, gebogene Form einer Pinzette, Schere gerade Form und gekrümmter Form einer Schere) durch Autoklavieren sie für 15 min. bei 121 ° C aufweist. Bereiten Sie 2 Sets von Instrumenten, wo ein Satz zum Präparieren Sie sich die Herzen und den anderen Satz verwendet wird, zum Zerkleinern das Gewebe verwendet werden.
- Lösen Sie 1 Päckchen MCDB153 Kulturmedien in 900 ml sterilisiertem, gefiltertem Wasser und langsam rühren, bis das Pulver aufgelöst hat. Fügen Sie 1,2 g Natriumbicarbonat, oder 15,7 ml Natriumhydrogencarbonat-Lösung [7,5% w / v], für jeden Liter Gesamtvolumen von Medium vorbereitet und rühren bis gelöst. Den pH-Wert auf 7,2 durch Zugabe von entweder 1 N HCl oder 1 N NaOH, dann gießen Sie das Medium durch einen 0,2 um Flasche Top-Filter unter sterilen Bedingungen in einer Gewebekultur Haube (Biosicherheitswerkbank). Dann sammeln die Medien und speichern sie bei 4 ° C.
- Bereiten Sie die Ergänzungenin den Kulturmedien (Materialliste). Die Zuschläge sollen die Medien unmittelbar vor der Datenträger für die Plattierung der Zellen benötigt hinzugefügt werden.
- Vorbereitung DPBS mit 10% FBS und Antibiotika (Penicillin und Streptomycin).
- Als nächstes bereiten 0,25% Trypsin-Lösung durch Zugabe von 0,25 g Trypsin (Rinderpankreas, Aktivität> 2500 USP Einheiten / mg, hochreines, USB) und 100 ml DPBS und Antibiotika (Penicillin und Streptomycin).
- Weitere benötigte Ausrüstung benötigt, um dieses Verfahren abschließen gehören ein Stereomikroskop, Petrischalen (10 cm), 50 ml konischen Röhrchen, 40-um-Zelle Siebe, DPBS sowie Antibiotika, 60-mm-Kulturschalen und 35-mm-Kulturschalen.
2. Trenn Herzen von Neugeborenen Maus Pups
- Erstens erhalten P0 bis P2 neonatalen Maus Jungtieren (n = 6 bis 8). Es wird empfohlen, Welpen durch Züchtung Dct-Cre homozygote Weibchen mit Männchen, die heterozygot für entweder die R26R erzeugt verwenden: EYFP Allel oder der Z / EG-Allel, das EtikettMelanozyten-ähnlichen Zellen. Sowohl R26R: EYFP und Z / EG Mäuse sind von Jackson Laboratories (Lager Zahlen 006.148 und 003.920, beziehungsweise).
- Als nächstes einschläfern der Neugeborenen-Maus Welpen, wischen ihre Brust mit einem Alkoholtupfer und legen Sie dann die Welpen in einer 10 cm Petrischale mit DPBS.
- Schneiden Sie die Haut über der Brust und das Brustbein mit sterilisierten Pinzette und Schere und öffnen Sie dann die Brust sorgfältig unter einem Stereomikroskop. Die Herzen der neonatalen Maus Welpen sind sehr klein, so vorsichtig sein, um sicherzustellen, dass die gesamte Herz mit den Vorhöfen angebracht entfernen.
- In DPBS waschen die Herzen und übertragen Sie sie auf einem neuen 10-cm-Petrischale.
3. enzymatische Verdauung
- Bringen Sie die Petrischale mit den ausgeschnittenen Herzen, um eine Gewebekultur Kapuze (Biosicherheitswerkbank) und folgen Sie dann die folgenden Schritte unter Verwendung von sterilen Techniken in der Kapuze.
- Zunächst dreimal waschen die Herzen in sterilen DPBS und Antibiotika.
- Legen Sie die Herzen (n = 6-8) in ein60-mm-Kulturschale und fügen 6-8 ml 0,5% Trypsin-Lösung in die Schale.
