ذبابة الفاكهة الدروسوفيلا هو كائن نموذج قوية لاستكشاف الأساس الجزيئي للتنظيم طول العمر. وهذا البروتوكول مناقشة الخطوات المتبعة في توليد استنساخه، على أساس السكان قياس طول العمر وكذلك المزالق المحتملة وكيفية تجنبها.
الشيخوخة هي ظاهرة في ذلك من تدهور مطرد في الكائنات الفسيولوجية جميع تقريبا التي تم فحصها، مما أدى إلى انخفاض الأداء البدني وزيادة خطر المرض. الشيخوخة الفردية هو واضح في مستوى السكان وزيادة في العمر التي تعتمد على وفيات، والتي غالبا ما يتم قياس في المختبر بواسطة عمر الرصد في الأفواج كبير من الأفراد في سن المتطابقة. التجارب التي تسعى لتحديد مدى وراثية أو بيئية التلاعب في الكائنات أثر عمر نموذج بسيط نجحت بشكل ملحوظ لفهم جوانب الشيخوخة التي من الحفظ عبر الأنواع واستراتيجيات جديدة لالملهم لتمديد عمر ومنع الأمراض المرتبطة بالسن في الثدييات .
الطاير الخل، ذبابة الفاكهة الدروسوفيلا، هو كائن حي نموذج جذاب لدراسة آليات الشيخوخة بسبب بقائه قصيرة نسبيا، وتربية مريحة، وعلم الوراثة السهل.ومع ذلك، التدابير الديموغرافية للشيخوخة، بما في ذلك سن محددة البقاء وفيات، هي عرضة للتغيرات غير عادية حتى طفيفة في التصميم التجريبي والبيئة، ومطلوب الحفاظ على الممارسات المختبرية صارمة لمدة من التجارب الشيخوخة. هذه الاعتبارات، إلى جانب الحاجة لممارسة السيطرة حذرا من الخلفية الوراثية، ضرورية لتوليد قياسات قوية. في الواقع، هناك العديد من الخلافات البارزة المحيطة الاستدلال من التجارب طول العمر في الخميرة والديدان والذباب والفئران التي تم ارجاعها الى التحف البيئية أو الوراثية 1-4. في هذا البروتوكول، ونحن تصف مجموعة من الإجراءات التي تم الأمثل على مدى سنوات عديدة لقياس طول العمر في ذبابة الفاكهة باستخدام قارورة المختبر. وصفنا أيضا استخدام البرنامج dLife، الذي تم تطويره من قبل مختبر لدينا، وهي متاحة للتحميل ( http://sitemaker.umich.edu/pletcherlab / سوفت وير). dLife يسرع ويعزز الإنتاجية حسب التصميم الممارسات الجيدة إدماج التجريبية الأمثل، وتبسيط التعامل مع ذبابة وجمع البيانات، وتوحيد تحليل البيانات. وسوف نناقش أيضا كثير من المزالق المحتملة في تصميم وجمع وتفسير البيانات وعمر، ونحن نقدم خطوات لتجنب هذه المخاطر.
بروتوكول المعروضة هنا يصف طريقة لإنتاج قياسات متكررة طول العمر الكبار في ذبابة الفاكهة التي هي قابلة للتكيف لتقييم التدخلات والجينية الدوائية، والبيئية. الجوانب الحاسمة للبروتوكول تتضمن التحكم بعناية في بيئة نمو اليرقات، والتقليل من الإجهاد الكبار، والتقليل…
The authors have nothing to disclose.
وأيد هذا العمل من خلال تمويل من مؤسسة إليسون الطبية (SDP، http://www.ellisonfoundation.org/index.jsp )، NIH K01AG031917 (NJL، http://www.nih.gov/ )، NIH-35 5T32GM007315 (JR) وNIH R01AG030593 (SDP). استخدام هذا العمل لموارد الأساسية الشيخوخة ذبابة الفاكهة (DAC) من مركز صدمة ناثان التميز في البيولوجيا الشيخوخة الممولة من قبل المعهد الوطني للشيخوخة P30-AG-013283 ( http://www.nih.gov/ ). فإن الكتاب أود أن أشكر مختبر لإجراء مناقشات مفيدة Pletcher وتشونغ خاصة بريان لقراءة نقدية للمخطوطة. نود أن نعترف نيك آشر وBorowicz كاثرين لمساعدتها في جمع البيانات.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
Active Dry Yeast | Fleishmann’s Yeast | 2192 | |
Grape Agar Powder Premix | Genesee Scientific | 47-102 | |
Large Embryo Collection Cages | Genesee Scientific | 59-101 | |
Large Replacement End Caps | Genesee Scientific | 59-103 | |
6 oz Square Bottom Bottles, polypropylene | Genesee Scientific | 32-130 | |
Flugs Closures for Stock Bottles | Genesee Scientific | 49-100 | |
Drosophila Vials, Wide, Polystrene | Genesee Scientific | 32-117 | |
Flugs Closures for Wide Vials | Genesee Scientific | 49-101 | |
Wide Orifice Aardvark Pipet Tips, 200 ul | Denville Scientific | P1105-CP | |
Flystuff Flypad, Standard Size | Genesee Scientific | 59-114 | |
BD Falcon 15 ml Conical Centrifuge Tubes | Fisher Scientific | 14-959-70C | |
Fisherbrand Petri Dishes with Clear Lids, Raised Ridge; 100 O.D. x 15 mm H; | Fisher Scientific | 08-757-12 | |
Kimax* Colorware Flasks 1,000 ml yellow | Fisher Scientific | 10-200-47 | |
PBS pH 7.4 10x | Invitrogen | 70011044 | |
Gelidium Agar | Mooragar | n/a | |
Brewer’s Yeast | MP Biomedicals | 0290331280 | |
Granulated Sugar | Kroger | n/a | |
Tegosept | Genesee Scientific | 20-266 | Fly Food Preservative |
Propionic Acid, 99% | Acros Organics | 149300025 | Fly Food Preservative |
Kanamycin Sulfate | ISC BioExpress | 0408-10G | |
Tetracycline HCl | VWR | 80058-724 |