Drosophila melanogaster è un organismo modello potente per esplorare le basi molecolari della regolazione longevità. Questo protocollo discuterà i passaggi necessari per generare una riproducibile, basato sulla popolazione, la misurazione della longevità e gli eventuali rischi potenziali e come evitarli.
L'invecchiamento è un fenomeno che si traduce in costante deterioramento fisiologico in quasi tutti gli organismi in cui è stato esaminato, con conseguente riduzione delle prestazioni fisiche e aumento del rischio di malattia. Invecchiamento individuale si manifesta a livello di popolazione, come un aumento della mortalità età-dipendente, che viene spesso misurata in laboratorio osservando la durata della vita in ampie coorti di individui di pari età. Gli esperimenti che cercano di quantificare la misura in cui le manipolazioni genetiche o ambientali impatto durata della vita in organismi modello semplici hanno riscosso un notevole successo per la comprensione degli aspetti dell'invecchiamento che si conservano in taxa e per ispirare nuove strategie per estendere la durata della vita e la prevenzione della malattia associata all'età nei mammiferi .
La mosca dell'aceto, Drosophila melanogaster, è un organismo modello attraente per lo studio dei meccanismi di invecchiamento a causa della sua relativamente breve vita, allevamento conveniente, e la genetica facili.Tuttavia, le misure demografiche di invecchiamento, tra cui l'età-specifica e la mortalità, sono straordinariamente sensibili a variazioni anche minime nel disegno sperimentale e l'ambiente, e il mantenimento di pratiche di laboratorio rigorose per tutta la durata degli esperimenti di invecchiamento è richiesto. Queste considerazioni, insieme con la necessità di praticare un attento controllo dei background genetico, sono essenziali per la generazione di misure robuste. In effetti, ci sono molte controversie notevoli circondano inferenza da esperimenti longevità in lievito, vermi, mosche e topi che sono stati tracciati di artefatti ambientali o genetici 1-4. In questo protocollo, si descrive una serie di procedure che sono stati ottimizzati per molti anni per misurare la longevità in Drosophila con fiale di laboratorio. Abbiamo anche descrivere l'uso del software dLife, che è stato sviluppato dal nostro laboratorio ed è disponibile per il download ( http://sitemaker.umich.edu/pletcherlab / software). dLife accelera la produttività e promuovere le buone pratiche, integrando design ottimale sperimentale, semplificare la gestione e la raccolta dei dati mosca, e la standardizzazione delle analisi dei dati. Discuteremo anche le numerose insidie potenziali nella progettazione, raccolta e interpretazione dei dati di durata della vita, e mettiamo a disposizione misure per evitare questi pericoli.
Il protocollo qui presentato descrive un metodo per produrre misurazioni riproducibili di longevità adulto in Drosophila che è adattabile per la valutazione di interventi farmacologici, genetici e ambientali. Aspetti cruciali del protocollo includono controllando attentamente l'ambiente di sviluppo larvale, riducendo al minimo lo stress degli adulti, e riducendo al minimo polarizzazione tra gruppi sperimentali e di controllo. Presentiamo anche l'utilizzo del software di gestione dell'esperimento d…
The authors have nothing to disclose.
Questo lavoro è stato sostenuto da un finanziamento della Fondazione Ellison Medical (SDP, http://www.ellisonfoundation.org/index.jsp ), NIH K01AG031917 (NJL, http://www.nih.gov/ ), NIH 5T32GM007315-35 (JR) e NIH R01AG030593 (SDP). Questo lavoro ha utilizzato le risorse del Aging Drosophila Core (DAC) del Centro di Eccellenza Nathan Shock nella biologia dell'invecchiamento finanziato dal National Institute of Aging P30-AG-013283 ( http://www.nih.gov/ ). Gli autori desiderano ringraziare il Laboratorio Pletcher per le discussioni utili e, in particolare Brian Chung per la lettura critica del manoscritto. Si desidera ringraziare Nick Asher e Kathryn Borowicz per l'assistenza con la raccolta dei dati.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
Active Dry Yeast | Fleishmann’s Yeast | 2192 | |
Grape Agar Powder Premix | Genesee Scientific | 47-102 | |
Large Embryo Collection Cages | Genesee Scientific | 59-101 | |
Large Replacement End Caps | Genesee Scientific | 59-103 | |
6 oz Square Bottom Bottles, polypropylene | Genesee Scientific | 32-130 | |
Flugs Closures for Stock Bottles | Genesee Scientific | 49-100 | |
Drosophila Vials, Wide, Polystrene | Genesee Scientific | 32-117 | |
Flugs Closures for Wide Vials | Genesee Scientific | 49-101 | |
Wide Orifice Aardvark Pipet Tips, 200 ul | Denville Scientific | P1105-CP | |
Flystuff Flypad, Standard Size | Genesee Scientific | 59-114 | |
BD Falcon 15 ml Conical Centrifuge Tubes | Fisher Scientific | 14-959-70C | |
Fisherbrand Petri Dishes with Clear Lids, Raised Ridge; 100 O.D. x 15 mm H; | Fisher Scientific | 08-757-12 | |
Kimax* Colorware Flasks 1,000 ml yellow | Fisher Scientific | 10-200-47 | |
PBS pH 7.4 10x | Invitrogen | 70011044 | |
Gelidium Agar | Mooragar | n/a | |
Brewer’s Yeast | MP Biomedicals | 0290331280 | |
Granulated Sugar | Kroger | n/a | |
Tegosept | Genesee Scientific | 20-266 | Fly Food Preservative |
Propionic Acid, 99% | Acros Organics | 149300025 | Fly Food Preservative |
Kanamycin Sulfate | ISC BioExpress | 0408-10G | |
Tetracycline HCl | VWR | 80058-724 |