Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove

Neuroscience

En Molekylær Udlæsning af Langsigtet olfaktorisk Adaptation in doi: 10.3791/4443 Published: December 22, 2012

Summary

Her beskriver vi en molekylær udlæsning af langsigtet olfaktoriske tilpasning i

Abstract

Under vedvarende stimulation mest sensoriske neuroner vil tilpasse deres svar ved at nedsætte deres følsomhed over for signalet. Tilpasningen svar hjælper form opmærksomhed og også beskytter celler fra overstimulering. Tilpasning i den olfaktoriske kredsløb C. elegans blev først beskrevet af Colbert og Bargmann 1,2. Her forfatterne definerede parametre af det olfaktoriske tilpasning paradigme, som de brugte til at designe en genetisk skærm til at isolere mutanter defekte i deres evne til at tilpasse sig flygtige dufte følt af Amphid Wing celler type C (AWC) sensoriske neuroner. Når vildtype C. elegans dyrene udsættes for en attraktiv AWC-affølte lugt 3 for 30 min de vil tilpasse deres modtagelighed over for lugt og vil ignorere tilpasning af lugt i et kemotaksi adfærdsmæssige assay for ~ 1 time. Når vildtype C. elegans dyrene udsættes for et attraktivt AWC-fornemmede lugt for ~ 1 time, de vil derefter ignorere den tilpasning af lugt i achemotaxis adfærdsmæssige assay for ~ 3 timer. Disse to faser af olfaktoriske tilpasning i C. elegans blev beskrevet som kortsigtet olfaktoriske tilpasning (induceret efter 30 min lugt eksponering), og langvarig olfaktoriske tilpasning (induceret efter 60 min lugt eksponering). Senere arbejde fra L'Etoile et al., 4 afslørede en proteinkinase G (PKG) kaldet EGL-4, som er nødvendig for både den kortsigtede og langsigtede olfaktoriske tilpasning i AWC neuroner. Den EGL-4-protein indeholder en nuklear lokalisering sekvens, der er nødvendig for langsigtede olfaktoriske tilpasningsforanstaltninger men undværlige for kortsigtede olfaktoriske tilpasningsforanstaltninger i AWC 4. Ved at mærke EGL-4 med et grønt fluorescerende protein, var det muligt at visualisere lokaliseringen af ​​EGL-4 i AWC ved langvarig lugt eksponering. Brug af denne fuldt funktionelle GFP-mærkede EGL-4 (GFP :: EGL-4) molekyle, vi har været i stand til at udvikle en molekylær udlæsning af langvarig lugte tilpasning i AWC 5. Brug af denne molecular udlæsning af olfaktoriske tilpasning har vi været i stand til at udføre både frem og bak genetiske skærme til at identificere muterede dyr, der udviser defekte subcellulære lokalisering mønstre af GFP :: EGL-4 i AWC 6,7. Her beskriver vi: 1) opførelse af GFP :: EGL-4 udtrykker dyr, 2) for dyrkning af dyr for langsigtede lugt-induceret kernetranslokation assays, og 3) scoring af den langsigtede lugt-induceret kernetranslokation begivenhed og nyttiggørelse (re-overfølsomhed) fra det nukleare GFP :: EGL-4 stat.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. Konstruktion af GFP Tagged EGL-4 Udtrykke Dyr

