في هذا الفيديو كيف نظهر مختبرنا الممرات بشكل روتيني الأشكال البشرية خطوط الخلايا الجذعية الجنينية مع التربسين.
Abstract
في هذا الفيديو كيف نظهر مختبرنا الممرات بشكل روتيني الأشكال البشرية خطوط الخلايا الجذعية الجنينية مع التربسين. الخلايا الجذعية الجنينية البشرية والفنية للثقافة الخلية ، وتميل الى اكتساب شذوذ karyotypic الأضعاف مع الكثافة السكانية العالية. الركض السليم أمر ضروري للحفاظ على ، غير متمايزة صحية ، والأشكال الطبيعية karyotypically الخلايا الجذعية الجنينية البشرية الثقافة. أولا ، يتم غسلها ثقافة التوسع في برنامج تلفزيوني وسائل الإعلام لإزالة بقايا وحطام الخلايا ، ثم يتم مضافين الخلايا مع الحد الأدنى من حجم 0.05 ٪ دافئة التربسين – EDTA. ترك التربسين على الخلايا لمدة تصل إلى خمس دقائق ، ثم يتم فكها بلطف مع خلايا ماصة a 2mL المصلية. يتم جمع نظام التعليق الخلية ومختلطة مع كمية كبيرة من الاشكال وسائل الإعلام ، ثم يتم جمع الخلايا بواسطة الطرد المركزي لطيف. تتم إزالة المعطل خليط سائل الإعلام التربسين ، وخلايا معلق في وسائل الاعلام الأشكال السابقة للحرارة. ويتم احتساب نسبة تقسيم المناسب (1:10 عموما 1:20) ، وخلايا إعادة مطلي على طبق من العمر 1-2 اليوم تحتوي على أحادي الطبقة من الماوس الجنينية الخلايا المغذية المشع الليفية. تبقى الثقافة الأشكال المصنفة حديثا لوحة دون عائق لمدة 48 ساعة ، ثم يتم تغيير وسائل الاعلام كل يوم بعد ذلك. فمن المهم عدم trpsinize الى تعليق خلية واحدة ، لأن ذلك يزيد من مخاطر إدخال karyotypic شذوذ.
Protocol
عام نوصي ذوبان لا يزيد عن عينة واحدة في وقت معين لضمان سهولة التعامل. ينبغي للمعالج الحرص على عدم ترك الثقافات في درجة حرارة الغرفة وCO2 منخفضة لفترات طويلة من الزمن. ويتم ذلك عن الطرد المركزي من الخلايا الحية على 500-600 XG لمدة 5 دقائق ف…
Discussion
في هذا الفيديو كيف أننا أثبتنا الأشكال مرور روتينية الإنسان خطوط الخلايا الجذعية الجنينية في المختبر لدينا. تقسيم فعالة ومنتظمة والركض أمر ضروري للحفاظ على صحة الإنسان الخلايا الجذعية الجنينية الخط. التربسين مرور توسط هو ميزة كبيرة من خطوط الخلايا الأشكال ، ومع ذلك ، فمن المهم…
Materials
HuES media 651.5 ml
KO-DMEM 500 ml
PenStrep 6.5 ml
GlutaMAXTM 6.5 ml
NEAA 6.5 ml
2‐mercaptoethanol 0.5ul
KO Serum Replacement 65 ml
Plasmanate 65 ml
bFGF2 (10 ng/mL final) 0.65 ml