- Weiter schneiden die Herzen in kleine Stücke (von weniger als 1 mm in der Größe) und inkubieren bei 37 ° C für 30 min in einer 5% CO 2 Atmosphäre.
- Nach der Inkubationszeit beendet ist, gieße die resultierende Lösung von Herzgewebe und Trypsin von der Schale in eine sterile 50-ml konischen Röhrchen.
- Dann, mit einem 10-ml sterile Pipette, schnell, aber sanft, verreiben Sie die Lösung in der 50-ml konischen Röhrchen 30-50 mal.
- Filtern der resultierenden Lösung durch ein 40 um-Sieb Zelle auf einem neuen, sauberen 50 ml konischen Röhrchen, um das Filtrat zu sammeln.
- Weiter Zentrifugation der 50-ml-Röhrchen bei 240 x g in einer Tischzentrifuge 5 min bei Raumtemperatur. Dann vorsichtig den Überstand absaugen und Pellet resuspendieren übrigen in 6-8 ml steriler DPBS. Wiederholen Sie diesen Schritt 2 weitere Male. Dieser Schritt Holzpellets die Vorhofmyozyten und Herz Melanozyten aber nicht bringen den fiDa Fibroblasten Fibroblasten sind kleiner und werden im Überstand verbleiben.
4. Auflage Herz Melanozyten-ähnlichen Zellen
- Nach der dritten Spülung nach der Zentrifugation vorsichtig ablassen oder absaugen der Waschlösung (DPBS) und das Pellet in 6 ml MCDB Kulturmedien, denen die Ergänzungen wurden hinzugefügt.
- Nun ziehen die resuspendierten Lösung in einem sterilen Transferpipette und legen Sie die Zellen in einer 35-mm-Schale oder in einer Vertiefung einer 6-Well-Platte, und bündeln die isolierten Herzzellen von neugeborenen Mäusen 3 in einem 35-mm-Schale oder auch.
- Geschirr Inkubieren über Nacht bei 37 ° C in einem 5% CO 2 Atmosphäre, absaugen dem Kulturmedium zusammen mit allen anhaftende Zellen und dann die Platten einmal gründlich mit DPBS. Dann fügen Sie frisches Medium zu den Platten und ersetzen die Medien alle 2 Tage. Zellen, die aus embryonalen oder neonatalen Herzen isoliert in Kultur für bis zu 3 Wochen beibehalten werden, während Zellen aus erwachsenen hören isoliertts in Kultur für bis zu 10 Tage gehalten werden.
5. Trennherz Melanozyten-ähnlichen Zellen aus adulten Maus Herz
- Entfernen Sie zunächst die Herzen von reifen Mäuse (3-4 Wochen alt, n = 3) durch eine Mittellinie Sternotomie nach Verabreichung von Heparin 100 U intraperitoneale den Mäusen und dann euthanizing ihnen. Es wird empfohlen, Pentobarbital verwenden, um Mäuse für dieses Verfahren einschläfern, aber dieses Medikament ist nicht an allen Standorten verfügbar.
- Nächsten, waschen Sie die ausgeschnitten Herzen in sterilen DPBS Antibiotika enthalten in einer Gewebekultur Haube (Biosicherheitswerkbank). Drücken Sie die Herzen leicht mit geschwungenen Dissektionszangen, um alle verbleibenden Blut aus ihnen zu entfernen und dann spülen Sie die Herzen in DPBS noch einmal.
- Entfernen Sie den Vorhöfen und AV-Ringraum von den Herzen (diese Strukturen enthalten die Melanozyten-ähnlichen Zellen) und legen Sie die ausgeschnittenen Gewebeproben in einem 35-mm-Schale.
- Schneiden Sie die Herzen in kleine Stücke mit einer gebogenen Schere und Kraftps und fügen 6-8 ml 0,5% Trypsin-Lösung in die Schale. Dann brüten die Gerichte bei 37 ° C für 45-60 min.