  1. Klone translationel fusion GFP :: EGL-4 under promotoren for ODR-3-genet (brug 2678 bp umiddelbart opstrøms for startkodonen): (p) ODR-3 :: GFP :: EGL-4. Den ODR-3 promotoren driver ekspression i de amphid neuron par: AWA, AWB, AWC, og svagt i ASH.
  2. Injicer plasmid (p) ODR-3 :: GFP :: EGL-4 ind i vildtype (N2) dyr ved 50 ng / gl med co-injektion markører ved hjælp af standard kim-line transformationsteknikker 8: (p) ofm-1: : GFP 9 (25 ng / ul), og (p) ODR-1 :: dsRed 10 (25 ng / ul). The ODR-1 promotoren driver ekspression i AWC og AWB amphid neuron par, og ofm-1-promotoren driver ekspression i coelomocytes.
  3. Underkaste de transgene dyr, der udtrykker de ekstrakromosomale arrays beskrevet i trin 1,2 til Ultra Violet (UV) / trimethylpsoralen (TMP) integration protokol11.
  4. Bleach synkronisere dyrene 12 og dyrke dem på nematodevækst Media (NGM) plader indeholdende OP50 E. coli til L4 fase. Vask L4 dyr off NGM plader med M9-puffer for at fjerne OP50 E. coli-bakterier.
  5. Fjern M9-puffer, og der tilsættes 50 til 100 pi af 30 ug / ml TMP arbejdsopløsning på ormen pelleten i 1,5 ml mikrocentrifugerør. Wrap 1,5 ml mikrocentrifugerør i folie til at blokere omgivende lys, og omrystes forsigtigt på en rotator i 15 minutter i folieomviklede 1,5 ml mikrocentrifugerør. Overfør orme i TMP / orm løsning til en stor unseeded NGM plade.
  6. Expose orme på NGM plade til UV 350 μJ (X100) med en Stratalinker 2400. Derpå tilsættes orme til en OP50 indeholdende NGM plade og inkuberes i mørke i 5 timer.
  7. Pick 50 transgene orme til cirka 10 seedede plader (2-5 orme hver plade). Overførsel P0 er til nye plader hver 24 timer i 3 dage.
  8. Pick 250 klonal F1 ennimals (1 dyr pr plade). Klon ud 2-4 F2 dyr fra hver F1 plade. Tjek F3 dyr at lede efter en 100% transmissionslinie ved at kigge på (p) ofm-1 :: GFP-ekspression mønster under et dissekerende fluorescensmikroskop.
  9. Udkrydsning den endelige integrerede linje (r) med vildtype N2 dyr 5 gange. Vi vil henvise til den endelige integreret linje som pyIs500, og GFP-mærket EGL-4 molekyle som GFP :: EGL-4.

2. Dyrkning og vedligeholdelse af dyr til kernetranslokation Assays

  1. Dyrk de pyIs500 dyr ved 25 ° C på standard 10 cm NGM plader (se nedenfor for opskrift) podet med OP50 E. coli-bakterier 13 (figur 1).
  2. På dag 1, pick 4-5 L4 pyIs500 dyr fra plader dyrket ved 25 ° C på fem separate 10 cm OP50 E. coli podes pladerne om og inkuberes ved 25 ° C (dvs. 4-5 L4 dyr per plade).
  3. På dag 4, vaske voksen populations af pyIs500 dyr væk fra de store NGM plader under anvendelse af S-Basal buffer (se nedenfor for opskrift). Bruge engangs glaspipetter at overføre dyr, som de vil holde sig til den side af plast pipettespidser.

