Summary

Синергетический эффект от видимого света и гентамицин на<em> Pseudomona палочки</em> Микроорганизмы

Published: July 02, 2013
doi:

Summary

Мы покажем, что биомедицинские устройства разработаны с участием непрерывным или импульсным лазер видимого диапазона на основе лечения, которое в сочетании с лечения антибиотиками (гентамицин), приводит к статистически значимому синергетический эффект приводит к снижению жизнеспособности<em> P. палочки</em> PAO1, на 8 журнала по сравнению с антибиотиками в лечении.

Abstract

В последнее время появились ряд публикаций по бактерицидным действием видимого света, большинство из них утверждают, что синяя часть спектра (400 нм-500 нм) несет ответственность за убийство различных патогенов 1-5. Фототоксическая эффект синего света было предложено быть результатом светоиндуцированная активных форм кислорода (АФК), образование эндогенного бактериального фотосенсибилизаторами которые в основном поглощают свет в синей области 4,6,7. Есть также сообщения биоцидного действия красного и ближнего инфракрасного 8, а также зеленый свет 9.

В настоящем исследовании мы разработали метод, который позволил нам охарактеризовать действие зеленого цвета наивысшей мощности (длина волны 532 нм) непрерывный (CW) и импульсной модуляцией добротности (QS) свет на синегнойной палочкой. Используя этот метод, мы также изучали влияние зеленого света в сочетании с лечения антибиотиками (гентамицин) на бактерии жизнеспособность. P. палочка является ACommon noscomial оппортунистических возбудителем различных заболеваний. Штамм довольно устойчивы к различным антибиотикам и содержит многие предсказывали ACRB / Mex типа RND лекарственной отток систем 10.

Метод использовали свободно живущие стационарной фазы грамотрицательных бактерий (штамм P. палочки PAO1), выращенных в бульоне Лурия (LB) среде подвергается добротности и / или непрерывные лазеры с добавлением и без добавления антибиотика гентамицина. Жизнеспособность клеток определяли в различные моменты времени. Полученные результаты показали, что лазерное лечение только не снижает жизнеспособность клеток по сравнению с необработанным контролем и что гентамицин только в лечении только привели в 0,5 журнал снижение количества жизнеспособных для P. палочки. Комбинированный лазер и гентамицина лечение, однако, в результате синергический эффект и жизнеспособность P. палочка была снижена на 8 бревна.

Предлагаемый способ может дополнительно быть реалиmented через развитие катетер как устройство, способное инъекционным раствором антибиотика в инфицированные органа одновременно освещающего область света.

Protocol

1. Бактериальной культуры Грамотрицательные P. палочки штамма PAO1 выращивали в бульоне Лурия (LB) при 37 ° С в течение 18 час. Культуре клеток затем центрифугировали при 7500 оборотов в минуту (оборотов в минуту) в течение 5 мин и надосадочную жидкость удаляли. Бактерий ресу…

Representative Results

Лазерной установки на основе схематически представлены на рисунке 1. Первое экспериментальное условие использованы CW Nd: YAG лазера с длиной волны 532 нм (вторая гармоника Nd: YAG) и средней оптической мощностью 200 мВт. Этот луч был разделен на две оптических путей с использованием оп?…

Discussion

Фототерапии области передовых междисциплинарных исследований в последние годы становится одним из перспективных подходов для лечения многочисленных заболеваний. В связи с этим использование света в видимом диапазоне была тщательно изучена. Например, было установлено, что инфициров…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments (optional)
Lauria Broth Difco 241420
Gentamycin Sigma G1914
Bacto Agar Difco 231710

References

  1. Feuerstein, O., Persman, N., Weiss, E. I. Phototoxic Effect of Visible Light on Porphyromonas gingivalis and Fusobacterium nucleatum: An In Vitro Study. Photochemistry and Photobiology. 80, 412-415 (2004).
  2. Enwemeka, C. S., Williams, D., Enwemeka, S. K., Hollosi, S., Yens, D. Blue 470-nm light kills methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) in vitro. Photomed. Laser Surg. 27, 221-226 (2009).
  3. Guffey, J. S., Wilborn, J. In vitro bactericidal effects of 405-nm and 470-nm. Photomed. Laser Surg. 24, 684-688 (2006).
  4. Lipovsky, A., Nitzan, Y., Friedman, H., Lubart, R. Sensitivity of Staphylococcus aureus strains to broadband visible light. Photochem. Photobiol. 85, 255-260 (2008).
  5. Lipovsky, A., Nitzan, Y., Lubart, R. A possible Mechanism for visible light induced wound healing. Lasers in Surgery and Medicine. 40, 509-514 (2008).
  6. Lipovsky, A., Nitzan, Y., Gedanken, A., Lubart, R. Visible light-induced killing of bacteria as a function of wavelength: Implication for wound healing. Lasers in Surgery and Medicine. 42, 467-472 (2010).
  7. Feuerstein, O., Ginsburg, I., Dayan, E., Veler, D., Weiss, E. Mechanism of Visible Light Phototoxicity on Porphyromonas gingiwalis and Fusobacferium nucleaturn. Photochemistry and Photobiology. 81, 1186-1189 (2005).
  8. Nussbaum, E. L., Lilge, L., Mazzulli, T. Effects of 630-, 660-, 810-, and 905-nm laser irradiation delivering radiant exposure of 1-50 J/cm2 on three species of bacteria in vitro. J. Clin. Laser Med. Surg. 20, 325-333 (2002).
  9. Dadras, S., Mohajerani, E., Eftekhar, F., Hosseini, M. Different Photoresponses of Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa to 514, 532, and 633 nm Low Level Lasers In Vitro. Current Microbiology. 53, 282-286 (2006).
  10. Stover, C. K., Pham, X. Q., Erwin, A. L. Complete genome sequence of Pseudomonas aeruginosa PAO1, an opportunistic pathogen. Nature. 406, 952-964 (2000).
  11. Hamblin, M. R., Demidova, T. N. Mechanisms of low level light therapy. Proc. SPIE. 6140, 1-12 (2006).
  12. Krespi, Y. P., Stoodley, P., Hall-Stoodley, L. Laser disruption of biofilm. Laryngoscope. 118, 1168-1173 (2008).
  13. Reznick, Y., Banin, E., Lipovsky, A., Lubart, R., Zalevsky, Z. Direct laser light enhancement of susceptibility of bacteria to gentamycin antibiotic. Opt. Commun. 284, 5501-5507 (2011).

Play Video

Cite This Article
Reznick, Y., Banin, E., Lipovsky, A., Lubart, R., Polak, P., Zalevsky, Z. The Synergistic Effect of Visible Light and Gentamycin on Pseudomona aeruginosa Microorganisms. J. Vis. Exp. (77), e4370, doi:10.3791/4370 (2013).

View Video