- Nun führen Sie die Schritte aus dem oben beschriebenen Verfahren ab Schritt 3.6 ab.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Die in diesem Artikel beschriebene Protokoll ist eine verbesserte Technik im Vergleich zu der, die wir zuvor für die Isolierung Herz Melanozyten von murinen Herz veröffentlicht. Dieses Verfahren setzt die Verwendung von Fluoreszenzmarkern durch Melaninsynthese enzymspezifische Cre-Rekombinase angetriebenen Herz Melanozyten-ähnlichen Zellen zu markieren. Es ist wichtig, um einen Marker zu verwenden, um Herz Melanozyten Etikett beim Arbeiten mit frisch isolierten embryonalen oder neonataler Zellen, da die morphologischen Unterschiede, die Herz Melanozyten von Vorhofmyozyten unterscheiden noch nicht entwickelt wurde (1A). Wie in 1A gezeigt, wenn die Isolationsschritt gut gegangen, wird eine ziemlich große Anzahl von Vorhofmuskelzellen und Herz Melanozyten an die Laminin beschichtete Schale mit nur wenigen nicht-adhärenten Zellen haften. In diesem Fall werden die anhaftenden Zellen flach auf dem Boden der Schale (gelb Pfeilspitzen 1A, Pfeilspitze) erscheinen. Andererseits, wenn das Verfahdure nicht gut funktioniert die meisten der Zellen werden nicht haft und sehen oft sphärischen und aufgerundet (hellblau Pfeilspitzen, 1A).
Wenn die isolierten Zellen werden mit grünen Fluoreszenz-Bildgebung sichtbar gemacht, ist es klar, welche Zellen Herz Melanozyten sind, und die Zellen sind Vorhofmyozyten (Abbildung 1). Wie oben im Protokoll erwähnt (Schritt 3.9) werden die Fibroblasten aus dem Pool der isolierten Vorhofzellen mit geringer Kraft Zentrifugation, die die größeren Vorhofmyozyten und Herz Melanozyten Holzpellets, aber nicht bringen die kleineren kardialen Fibroblasten entfernt. Die frisch isolierten Zellen können jetzt einzelne Zelle elektrophysiologischen Ableitungen (Abbildung 2), Einzelzelle RNA-Analyse oder biochemischen Assays verwendet werden.
Wir haben auch kultiviert und gepflegt isoliert Neugeborenen oder embryonale Zellen Vorhof Verwendung dieses Protokolls für bis zu 21 Tage. Mit Hilfe der in dieser beschriebenen KulturbedingungenProtokoll, werden die Herz Melanozyten-ähnlichen Zellen weiter zu differenzieren und sich vermehren, während die Vorhofmyozyten neigen dazu, von der Schale lösen und sterben innerhalb von 2-3 Tagen, nachdem sie getrennt werden. Gezeigt in 3A sind gesund Herz Melanozyten 5 Tage nach wurden sie von einem neonatalen Maus Herz isoliert. Beachten Sie das Fehlen von atrialen Myozyten um diese Zellen (im Gegensatz zu der in 1 gezeigten frisch isolierten Zellen). Darüber hinaus haben diese Herz Melanozyten umfangreichen dendritischen Prozesse entwickelt und ähneln kutanen Melanozyten, die auch in der Kultur für die gleiche Anzahl von Tagen (3B) gewesen.
Abbildung 1. (A) DIC und (B) GFP Bilder von frisch isolated Vorhofzellen aus embryonalen (E19.5) Dct-Z / EG Maus Welpen. Der weiße Pfeil kennzeichnet die Herz Melanozyten in beiden Panels. Beachten Sie, dass, ohne die Hilfe des Fluoreszenzmarkers ist das Herz Melanozyten schwer zu identifizieren und zu unterscheiden von den atrialen Myozyten (gelbe Pfeile) an der Schale befestigt ist. Die hellblauen Pfeilspitzen weisen auf Vorhofzellen, die nicht gut auf dem Teller befestigt sind.