3. Langsigtet Lugt Induceret kernetranslokation Assays

  1. Vask pyIs500 dyr 3 gange i S-Basal at fjerne bakterier. Må ikke centrifugeres dyr mellem hver vask, men snarere, at dyrene kan bosætte ved hjælp af tyngdekraften i en stationær 1,5 ml mikrocentrifugerør. Det er kritisk at sikre alle bakterier fjernes, og at NGM pates er fri for forurening, som resterende bakterier negativt vil påvirke resultatet af translokationen assay. Vi har også vist sig, at autoklavering af 1,5 ml mikrocentrifugerør frembringer en "sticky" egenskab på de indvendige vægge af røret, der forårsager dyr at klæbe til siderne, og så bruge ikke-autoklaverede 1,5 ml mikrocentrifugerør.
  2. Mens dyrene bilæggelse mellem hver vask, fyldes op tHan tilpasning opløsning. Tilsættes 100 ml S-Basal puffer til en 100 ml eksamen cylinder. Læg tilpasning lugt til S-Basal og forsegle cylinderen ved hjælp af en strimmel af parafilm. Hvis der udføres benzaldehyd tilpasning tilsættes 7,5 ul benzaldehyd til 100 ml af S-Basal, for butanon tilpasning tilsættes 11 pi 2-butaone til 100 ml af S-Basal. Vend forsigtigt (ikke ryste den) afgangsklassen cylinder, der indeholder S-basal og lugt 30 gange for at skabe en ensartet emulsion.
  3. Efter den sidste vask i S-Basal, at dyrene kan afvikle og fjerne al væske. Mærk et rør "+ ve" eller "tilpasse" og den anden tube "-ve" eller "unadapt". Derefter tilsættes 1 ml af tilpasningen mix til tilpasning mikrocentrifugerør (+ ve), og der tilsættes 1 ml af S-Basal til den ikke-tilpassede kontrol mikrocentrifugerør (-ve). Forsøge at holde antallet af dyr mellem 100 og 200 i hvert rør. Med nogle praksis, er det muligt at estimere det omtrentlige antal dyr i en pellet efter øjemål.
  4. Placer en 1,5 ml mikrocentrifugerør cap protektortil hvert rør (forhindrer låg fra popping åben) og placere rørene på en rotator for 80 min. Vi har fundet, at lugt eksponering mellem 60 min og 80 min giver tilsvarende resultater (både resulterer i langsigtede tilpasning reaktioner). Men 80 min eksponering giver mere konsistente resultater i vores hænder. Således alle vores langsigtede tilpasning assays kan standardiseres ved at anvende en 80 min lugt udsættelse (figur 2).
  5. Efter 80 minutter vaskes dyr 3 gange i S-basal. Tillad dyr at bosætte sig ved hjælp af tyngdekraften mellem hver vask.

4. Kortsigtede Lugt-inducerede kernetranslokation Assays

  1. I tilfælde af kortvarig lugt tilpasning, skal du bruge den samme protokol som pr langsigtede lugt-inducerede translokation assays (trin 3,1-3,4), men i stedet for at inkubere pyIs500 dyr i tilpasningen lugt i 80 min, skal du bruge en 30 min eksponering . Kvantificeringen af ​​lugt-inducerede kernetranslokation assays beskrevet nedenfor (Trin 5) er det samme for lang og kort-term engagementer.

5. Scoring af Lugt-induceret kernetranslokation Begivenhed

  1. Make 2% agarose puder indeholdende 5 mM natriumazid (NaN3) ved opløsning af gelelektroforese agarose i dH 2 0. Placere et enkelt dråbe smeltet agarose indeholdende NaN3 på et objektglas. Umiddelbart placere et andet objektglas på det første dias at flade dråbe smeltet agarose. Efterlad i 30 sekunder, og derefter forsigtigt drille hinanden på mikroskopobjektglas mens den anden objektglas med en flad agarose pude af ~ 1 mm.
  2. Efter den sidste vask i S-Basal, tillade orme at bosætte sig i 1,5 ml mikrocentrifugerør og fjerne al væske. Derpå tilsættes dyrene dråbevis over på agarose-puder af flere mikroskopobjektglas. Det er vigtigt at holde antallet af dyr pr dias til mellem 50 og 100. Alt for mange dyr pr slide vil komplicere scoring og ofte skaber et spredende lys efter blåt lys excitation. Overskydende væske kanvære onde fra agarosen pad med en lille Kim-tørre. Placere en 0,5 mm glas dækglas på indlægget og lad stå i 2 min for at muliggøre NaN3 at immobilisere dyrene. Bemærk, kan dyrene udvindes fra dias efter scoring. Dyrene vil komme fra NaN 3 bedøvelsesmiddel efter ~ 1 time, hvis det overføres til en seeded NGM plade ind i en dråbe M9 Buffer.
  3. På dette punkt er det bydende nødvendigt, at hver eksperimentator udtænke en nøgle at spore, hvilke dias er den eksperimentelle (+ ve) dias og som glider er kontrol (-ve) slide, og videregive de dias til en anden person, der vil blindt score GFP: EGL-4 lokalisering mønster. Dette vil styre for en eksperimentator bias.
  4. Score mellem 50 og 100 dyr pr slide ved hjælp af en opretstående fluorescerende mikroskop med 10x, 40x og 63x forstørrelse mål og GFP / RFP filtre. For det første skal du finde dyr under 10X forstørrelse med anvendelse lys-field illumination. For det andet, skal du finde AWC neuron ved at slukke for bright-feltbelysning og ved hjælp af RFP-filter. De (p) ODR-1 :: dsRed drev udtryk i AWB og AWC neuroner. AWC neuroner har forskellige ovale cellelegemer i forhold til AWB cellelegemer, som er mindre og cirkulær form (fig. 2).
  5. Når AWC celle krop er blevet placeret, skal du skifte til GFP filter og optage lokaliseringen af ​​GFP: EGL-4 som nukleare eller cytoplasmisk. Ved hjælp af en tæller kan eksperimentatoren at holde udkig i okularet, mens scoring diaset. Bemærk: Steps 5,1-5,5 gentages mindst 3 gange på forskellige dage til frembringelse statistisk signifikante data (figur 1-2).

