דרוזופילה melanogaster הוא אורגניזם מודל רב עצמה לחקר הבסיס המולקולרי של ויסות אריכות ימים. פרוטוקול זה יעסוק השלבים הכרוכים ביצירת מדידה לשחזור, המבוסס על אוכלוסייה של אריכות ימים, כמו גם בעיות פוטנציאליות וכיצד להימנע מהם.
הזדקנות היא תופעה שגורם להידרדרות פיזיולוגית מתמדת בכל כמעט אורגניזמים שבו זה כבר נבדק, מוביל לביצועים פיסיים מופחתים ועלייה בסיכון למחלה. הזדקנות אדם היא מניפסט ברמת האוכלוסייה כעלייה בתמותה תלויה גיל, אשר לעתים קרובות שנמדדה במעבדה על ידי התבוננות תוחלת חיים בקבוצות גדולות של אנשי גיל מתאים. ניסויים המבקשים לכמת את המידה שבה גנטית או סביבתית מניפולציות השפעת תוחלת החיים באורגניזמים מודל פשוטים הייתה מוצלחת להפליא להבנת ההיבטים של הזדקנות, הנשמרים על פני מינים ועל אסטרטגיות חדשות להארכת תוחלת חיים מעוררי השראה ומניעת גיל הקשורים למחלה ביונקים .
זבוב החומץ, דרוזופילה melanogaster, הוא אורגניזם מודל אטרקטיבי לחקר מנגנוני הזדקנות, בשל אורך חיים הקצרים יחסית, גידול נוח, ושטחית גנטיקה.עם זאת, צעדים דמוגרפיים של הזדקנות, כולל הישרדות גיל ספציפי ותמותה, הם רגישים במיוחד אפילו שינויים קלים בעיצוב וסביבה ניסיוניים, והתחזוקה של נהלים מחמירים למעבדת משך ניסויי הזדקנות נדרשה. שיקולים אלה, יחד עם הצורך לתרגל שליטה קפדנית של רקע גנטי, הם חיוניים ליצירת מדידות חזקות. ואכן, יש הרבה מחלוקות בולטות המקיפות היקש מניסויי מאריך חיים בשמרים, תולעים, זבובים ועכברים שהיו לייחס לחפצים סביבתיים או גנטיים 1-4. בפרוטוקול זה, אנו מתארים מערכת הנהלים שהיו מותאמים לאורך שנים רבות של מדידת אריכות ימים בדרוזופילה באמצעות בקבוקוני מעבדה. גם אנו מתארים את השימוש בתוכנת dLife, אשר פותח על ידי המעבדה שלנו, והוא זמין להורדה (http://sitemaker.umich.edu/pletcherlab / תוכנה). dLife מאיץ את התפוקה ומקדמת שיטות עבודה טובות בעיצוב ניסיוני אופטימלי שילוב, פישוט טיפול זבוב ואיסוף נתונים, ניתוח נתונים ותקנון. נדונונו גם את החסרונות הפוטנציאליים רבים בתכנון, איסוף, ופרשנות של נתוני תוחלת חיים, ואנו מספקים צעדים כדי למנוע סכנות אלה.
הפרוטוקול המובא כאן מתאר שיטה להפקת מדידות לשעתק לאריכות ימים בוגרות בדרוזופילה שניתן ליישם לצורך ההערכה של התערבויות גנטיות, תרופתיות וסביבתיות. היבטים חשובים של הפרוטוקול כוללים שליטה בזהירות את סביבת פיתוח הזחל, צמצום מתח למבוגרים, ומזעור הטיה על פני קבוצו?…
The authors have nothing to disclose.
עבודה זו נתמכה על ידי מימון מקרן אליסון הרפואי (SDP, http://www.ellisonfoundation.org/index.jsp), NIH K01AG031917 (NJL, http://www.nih.gov/), NIH 5T32GM007315-35 (JR) וNIH R01AG030593 (SDP). עבודה זו מנוצלת משאבים של דרוזופילה הזדקנות Core (DAC) של מרכז ההלם נתן למצוינות בביולוגיה של ההזדקנות מומן על ידי המכון הלאומי להזדקנות P30-AG-013283 (http://www.nih.gov/). המחברים מבקשים להודות למעבדת Pletcher לדיונים מועילים ובעיקר בריאן Chung לקריאה ביקורתית של כתב היד. ברצוננו להודות ניק אשר וקתרין Borowicz לסיוע באיסוף נתונים.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
Active Dry Yeast | Fleishmann’s Yeast | 2192 | |
Grape Agar Powder Premix | Genesee Scientific | 47-102 | |
Large Embryo Collection Cages | Genesee Scientific | 59-101 | |
Large Replacement End Caps | Genesee Scientific | 59-103 | |
6 oz Square Bottom Bottles, polypropylene | Genesee Scientific | 32-130 | |
Flugs Closures for Stock Bottles | Genesee Scientific | 49-100 | |
Drosophila Vials, Wide, Polystrene | Genesee Scientific | 32-117 | |
Flugs Closures for Wide Vials | Genesee Scientific | 49-101 | |
Wide Orifice Aardvark Pipet Tips, 200 ul | Denville Scientific | P1105-CP | |
Flystuff Flypad, Standard Size | Genesee Scientific | 59-114 | |
BD Falcon 15 ml Conical Centrifuge Tubes | Fisher Scientific | 14-959-70C | |
Fisherbrand Petri Dishes with Clear Lids, Raised Ridge; 100 O.D. x 15 mm H; | Fisher Scientific | 08-757-12 | |
Kimax* Colorware Flasks 1,000 ml yellow | Fisher Scientific | 10-200-47 | |
PBS pH 7.4 10x | Invitrogen | 70011044 | |
Gelidium Agar | Mooragar | n/a | |
Brewer’s Yeast | MP Biomedicals | 0290331280 | |
Granulated Sugar | Kroger | n/a | |
Tegosept | Genesee Scientific | 20-266 | Fly Food Preservative |
Propionic Acid, 99% | Acros Organics | 149300025 | Fly Food Preservative |
Kanamycin Sulfate | ISC BioExpress | 0408-10G | |
Tetracycline HCl | VWR | 80058-724 |