Abbildung 2. Dct - / - Herz Melanozyten zeigen Dauer verlängerte Aktionspotential. Stromzange Aufnahmen von (A) Herz Dct +/- und (B) Herz Dct - / - Zellen demonstrieren in Abwesenheit von DCT erhöhte Aktionspotentialdauer. Ruhepotential der DCT +/- Zelle -62 mV, während die DCT - / - Zellen ein Ruhepotential von über-60 MV. Wiedergabe mit Genehmigung aus Levin et al. J. Clin. Investieren. 119, 2920-2936 (2009).
Abbildung 3. Repräsentative Bilder von isolierten (A) Herz Melanozyten-ähnlichen Zellen und (B) der Haut Melanozyten. Melanozyten wurden aus den Herzen und Haut neugeborenen Mäusen (P1), die jeweils getrennt und anschließend für 5 Tage kultiviert.
Abbildung 4. Dct-exprimierenden Zellen füllen das Herz. (A) In-situ-Hybridisierung eines E13.5 Maus Herz zeigt Dct Ausdruck(Gefüllte Pfeile) um die Lungenvenen os (offene Pfeilspitze). (B) Immunfluoreszenzfärbung von DCT-positiven Zellen (Pfeilspitzen) in den Lungenvenen. (C) X-gal-Färbung von DCT-positiven Zellen in der hinteren Atrium eines E16.5 Maus DCT LacZ Herz (Pfeile). (D) X-Gal-Färbung in einer E17.5 DCT LacZ Maus Herz entlang der RA Septum in den Bereichen des Foramen ovale, Koronarsinus os und Vena cava inferior; Einsatz scale = 500 um. (E) Erwachsene Maus (p60) vor der Kreuzung eine DctCre +/- und R26R Maus resultierenden zeigt LacZ-positive Zellen (Pfeile) in den Lungenvenen und linken Vorhof. (F) DCT-positiven Zellen durch Immunfluoreszenzfärbung (Pfeile) auf das Endothel von einem chirurgisch entfernten menschlichen Lungenvenen detektiert. Maßstab = 500 um in allen Platten außer Platten (B und D; scale = 100 um) und Panel (F; scale = 50 um). Abkürzungen: PV, Lungenvenen; LA, linken Vorhof; Ao, der Aorta; PA, Pulmonary Arterie; RA, rechten Vorhof; IVC, untere Hohlvene; FO, Foramen ovale; CS, koronaren Sinus. Wiedergabe mit Genehmigung aus Levin et al. J. Clin. Investieren. 119, 2920-2936 (2009).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Herz Melanozyten sind in anatomischen Stellen innerhalb des Herzens, die häufig Anlass zu Vorhofarrhythmie Trigger vorhanden. Diese Regionen umfassen die Lungenvenen, den atrioventrikulären Annulus, das hintere linke Atrium und das Foramen ovale (Abbildung 4). Um die Rolle dieser Zellen in Arrhythmogenese spielen verstehen, entwickeln wir Techniken, um sie zu isolieren und studieren ihre Physiologie. Jedoch haben wir erkannt, daß eine Verbesserung dieser Technik ergeben gesünder und größeren Mengen von Herz Melanozyten würden weitere Studien zu ermöglichen, die Reaktion der Herz Melanozyten auf exogene Stimuli zu untersuchen. Darüber hinaus kann eine verbesserte Isolation Techniken ermöglichen auch Studien, um die Wechselwirkung von Herz Melanozyten mit Vorhofmyozyten während der normalen Physiologie und Krankheit zu untersuchen.
Dieser Beitrag beschreibt ein Verfahren zur Isolierung von lebensfähigen Melanozyten-ähnliche Zellen aus der Maus, die wir von Herzen Protokolle entwickelt, um isol entwickeltaß Melanozyten der Haut. Der kritische Schritt in diesem Protokoll wird die Extraktion der Melanozyten-ähnlichen Zellen aus dem Herzen. Während die Isolierung von neonatalen Herz Melanozyten Herzen ist relativ einfach, Extrahieren Herz Melanozyten aus dem reifen Herz ist viel schwieriger, aufgrund der erhöhten Menge des interstitiellen Fibrose. In diesem Protokoll haben wir Trypsinverdau zu Melanozyten-ähnliche Zellen aus dem reifen Herzen extrahieren. Um dieses Protokoll getestete verschiedene Enzymkombinationen, die von verschiedenen Konzentrationen von Trypsin, Collagenase und Dispase besteht entwickeln.