6. Et tilsyn GFP-mærkede EGL-4 under Recovery fra Langsigtet Lugt Adaptation

  1. Efter trin 3,5, opdele befolkningen i pyIs500 dyr i flere portioner og score for nuklear versus cytoplasmisk GFP :: EGL-4 i AWC på tidspunkt nul (dvs. efter 80 min eksponering) og multiple efterfølgende tidspunkter (figur 3).
  2. Overføre både kontrollen (-ve) og eksperimentelle (+ ve) dyr bruge engangs glaspipetter på NGM plader.
  3. Tillad dyr at inddrive for forskellige længder af tid og revurdere lokaliseringen af ​​GFP :: EGL-4in AWC på hvert tidspunkt som i trin fra 5,1 til 5,5.

7. Materialer

NGM plader: For 1 liter tilsættes til 1 L ddH 2 0: 21 g Bacto-agar, 3 g natriumchlorid (NaCl), 2,5 g Bacto-pepton. Autoklave medie. Efter autoklavering afkøles agar indtil temperaturen læser 54 ° C. Tilføj de følgende opløsninger: 25 ml 1 M kaliumphosphatpuffer, 1 ml 1 M magnesiumsulfat (MgSO4), 1 ml 1 M calciumchlorid (CaCl2), 1 ml cholesterol i ethanol (5 mg / ml stamopløsning).

1 M Dibasisk K 2 HPO 4 174,2 g / mol: For 500 ml: I 400 ml ddH 2 O, opløses 87,1 g Dibasic K 2 HPO 4. Juster lydstyrken til 500 L med ddH 2 O. Filtrere sterilisere ved hjælp af en 500 ml sterilt filter Unit.

1 M Monobasisk KH 2 PO 4 136,1 g / mol: For 1 L: I 800 ml ddH 2 O, opløses 136,1 g Monobasisk KH 2 PO 4. Juster lydstyrken til 1 L med ddH 2 O. Filtrere sterilisere ved hjælp af en 500 ml sterilt filter Unit.

1 M kaliumphosphat (K 3 PO 4) Buffer pH 6,0: I 1 L: I en 1 L Steril filterenhed, der tilsættes 868 ml 1 M monobasisk KH 2 PO 4. Lad enheden til at filtrere igennem, hvorefter der tilsættes 132 ml af 1 M Dibasisk K 2 HPO 4. Lad enheden til at filtrere al væsken. Fjern filterenhed og justere pH til 6,0. Opbevares ved stuetemperatur.

S-Basal: For 1 L: tilsæt 50 ml 1M K 3 PO 4 Buffer, pH ~ 6,0, og 20 ml 5M NaCl aq. Fyld til 1 L medddH 2 O. Autoklavér Solution.

M9: For 1 liter: 3 g KH 2 PO 4, 6 g Na 2 HPO 4, 5 g NaCI, 1 ml 1 M MgSO4, H 2 O. Fyld til 1 L med ddH 2 0. Steriliseres ved autoklavering.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Et eksempel på lokalisering mønster af GFP :: EGL-4in den AWC før og efter langvarig lugt eksponering vist i figur 2. Forud for langvarig lugt eksponering GFP :: EGL-4 er lokaliseret i cytosolen af AWC (figur 2B), og efter 80 min lugt eksponering GFP :: EGL-4 er lokaliseret til kernen i AWC (figur 2D). På det adfærdsmæssige plan, er dyr med cytosolisk GFP :: EGL-4 i AWC tiltrukket af en punktkilde af lugt (figur 2C grafer repræsentative resultater fra kemotaxi assays af ikke-tilpassede dyr - bemærk kemotaksi indeks 3 er tæt på 1). Dyr, som udviser nuklear GFP :: EGL-4 i AWC er ikke tiltrukket af en punktkilde af tilpasning lugt (figur 2E grafer repræsentative resultater fra kemotaxi analyser af tilpassede dyr - bemærk kemotaksi indeks er tæt på nul). At generere statistisk signifikante data fra lugt-inducerede kernetranslokation assays,forsøgene skal køre mindst 3 gange og på forskellige dage. For en detaljeret beskrivelse af kemotaxi-assay kan det være nyttigt at henvise til Jové artiklen 2490 14.

Når EGL-4 kommer ind i kernen af de AWC neuroner det forårsager stabile og langvarige ændringer i AWC fysiologi der fortsat selv når EGL-4 er ikke længere i kernen (fig. 3). Efter 80 min lugt eksponering dyr vil ignorere en punktkilde af tilpasning lugt (Figur 3 øvre panel, lys bar på venstre), og denne tilpasning vil vare ved, selv efter 120 min på genopretning (Figur 3 øvre panel, lys bar til højre). Efter 80 minutter af lugt eksponering GFP: EGL-4 er observeret i kernen af AWC (figur 3 nederste panel, lys bar på venstre). Denne nukleare post er både nødvendig og tilstrækkelig til at fremkalde en langsigtet tilpasning i AWC 5. Efter 120 min nyttiggørelse, der ikke længere disse dyr udviser nukleare GFP :: EGL-4 (figur 3 nederste panel, lys bar på højre) endnu stadig vil ignorere en punktkilde af tilpasning af lugt benzaldehyd på det adfærdsmæssige plan.

Figur 1
Figur 1. Oversigt over protokol for langsigtede lugt-induceret kernetranslokation assays. For det første dyr, der udtrykker GFP :: EGL-4 (pyIs500 dyr) dyrket ved 25 ° C på NGM plader podet med OP50 E. coli. For det andet dyr udsættes for en lugt tilpasning mix (forsøgsgruppe) eller S-Basal buffer (kontrolgruppe). For det tredje dyr scoret blindt ved at tælle antallet af dyr, som udviser nukleare GFP :: EGL-4 i AWC og antallet af dyr, som udviser cytoplasmatisk GFP :: EGL-4 i AWC.

Figur 2
Figur 2. et al. 6 Figur 2B. Før langvarig lugt eksponering GFP :: EGL-4 er lokaliseret i cytosolen af AWC. Figur 2C. På adfærdsmæssige plan, dyr med cytosolisk GFP :: EGL-4 i AWC er tiltrukket til et punkt source af lugt. Grafen er genereret fra repræsentative resultater fra kemotaxi assays af ikke-tilpassede dyr. Bemærk den kemotaksi-indekset er tæt på 1. Figur 2D. Efter 80 min lugt eksponering GFP :: EGL-4 er lokaliseret til kernen i den AWC. Figur 2E. Dyr der udviser nukleare GFP :: EGL-4 i AWC er ikke tiltrukket til en punktkilde for tilpasning lugt. Denne graf blev genereret fra repræsentative resultater fra kemotaxi analyser af tilpassede dyr. Bemærk den kemotaksi-indekset er tæt på nul.