Wir fanden, daß die Behandlung von Neugeborenen Vorhöfe mit einer Kombination von Kollagenase (für die ersten 30 min), gefolgt von Trypsin (für die nächsten 15 min) zunächst höhere Ausbeuten an Melanozyten-ähnlichen Zellen hergestellt, jedoch werden die isolierten Zellen waren weniger gesund mit verringerter Lebensfähigkeit. Auf der anderen Seite, die Verdauung mit Trypsin allein eine moderate Anzahl von gesunden Melanozyten-ähnliche Zellen aus m hergestelltratur Maus Herzen. Wir empfehlen daher, nur unter Verwendung von Trypsin zu Melanozyten-ähnliche Zellen aus reifen murinen Herzen zu isolieren. Darüber hinaus haben wir festgestellt, dass kräftig nach Verreiben des Trypsinverdau reife Mäuseherzen hergestellt Gülle verbessert die Ausbeute an lebensfähigen Melanozyten-ähnlichen Zellen. Wir sollten erwähnen, dass Trypsin hat das Potential, teilweise verdauen Membrankanäle oder Ladungsträger, und das kann bei der Durchführung von Kanaldichte Patch-Clamp-Untersuchungen beeinflussen. Während wir haben nicht eine strenge Analyse durchgeführt, um festzustellen, ob Trypsin Verdauung wirkt sich auf die Stromdichte von isolierten, reife Melanozyten-ähnlichen Zellen haben wir keine nennenswerten Auswirkungen auf die Ströme oder Aktionspotentiale in den Studien, die wir durchgeführt, die dieses Protokoll bemerkt.
Herz Melanozyten-ähnliche Zellen sind eine sehr spärliche Zellpopulation im Herzen (weniger als 0,1% der atrialen Zellen), die morphologisch ähnlich kutanen Melanozyten (Figur 1 und Figur 3 </ Strong>). Aufgrund der Tatsache, gibt es relativ wenige im Herzen vorliegenden Herz Melanozyten; bis vor kurzem haben wir nur in der Lage gewesen, um sie für Einzelzellassays (dh Patch-Clamp-Aufzeichnung oder Einzelzell-PCR) zu verwenden. Wir haben jedoch größere Mengen von Herz Melanozyten durch die Bündelung von 20-30 Neugeborenen oder 5-8 reife Herzen erhalten, und fand diese Vorgehensweise erzeugt eine ausreichende Menge an Gewebe für die Durchführung Immunoblot oder biochemischen Assays. Darüber hinaus angesichts der geringen Anzahl von Melanozyten-ähnlichen Zellen in der Maus-Herzen, die Ausbeute dieser Zellen zu verbessern, nachdem sie getrennt wurden wir legen oft 15-20 mm rund, Teflon-Einsätze auf der 35-mm-Gerichte mit sterilisiert Vakuumfett . Die Zellen können dann in den Einsätzen angeordnet, um den Beschichtungsbereich zu verringern und erhöht die Dichte. Mit Teflon-Einsätzen verbessert auch die Lebensfähigkeit der Melanozyten-ähnlichen Zellen nach ihrer Isolierung und während des Beschichtungs Zeitraum als gut.