Figur 3
Figur 3. Når EGL-4 kommer ind i kernen af de AWC neuroner det forårsager stabile og langvarige ændringer i AWC fysiologi der fortsat selv når EGL-4 ikke længere er i kernen. Dyr udsat for lugt (80 min) får lov til at komme sig efter den langsigtede lugt eksponering og bedømt for cytoplasmatisk versus nuklearelokalisering af GFP :: EGL-4. (Øverste felt) Efter 120 min recovery de dyr, der blev udsat for lugt i 80 min stadig tilpasset på adfærdsmæssige plan. (Nederste panel) Efter 120 min recovery dyr, der blev udsat for lugt i 80 min ikke længere udviser nukleare GFP :: EGL-4. Således nuklear EGL-4 påberåber stabile langvarige ændringer i fysiologi AWC der resterer, efter EGL-4 er ikke længere i kernen. Figur er modificeret med tilladelse fra Lee et al. Fem. Figur 3 øvre panel. Efter 80 min lugt eksponering dyr vil ignorere en punktkilde af tilpasning lugt, og denne tilpasning vil vare ved, selv efter 120 min for inddrivelse. Figur 3 nederste panel. Efter 80 minutter af lugt eksponering GFP :: EGL-4 observeres i kernen af ​​AWC. Denne nukleare post er både nødvendig og tilstrækkelig til at fremkalde en langsigtet tilpasning i AWC. Efter 120 min nyttiggørelse, der ikke længere disse dyr udviser nukleare GFP :: EGL-4 endnu vil stadig ignorere et punkt souRCE for tilpasning lugt benzaldehyd på adfærdsmæssige plan.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Den lugt-induceret nukleare indtastning af en GFP-mærket EGL-4 molekylet beskrevet her giver en robust molekylær udlæsning af olfaktoriske tilpasning i C. elegans. De lugt-inducerede kernetranslokation assays er ligetil og kræver kun få dages forberedelsestid. Den pyIs500 dyr, som vi har fremstillet til disse assays, udtrykker en markør, der oplyser AWC neuron og udtrykker GFP-mærket EGL-4-protein. Således mener vi, at en eksperimentator med lidt at ingen erfaring med at arbejde med denne klasse af neuron kan meget hurtigt (måske efter at have gennemgået et par dusin dyr) begynder at føle sig godt tilpas identificere den korrekte celle og scoring for nuklear versus cytoplasmatisk EGL-4. Det kan være nyttigt for læseren at henvise til Jové artiklen 835, der beskriver GFP analyse i C. elegans 15.

For at sikre at den genererede data er af højeste kvalitet, vi foreslår følgende retningslinjer:1) al scoring bør ske blindt, 2) dyrkning plader indeholdende spor af forurening (svampe-eller bakteriel) kan ikke bruges, 3) orme, der oplevede sult under dyrkningen aldrig bør bruges og 4) tilpasning blandinger skal gøres frisk på dagen for eksperimenter.

Alle sansesystemer udviser eksempler på neuronal plasticitet. Overførsel af signaler til kernen, er en særdeles konserveret træk ved stabile former af neuronal plasticitet 16. Ved at udvikle en molekylær udlæsning af olfaktoriske plasticitet, der repræsenterer en kernetranslokation af en PKG i stimulerede neuroner, giver vi en platform for hurtig og præcis dissektion af neuronal plasticitet i en in vivo model. Ved hjælp af vores molekylære udlæsning af olfaktoriske tilpasning vi er begyndt at beskrive nogle af de begivenheder, der former olfaktoriske tilpasning i C. elegans 5,6,7. Dette er imidlertid blot en begyndelse, og ved at studere denne proces som funktion af etge, sex, infektion, eller kost vi kan afdække vigtige temaer i neuronal plasticitet på banen og systemer niveau.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Ingen interessekonflikter erklæret.

Acknowledgments

Vi vil gerne takke Scott Hamilton, og medlemmer af O'Halloran lab for omhyggelig læsning af dette manuskript. Vi takker også vores anonyme reviewer for gode forslag og indsigtsfulde kommentarer.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Bacto Agar Difco DF0140-07-4 NGM plates
Sodium Chloride Fisher Chemical S671-10 NGM plates
Bacto Peptone Difco DF0118-07-2 NGM plates
Potassium Phosphate Dibasic Fisher Chemical S375-500 S-Basal buffer and NGM plates
Potassium Phosphate Monobasic Fisher Chemical P285-500 S-Basal buffer and NGM plates
Kimwipes - Small Kimberly-Clark LS2770
Ethanol 100% Gold Shield Chemical Co. 43196-115 diluting odors for chemotaxis assays
Calcium Chloride Sigma-Aldrich C8106-500G NGM plates
Magnesium Sulphate MP Biomedicals 150136-500G NGM plates
Sodium Azide 99% Fisher Scientific ICN10289180 Anesthetic
Agarose - UltraPure Invitrogen 16500-500 Agarose pads
Benzaldehyde Sigma-Aldrich B1334-100G AWC odor
Butanone, ACS Grade Sigma-Aldrich 360473-500ML AWC odor
Microcentrifuge Tubes - 1.5 ml Colored Denville LS8147
Pasteur Pipet Disposable Glass 5-3/4" Fisher Scientific 13-678-20B
Stratalinker Stratagene Stratalinker 2400 UV integration
Filter Vacuum Bottle - 500 ml Nalgene 09-740-25B