Einige Herz Melanocyte artigen Zellen eine bipolare Morphologie nach der Isolierung, die wir glauben, eine weniger differenzierten Zustand der Zellen. Darüber hinaus haben wir festgestellt, dass die Kultivierung Herz Melanozyten für 3 Tage nach der Isolierung scheint eine weitere Differenzierung der Melanozyten-ähnlichen Phänotyp, wo die Zellen beginnen, Dendriten bilden induzieren. Wir haben auch festgestellt, dieses Protokoll ergibt Melanozyten-ähnliche Zellen aus reifen Herzen, die für bis zu 10 Tage in Kultur gehalten werden können. Doch mehr als 10 Tagen in Kultur Melanozyten-ähnlichen Zellen, isoliert aus reifen Herzen stoppt wuchernden und können seneszenten werden. Isoliert und ausplattiert Herz Melanozyten kann für zellulare elektrophysiologische Analyse oder anderen molekularen / zellulären biologischen Analyse wie RNA-Profiling oder Studien verwendet werden, um die physiologischen Reaktionen auf exogene Faktoren zu bewerten.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Wir haben nichts zu offenbaren.
Acknowledgments
Diese Arbeit wurde vom National Institutes of Health Award R01 HL105734 zu VVPMDL gelagert ist, zum Teil, von der National Institutes of Health Research Career Award K08 HL094748. VVP ist eine innovative Forscher von der American Heart Association von Grant 11IRG900384 unterstützt.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| MCDB 153 | Sigma-Aldrich | M7403 | Dissolve in water |
| DPBS, no calcium no magnesium | Invitrogen | 14190136 | Stock conc.: 1x Working conc.: 1x |
| Penicillin-streptomycin | Invitrogen | 15140163 | Stock conc.: 100x Working conc.: 1x |
| Fetal Bovine Serum | Life Technology | Certified | Working conc.: 4% |
| TPA | Sigma-Aldrich | P1585 | Dissolve in DMSO Stock conc.: 3.2 μM Working conc.: 32 nM |
| Transferrin | Sigma-Aldrich | T8158 | Dissolve in DPBS Stock conc.: 0.1 mg/ml Working conc.: 1 μg/ml |
| Dibutyryl cyclic AMP | Sigma-Aldrich | D0627 | Dissolve in DPBS Stock conc.: 0.5 mM Working conc.: 5 μM |
| Insulin | Sigma-Aldrich | I6634 | Dissolve in 10 mM acetic acid Stock conc.: 1 mg/ml Working conc.: 5 μg/ml |
| Basic FGF | BD Biosciences | 354060 | Dissolve in water Stock conc.: 4 ng/μl Working conc.: 4 ng/ml |
References
- Hornyak, T. J., et al. Mitf dosage as a primary determinant of melanocyte survival after ultraviolet irradiation. Pigment Cell Melanoma Res. 22, 307-318 (2009).
- Yonetani, S., et al. In vitro expansion of immature melanoblasts and their ability to repopulate melanocyte stem cells in the hair follicle. J. Invest. Dermatol. 128, 408-420 (2008).
- Levin, M. D., et al. Melanocyte-like cells in the heart and pulmonary veins contribute to atrial arrhythmia triggers. J. Clin. Invest. 119, 3420-3436 (2009).
- Patel, V. V. Novel insights in the cellular basis of atrial fibrillation. Expert Rev. Cardiovasc. Ther. 8, 907-915 (2010).
- Sviderskaya, E. V., et al. Functional neurons and melanocytes induced from immortal lines of postnatal neural crest-like stem cells. FASEB J. 23, 3179-3192 (2009).
- Sviderskaya, E. V., et al. P16Ink4a in melanocyte senescence and differentiation. J. Natl. Cancer. Inst. 94, 446-454 (2002).
- Cook, A. L., et al. Human melanoblasts in culture: Expression of BRN2 and synergistic regulation by fibroblast growth factor-2, stem cell factor, and endothelin-3. J. Invest. Dermatol. 121, 1150-1159 (2002).
- Fang, D., et al. Defining the conditions for the generation of melanocytes from human embryonic stem cells. Stem Cells. 24, 1668-1677 (2006).
- Brito, F. C., et al. Timeline and distribution of melanocyte precursors in the mouse heart. Pigment Cell Melanoma Res. 21, 464-470 (2008).
- Yajima, I., et al. The isolation of heart melanocytes is specified and the level of pigmentation in the heart may correlate with coat color. Pigment Cell Melanoma Res. 21, 471-476 (2008).