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Colbert, H. A., Bargmann, C. I. Odorant-specific adaptation pathways generate olfactory plasticity in C. elegans. Neuron. 14, (4), 803 (1995).
  2. Colbert, H. A., Bargmann, C. I. Environmental signals modulate olfactory acuity, discrimination, and memory in Caenorhabditis elegans. Learning and Memory. 4, (2), 179 (1997).
  3. Bargmann, C. I., et al. Odorant-selective genes and neurons mediate olfaction in C. elegans. Neuron. 74, (3), 515 (1993).
  4. L'Etoile, N. D., et al. The cyclic GMP-dependent protein kinase EGL-4 regulates olfactory adaptation in C. elegans. Neuron. 36, 1079-10 (2002).
  5. Lee, J. I., et al. Nuclear entry of a cGMP-dependent kinase converts transient into long-lasting olfactory adaptation. PNAS. 107, (13), 6016 (2010).
  6. O'Halloran, D. M., et al. Regulators of AWC-mediated olfactory plasticity in Caenorhabditis elegans. PLoS Genetics. 5, (12), e1000761 (2009).
  7. O'Halloran, D. M., et al. Changes in cGMP levels affect the localization of EGL-4 in AWC in Caenorhabditis elegans. PLoS ONE. 7, (2), e31614 (2012).
  8. Mello, C. C., et al. Efficient gene transfer in C.elegans: extrachromosomal maintenance and integration of transforming sequences. EMBO Journal. 10, 3959-39 (1991).
  9. Miyabayashi, T., et al. Expression and function of members of a divergent nuclear receptor family in Caenorhabditis elegans. Dev. Biol. 215, 314 (1999).
  10. L'Etoile, N. D., Bargmann, C. I. Olfaction and odor discrimination are mediated by the C. elegans guanylyl cyclase ODR-1. Neuron. 25, (3), 575 (2000).
  11. Mello, C., Fire, A. DNA transformation. Methods Cell Biol. 48, 451 (1995).
  12. Stiernagle, T. Maintenance of C. elegans. Wormbook. (2006).
  13. Brenner, S. The genetics of Caenorhabditis elegans. Genetics. 77, (1), 71 (1974).
  14. Kauffman, A., Parsons, L., Stein, G., Wills, A., Kaletsky, R., Murphy, C. C. elegans Positive Butanone Learning, Short-term, and Long-term Associative Memory Assays. J. Vis. Exp. (49), e2490 (2011).
  15. Berkowitz, L. A., Hamamichi, S., Knight, A. L., Harrington, A. J., Caldwell, G. A., Caldwell, K. A. Application of a C. elegans Dopamine Neuron Degeneration Assay for the Validation of Potential Parkinson's Disease Genes. J. Vis. Exp. (17), e835 (2008).
  16. Pittenger, C., Kandel, E. R. In search of general mechanisms for long-lasting plasticity: Aplysia and the hippocampus. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 358, (1432), 757 (2003).
En Molekylær Udlæsning af Langsigtet olfaktorisk Adaptation in<em&gt; C. elegans</em
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

He, C., Lee, J. I., L'Etoile, N., O'Halloran, D. A Molecular Readout of Long-term Olfactory Adaptation in C. elegans. J. Vis. Exp. (70), e4443, doi:10.3791/4443 (2012).More

He, C., Lee, J. I., L'Etoile, N., O'Halloran, D. A Molecular Readout of Long-term Olfactory Adaptation in C. elegans. J. Vis. Exp. (70), e4443, doi:10.3791/4443 (2012).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter