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Biology

における寿命の測定 doi: 10.3791/50068 Published: January 7, 2013

Summary

キイロショウジョウバエは寿命調節の分子基盤を探索するための強力なモデル生物である。このプロトコルは、長寿の再現性は、人口ベースの測定だけでなく、潜在的な落とし穴とその回避方法を生成するために必要な手順を説明します。

Abstract

高齢化は、それが検討されたほぼすべての生物が順調に生理的な劣化の結果は、減少した身体能力と疾患のリスクの増加につながるという現象である。個々の高齢化は、多くの場合、年齢をマッチさせた個体の大規模コホートで寿命を観察することにより、実験室で測定され、年齢に依存死亡率の増加は、人口レベルでのマニフェストです。単純なモデル生物でどの遺伝や環境操作衝撃寿命の程度を定量化しようとする実験が寿命を延長し、哺乳類では加齢に伴う疾患を予防するための分類群を横切って、感激新しい戦略のために保存されており、高齢化の側面を理解するために著しく成功してきた。

ショウジョウバエ、 キイロショウジョウバエは 、その比較的短い寿命、便利業、そして容易な遺伝に起因する老化のメカニズムを研究するための魅力的なモデル生物である。しかし、年齢別生存率と死亡率を含め、高齢化の人口学的指標は、実験的なデザインと環境のわずかな変化に非常に敏感である、老化実験期間中の厳格な検査室の安全基準の整備が必要となります。これらの考慮事項は、一緒に遺伝的背景を慎重にコントロールを練習する必要性と、堅牢な測定値を生成するために不可欠です。確かに、環境や遺伝的アーティファクト1-4にトレースされている酵母、ワーム、ハエやマウスの長寿実験から推論を取り巻く多くの著名な論争があります。このプロトコルでは、我々は、実験室のバイアルを使用して、ショウジョウバエの寿命を測定することが長年にわたって最適化されている一連の手順を説明します。私達はまた私達の研究室で開発され、ダウンロード(利用可能ですdLifeたソフトウェアの使用を記述http://sitemaker.umich.edu/pletcherlab /ソフトウェア)。 dLifeは、スループットを加速し、フライ処理とデータ収集の簡素化、データ解析の標準化、最適な実験デザインを組み込むことにより、優れた実践を推進しています。また、設計、収集、および寿命のデータの解釈には多くの潜在的な落とし穴について説明します、我々はこれらの危険性を回避するための手順を提供します。

Protocol

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我々は、4℃でプロトコルに現れる実験食品、酵母ペースト、ぶどう寒天プレートを格納し、カビや乾燥が幼虫と成虫の両方の標準環境条件をインチに設定していない限り、1〜2ヵ月以内にそれらを使用することをお勧めします12時12時間の明暗サイクルおよび60%の相対湿度で25℃のインキュベーター中でハエのメンテナンスを伴うステージングします。

1。実験食の調製

  1. 幼虫の成長のために、我々はCTなどのこのプロトコルの簡略化されて修正されたカリフォルニア工科大学中5を使用しています
  2. 我々は(10砂糖(ショ糖)と抗生物質や抗真菌剤を補充煮沸された2%寒天ベース、中の酵母(凍結全体ビール酵母)で構成されています大人のショウジョウバエ (SY)のためのダイエットを推奨し、配布しml当たりバイアル)6。食品は貯蔵前に12〜24時間のために凝固し、蒸発させなければならない。栄養環境がsubstanできるのでtially調理過程における衝撃長寿、一貫性は、実験内及び実験間の比較のために両方が不可欠である。
  3. 薬剤が成人食品に添加される場合には、この薬は、単独で車両を含む層を受け取るコントロールバイアルと食品表面上に食べ物と層状の小ロット(2ミリリットル)中に混在させることができます。

2。ライブ酵母ペーストの調製

アクティブドライイースト3gで水の5-6 mlを組み合わせて、よく混ぜる。酵母ペーストの一貫性は、滑らかなピーナッツバターのようにする必要があります。

3。グレープ寒天プレートの準備

  1. 1000mlのフラスコ内の500mlの蒸留水にブドウ寒天プレミックスのパケットを追加し、ブドウ寒天ミックスを溶解するために、パケット上の指示に従ってください。
  2. 気泡形成を回避しながら、慎重に100ミリメートルペトリ皿に混合物の厚い層を注ぐ。プレミックスの1パケットは約14 GRAを生成peの寒天プレート。
  3. メディアは15分間で蓋を室温で冷却して凝固させてください。プレートは、4℃でCを保っプラスチックラップに包まれたか、すぐに使用することができます。

4。シンクロナイズド卵のコレクション

このプロトコルで使用されているすべてのメディア、 すなわち酵母 、ブドウ寒天プレートは、CTと10%SY食品は、室温でなければなりません。

  1. ぶどう寒天プレートに貼り酵母の2-3 cmの直径層を広げ、脇に置きます。
  2. ハエを麻酔するメッシュ側でCO 2のパッドの上に大型採卵ケージを下に置きます。窒素系麻酔は、高品質の結果7を生成することができますいくつかの研究室で使用されたCO 2の代わりに、、です。
  3. 漏斗を使用して、採卵ケージにハエの150から200のペアを転送します。
  4. ケージの開放端部をカバーし、エンドキャップで保護するためにブドウの寒天プレートを置きます。
  5. ハエが目を覚ますまで、その側にケージを置きます。その後、一晩インキュベーター中で、ケージ、ブドウ寒天プレート側を下にして保管してください。
  6. 翌日、新たにyeastedブドウプレートとブドウプレートを交換します。唯一の板の表面に貼り付け、酵母の直径1cm程度置く。 1日目のブドウプレートは破棄してください。
  7. 胚は16から22時間、ブドウ寒天プレートの表面に収集することができます。一度完了したら、ブドウの寒天プレートを収集し、親のハエを破棄します。
  8. 緩衝生理食塩水(PBS)1Xリン酸とブドウ寒天プレートの表面を洗浄します。卵は優しく綿棒でこすることにより動員することができます。傷、損傷しないように注意するか、板の表面から寒天の薄い部分を削り取る。漏斗の助けを借りて、15 mlコニカルチューブに洗浄された卵を注ぐ。
  9. 卵管の底に沈殿し、任意の卵を紛失しないように注意しながら、上清を捨てましょう。残りのボリュームは2〜3ミリリットル前後となるはずです。
  10. チューブにPBSの8-10 mlを加え、上記のステップ2-3を繰り返しMOReは倍上澄みが透明になるまで徹底的に卵を洗浄する。残留酵母を退治すると、このステップでの鍵となります。
  11. 残存量が2ミリリットルになるまで洗浄した後、すべての上澄みを排出する。ワイドボアピペットチップを用いたCTボトルに小分けした卵の32μlを。ピペットチップの中の卵を吸引しない液体に少しで、コンパクトにすべきです。これは、卵の決済に深くピペットの先端を挿入し、素早く吸引するプランジャーを解放することによって達成することができます。
  12. 場所シードCTはフライ開発全体インキュベーターに戻しボトル。

5。年齢をマッチさせた大人のハエのコレクション

  1. 大人は通常、9日目以降から孵化するでしょう。インキュベーターで一晩に戻って最初の日と場所のボトルに現れハエを破棄します。この習慣は早いemergentsため不注意選択を回避し、同期されたハエの最大数の収集が可能になります。
  2. 16から22時間後、日齢の大人がint飛ぶ転送O 10パーセントSY食品ボトル。必要に応じて、別のバッチは翌日に収集することができる。
  3. リターンがインキュベーターに戻し飛んでハエが2日間性的成熟とチームメイトに到達することを許可。成人期の最初の日として10%SYボトルへの移転の日を記録します。

6。ハエのソートと長寿実験のセットアップ

  1. 絵筆を使って2つのグループに分け、次に麻酔パッド上のハエの小グループ、ソート、男性と女性を麻酔。 CO 2を使用している場合は、それが長寿実験の整合性を損なう可能性が考えられる長続き健康上の問題を防止するための曝露を最小限にすることが重要です。
  2. 個々のバイアルに同じ性別の30ハエを置きます。人口と健康な子孫にはバランサー染色体はないと仮定すると、各ボトルには、各性別の3-4バイアル周り生成する必要があります。個々のバイアルにハエを小分けして、合計で、ハエが唯一の最大麻酔にさらされている、ように、3〜4分しかかからないはず9月10日分。
  3. 8月10日バイアルは各性別と実験的な治療のために複製されますが存在しなくなるまで繰り返し6.1から6.2を繰り返します。

7。長寿実験を追跡するためのExcelスプレッドシートの設定

  1. 我々は、インキュベーター内でバイアルの場所に関連付けられているバイアスを避けるため、実験者にバイアルアイデンティティをあいまいにするために、実験条件によってバイアルの位置ではなく、グルーピングバイアルをランダム化することをお勧めします。これを行うには、最初のID番号によってトレイのバイアルを手配した後、スプレッドシートプログラムで各バイアルに無作為化された数値IDを割り当てます。あなたはdLife実験管理ソフトウェアを使用している場合は、各バイアルのID番号を生成するために実験のセットアップについてのチュートリアルに従ってください。
  2. あなたはdLifeと関連してRFIDリーダ、バーコードリーダーを使用している場合(オプション)各バイアルにRFIDやバーコードタグを添付し、dLifeでバイアルの数値IDでタグを関連付ける。リーダーでスキャンすると、プログラムが各バイアルを認識しますと、スプレッドシート内の正しい場所にデータを記録するために1つを導く。 dLifeと連動タグリーダの使用が大幅にデータ収集時間は、記録エラーを低減します。

8。長寿実験を維持

生鮮食品を含むバイアルは、各転送室温でなければなりません。

  1. 実験期間中は、転送は、生鮮食品を含む新しいバイアルに2日ごとに(若い女性)、または週3回(> 3週齢の男性または女性)を飛ぶ。このステップでは、若い女性のための摂食環境が幼虫の存在によって破壊されないことが保証されます。この転送は、特に古いハエ(Pletcher、個人的な観察)で、急性死亡を誘発する可能性が麻酔なしで完了する必要があります。
  2. 各バイアル転送時に、年齢を録音古いバイアル中で死んだハエを数えて、新しいバイアルに運ばれ、死んだハエ。で別々に、この情報を記録スプレッドシート内の2つの列(dLifeまたは独自のスプレッドシートのいずれか)。これが運ばハエがダブルカウントされないことが保証されます。死亡者数(死者+運ばれます)は、前の転送から運ばハエの少なくとも同数べき。新たな死亡者数を決定するために、死亡者の総数から、以前に行ったハエの数を引きます。
  3. それが流出し、又は不慮の死を通して、自然死に先立って実験を放置しておくとハエが右側打ち切りとみなされます。このような方法で実験を終了する動物は、フライは、実験を終了した日に別の列に入力してください。検閲ハエ(下記参照)が死んだとして記録されません。
  4. 最後の生存者が死んでまで、手順8.1から8.2を繰り返し続けています。ハエの年齢として、いくつかのハエが自分の背中の上に横にと彼らの非活性のために死んだように見える場合があるので注意してください。よって運ば(デッド)ハエをカウントするとき、足の動きがあるかどうかを判断するためにバイアルの側面にタップします。もしそうなら、テサロニケeのハエはまだ生きている。ハエが古いバイアルが、生きている中で、食品に付着したままである場合、それらは死者としてカウントされるべきではなく、さらにフライを取り除くために、バイアルの盗聴によって救出されるべきである。それは実験的なバイアスの原因になることがあり打ち切りなどハエは慎重に使用する必要があります。

9。データ解析

  1. 生存曲線は、個人が与えられた時代に生き残る確率が表示され、通常はKaplan-Meier法によるアプローチ( 1)8 使用して計算されます。右打ち切りデータが存在しない場合には、式が年齢 x(S x)の時など、その時代特有の生存率は、年齢×(N xの)で、国勢調査時の開始時に生きている個体数を割ることによって決定されます簡単にすることができる実験でハエの総数(N 0)で、S X = N X / N 0。 9.2)の生存曲線は、データのプレゼンテーションの中で最も一般的な形式であり、それらlog-rank検定を用いて群間の等価性をテストすることができます。合理的な推論はコホートで50から100人ほど少ないから引き出すことができる。生存しかし、累積尺度であり、したがって、そのような生活の中でそれらは早くも老化に関連しない死亡は、老化に特有の影響を把握することが困難と寿命全体生存率が下がる。
  2. 第二のデータ可視化手法では、各年齢区間で死亡のリスクが表示され、生存データ9,10のより微妙な記述を提示年齢別死亡率の関数である。死亡対策は1歳から別の独立しており、治療が成人期の間に調整されている場合は特に死亡率曲線の形状は、高齢化のダイナミクスについて推論するのに便利です。年齢別死亡率の推定値は、しかし、小さなサンプルサイズで精度と正確さの両方を欠いている、としばしば信頼esに関するコホートごとの個人のいくつかの一対多数百人を必要とするtimate 11。
  3. 長寿の差を推定するための他の方法はパラメトリック( 例えばゴンペルツ)とセミパラメトリック( 例えば Cox回帰)モデルを含む。これらのモデルは、強力なことができますが、なぜなら死亡率曲線の形状と誤った推論11,12につながる可能性があり、治療効果の性質についての仮定から、慎重に適用すべきである。

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Representative Results

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プロトコルの簡略化スキームが重要なステップが概説されて、 図1に示されている。プロトコルの同期部分は、年齢をマッチさせた成虫の​​ハエを必要とする様々なアッセイのために使用することができます。

野生型ハエの典型的な生存曲線はdLife実験管理ソフトウェア( 図2b、c)を用いて、 図2aに示されています。成人男性は通常、両方の集団が25℃で10%SY食品に> 50日間の平均値と中央値長寿を達成すると、短く生きる生存者は、実験の前半​​に高いままで、その後急激に低下していることに注意してください。

ショウジョウバエの寿命は、温度や食生活などの環境条件に影響されます。 図3aは、温度が上昇すると成人男性は、典型的には著しく短く生きることを示しています。同様に、寿命にダイエットの効果は、 図3bに示されている

開発中のコホートの密度は、成人の寿命に影響を与え、発生のタイミングを変更することができます。ここでは、同期化された卵の異なる密度が幼虫の発育にどのような影響を与えるかの例を示します。 図4に示すように、成人のフライ収率が悪く、食品表面は卵の数が低すぎると乾燥の影響を受けやすくなります。スペクトルのもう一方の端では、幼虫の発育は過密ボトルに薄弱であり、成虫の収率が低下します。

図5に示すように、全体としてのコホートの生存曲線は、変則的なバイアルの効果に大きく影響することができます。個々のバイアル用不規則な生存率のデータは、このような貧弱な食品の品質や真菌/細菌の蓄積や感染症など、いくつかの原因があるかもしれません。一方、このような変則的な死亡者C人口の生存対策スキュー、適切なバイアルは実験から除外されるべきであることを決定するための簡単​​なメトリックはありません。これらの状況は、したがって、最高の良好なハンドリング慣行によって回避し、大きなサンプルサイズを使用することで軽減されます。

図6は、変則的な死亡につながることができるバイアル条件の例を示します。一般的には、ハエが動けなくなることがあり小さなクレバスにつながると死ぬことができる任意の条件は避けるべきである。例としては、バイアル壁から離れて縮小し、食品の割れにつながる食品中の食品、乾燥中の気泡は、それぞれ、 図5a(単一気泡を伴う軽度の例)、 図5b、図5cに示されてい。食べ物はnのハエに押しのけるたり折りたたんだりできるように、 図5b、図5cに示すように過度に乾燥した食品は、慎重に転送時に弾かなければならないEWバイアル。食品の表面上の細菌の増殖、感染や物理的捕捉につながることができ、したがって、死亡率を高める可能性があります。食品からの汗(図示せず)があるかのように細菌の他のタイプは白色のコロニー( 図5d)として現れるだろうが食品の表面上の一部の細菌は、透明性と光沢のある表示されます。これらの条件のいずれかを示すバイアルは留意し、データを解釈する際にさらに考慮すべきである。一般的に、我々はその幼虫と成虫期の両方の飼育には十分注意が成虫の寿命と健康をサポートし、それ以降の生活の中で死の曖昧な原因につながる問題の発生を低減することができる強調する。

図1
図1 ショウジョウバエの寿命測定法の簡略回路図。

図2(A)、1118ワットコントロール女性(丸)と男性(四角)は、成人の代表的寿命曲線はSY10%の食品に25℃で飛ぶ。 dLifeソフトウェアの(A、B、C)代表スクリーンショット。

図3
図3温度の影響(A)と(B)大人の寿命にダイエット。 A.アダルト制御(カントンS)男性ハエが18°Cで成人期を通じて維持され、25℃、または29℃CBアダルト制御( ワット1118)雌成虫を15%SY以上の5パーセントSYダイエットのどちらかにさらされた。

図4
図4開発の9日目(25℃)のCT食品ボトルに分注し同期された卵の。 V胚含有アリコートのolumeは、各ボトルの下に表示されます。

図5
図5バイアルによって生存を示すdLifeソフトウェアからの代表的なプロット。矢印は、グループ内の単一バイアル異常を示しています。

図6
図6次善の食品の品質の例。 A.は、食品の表面に泡。 B.食品は、バイアルの端から離れて縮小した。 C.は、食品内の亀裂。食品の表面上のDに細菌が蓄積。

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Discussion

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ここで紹介するプロトコルは、遺伝薬理学的、および環境的介入の評価のために適応可能であるショウジョウバエの成虫寿命の再現性のある測定値を生成するための方法を説明します。プロトコルの重要な側面は、慎重に、幼虫の開発環境を制御する大人のストレスを最小限にし、実験群とコントロールの間にバイアスを最小限に含まれています。またdLife寿命実験管理ソフトウェアの使用を提示します。単に各バイアルにバーコードやRFIDタグを取り付けることにより、dLifeプログラムは各測定のためのデータ取得を支援し、生存曲線をプロットになります。それが現在のバイアルを使用してフライ寿命の研究に最も適しているが、この実験の管理ツールは簡単に​​人口室の異なるタイプを持つ、またはストレス耐性と薬物毒性を含む生存の追加的な措置のため、他の生物での使用に適合させることができた。

P任意の長寿アセスメント開始にrior、片方が最初に慎重に親の株の産生を制御する必要があります。親株の健康があるので遺伝的変異は、重要なファクターです。これらの要因は、推定寿命レギュレータ13を報告した初期の研究に関連付けられている、かなりの公共論争につながっている。研究者は、遺伝的背景の変動に起因する影響を最小限にするためにいくつかのオプションがあります。遺伝子操作では、すべて遺伝的に改変された株は、対照株(少なくとも6回)のいずれかに戻し交配を介してバックグラウンド制御又は誘導システム( 例えば 、温度感受性対立遺伝子または薬物誘導性導入遺伝子の発現)を使用する必要があります。 GeneSwitchおよびTetオンシステム14,15は人気があり、導入遺伝子がどちら誘導または誘導されないされているのと同じ遺伝的背景を持つハエを直接比較することができます。すべての誘導システムでは、適切な同時コントロールがconfouを避けるために必要ですNDSは、インデューサーに関連付けられている。意図された操作を13〜無関係な理由のための2つの異なる系統間の交配のF1世代の寿命を延ばすことができ雑種強勢の結果は、ほぼ常に遺伝的背景のための制御に失敗しました。 GAL4-UASシステムを使用する場合は、この要因が特に懸念される。環境的介入( 例えば 、薬物治療、食事療法、温度等)の場合は、複数の菌株に対する介入の効果を研究することをお勧めします。最後に、親の年齢1617の両方のストレスは、F1世代の寿命に影響を与えることができ、このため、健康な若年成人は、産卵のために選択されるべきである。

蛹/幼虫の環境を制御するための重要な側面が過密状態の予防と明暗周期、湿度、温度の厳しい規制と管理された環境の整備が含まれています。これらの要因は、devのタイミングの両方に影響しますelopmentその結果大人の物理的な品質。このような高い幼虫密度などの有害な幼虫の環境では、成虫寿命18に影響及ぼすことが知られているストレス誘導因子の活性化( 例えば 、熱ショックタンパク質の発現)につながる可能性があります。

大人のフェーズでは、環境に細心の注意を払うことが不可欠である。一人で食事の選択は非常に寿命に影響を与えることができると長寿にダイエット特異的効果を生成する遺伝的要因と相互作用することができる。さらに、いくつかの共通の食糧基地の代替(代わりに凍結乾燥された全体のビール酵母の酵母エキス)が劇的に食品自体が寿命の評価を損なう恐れがある生物のストレスを引き起こしている可能性を開いたまま、寿命が19を短くすることできます。この記事では、我々はpすることができ、食品中の物理的な異常( 例えば 、泡、泡、亀裂、細菌など)を含む栄養環境でストレス源となる可能性を強調しているhysically動物を閉じ込める。生鮮食品と古い食品(少なくとも3回、毎週)の定期交換では、これらの困難の多くを克服することができます。さらに、温度20、湿度(個人的な観察 ​​)、照明21、および同種の存在(社会環境)22は、すべての寿命を調節することができるし、実験中にこれらの要因を制御することに注目が結果にバイアスを避けるために重要です。バイアル内のハエの数は時間とともに減少しているが、我々は、ハエの数を調整するための麻酔の使用は年齢依存的に死亡(Pletcher、個人的な観察)を増やすことができ、我々は、この手順を推奨しないことを発見した。インキュベーター内でバイアルの正確な位置も一見制御された環境で、も要因です。コントロールと実験群のランダム化された物流は、バイアルの配置に関連付けられており、適切な統計的推論のために必要とされるバイアスを軽減することができます。偶数と注意深く制御条件は、わずかな違いは、実験の間に観察し、内·実験コントロールの使用が不可欠であることができます。

代替餌のアプローチは23キャピラリーフィーダーアプローチ(CAFE方式)を含む寿命解析のために提案されている。この方法では、摂餌量の正確な測定を提供する能力に優れていますが、それは著しく短命ハエ24に生じる。全体的な長寿の食事と遺伝的要因間の結合関係を評価する際には、給電環境に関連する潜在的な応力を考慮する必要があります。

生存率と死亡率曲線の計算を含む人口統計学的解析は、高齢者人口の動態に関する多くの情報を明らかにすることができます。典型的な生存曲線は、人生の早い段階で長期にわたって比較的平坦なままであり、低死亡率fの期間に相当する高年齢での減少のその率を増加します死亡率の急激な増加の期間によってollowed。ストレスの多い環境では、人口と生存曲線の異常なディップで早期死亡の過剰としてマニフェスト通常でしょう。そのような結果は、治療間で有意差を示すことがありますが、それは通常は複製に強健ではありません。そこで我々は、任意の確固たる結論が描画される前に、少なくとも二つの独立した( すなわち 、非同時)反復実験を実行することをお勧めします。それは、サンプルサイズを増やす飼育条件を制御し、親の株式の健康改善に向けたさらなる努力が必要とされるかもしれません。

ストレスの多い環境条件から死ぬ動物の右打ち切りは(エスケープまたは偶発的な原因から死んでいると推定されていることを実験から動物を除去する)、細心の注意を払って適用されるべきである。厳密に言えば、検閲は、実験的な治療法全体にランダムに発生し、必要がある場合は実験interventi変調ストレス感受性に、人はうっかり人口に治療レベルの選択を適用することができます。一般的なルールとして、(主に食料源に関連付けられている)あいまいな早い死をもたらす可能性のある要因が存在することを回避することは打ち切りよりも優れており、打ち切りは、物理処理中に死亡または脱出することが観察された生物に適用されるべきである。

最後の考慮事項は、統計的有意性の評価である。大規模コホートサンプルサイズが治療間の小さな違いを区別するために、印象的なパワーを提供していますが、このような違いの潜在的な生物学的意義も考慮しなければなりません。適度なサイズの長寿実験で、1〜2%と低いの違いはしばしば非常に統計的に有意であるが、健康状態に関する介入の全体的な影響は、軽微であります。実験の全体​​的な結果を解釈する際にそのため、両方の統計的および生物学的意義を考慮しなければならない。 Infe生存実験からの老化プロセスに関するrenceは能力25と胃腸壁の整合7クライミング含む行動や生理的な健康対策、加齢に伴う低下の対策により増強することができます。

要約すると、 ショウジョウバエのモデル生物の老化のメカニズムを研究するための魅力的な選択肢です。慎重な実験手法により、堅牢な人口統計学的分析は、老化の過程で薬理学的および遺伝的要因の影響への洞察を提供することができます。

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Disclosures

特別な利害関係は宣言されません。

Acknowledgments

この作品は、エリソン医学財団(SDP、からの資金によって支えられhttp://www.ellisonfoundation.org/index.jsp )、NIH K01AG031917(NJL、 http://www.nih.gov/ )、NIH 5T32GM007315-35 (JR)とNIH R01AG030593(SDP)。この作品は、P30-AG-013283(老化の国立研究所によって資金を供給され、老化の生物学における卓越性のネイサンショックセンターのショウジョウバエ老化コア(DAC)のリソースを活用しhttp://www.nih.gov/を )。著者は、原稿の批判的な読みのために特に有用な議論とブライアンチョンのためPletcher研究所に感謝したいと思います。我々は、データ収集の支援についてはニックAsherとキャスリンBorowiczを承認したいと思います。

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Active Dry Yeast Fleishmann’s Yeast 2192
Grape Agar Powder Premix Genesee Scientific 47-102
Large Embryo Collection Cages Genesee Scientific 59-101
Large Replacement End Caps Genesee Scientific 59-103
6 oz Square Bottom Bottles, polypropylene Genesee Scientific 32-130
Flugs Closures for Stock Bottles Genesee Scientific 49-100
Drosophila Vials, Wide, Polystrene Genesee Scientific 32-117
Flugs Closures for Wide Vials Genesee Scientific 49-101
Wide Orifice Aardvark Pipet Tips, 200 ul Denville Scientific P1105-CP
Flystuff Flypad, Standard Size Genesee Scientific 59-114
BD Falcon 15 ml Conical Centrifuge Tubes Fisher Scientific 14-959-70C
Fisherbrand Petri Dishes with Clear Lids, Raised Ridge; 100 O.D. x 15 mm H; Fisher Scientific 08-757-12
Kimax* Colorware Flasks 1,000 ml yellow Fisher Scientific 10-200-47
PBS pH 7.4 10x Invitrogen 70011044
Gelidium Agar Mooragar n/a
Brewer's Yeast MP Biomedicals 0290331280
Granulated Sugar Kroger n/a
Tegosept Genesee Scientific 20-266 Fly Food Preservative
Propionic Acid, 99% Acros Organics 149300025 Fly Food Preservative
Kanamycin Sulfate ISC BioExpress 0408-10G
Tetracycline HCl VWR 80058-724

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Toivonen, J. M., et al. No influence of Indy on lifespan in Drosophila after correction for genetic and cytoplasmic background effects. PLoS Genet. 3, e95 (2007).
  2. Spencer, C. C., Howell, C. E., Wright, A. R., Promislow, D. E. Testing an 'aging gene' in long-lived drosophila strains: increased longevity depends on sex and genetic background. Aging Cell. 2, 123-130 (2003).
  3. Burnett, C., et al. Absence of effects of Sir2 overexpression on lifespan in C. elegans and Drosophila. Nature. 477, 482-485 (2011).
  4. Bokov, A. F., et al. Does reduced IGF-1R signaling in Igf1r+/- mice alter aging? PLoS One. 6, e26891 (2011).
  5. Lewis, E. B. A new standard food medium. Drosophila Information Service. 34, 117-118 (1960).
  6. Skorupa, D. A., Dervisefendic, A., Zwiener, J., Pletcher, S. D. Dietary composition specifies consumption, obesity, and lifespan in Drosophila melanogaster. Aging Cell. 7, 478-490 (2008).
  7. Rera, M., et al. Modulation of longevity and tissue homeostasis by the Drosophila PGC-1 homolog. Cell Metab. 14, 623-634 (2011).
  8. Kaplan, E. L., Meier, P. Nonparametric Estimation from Incomplete Observations. Journal of the American Statistical Association. 53, 457-481 (1958).
  9. Pletcher, S. D. Mitigating the Tithonus Error: Genetic Analysis of Mortality Phenotypes. Sci. Aging Knowl. Environ. 2002, pe14 (2002).
  10. Pletcher, S. D., Khazaeli, A. A., Curtsinger, J. W. Why do life spans differ? Partitioning mean longevity differences in terms of age-specific mortality parameters. J. Gerontol. A Biol. Sci. Med. Sci. 55, 381-389 (2000).
  11. Promislow,, Tatar,, Pletcher,, Carey, Below-threshold mortality: implications for studies in evolution, ecology and demography. Journal of Evolutionary Biology. 12, 314-328 (1999).
  12. Pletcher, Model fitting and hypothesis testing for age-specific mortality data. Journal of Evolutionary Biology. 12, 430-439 (1999).
  13. Partridge, L., Gems, D. Benchmarks for ageing studies. Nature. 450, 165-167 (2007).
  14. Roman, G., Endo, K., Zong, L., Davis, R. L. P[Switch], a system for spatial and temporal control of gene expression in Drosophila melanogaster. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 98, 12602-12607 (2001).
  15. Ford, D., et al. Alteration of Drosophila life span using conditional, tissue-specific expression of transgenes triggered by doxycyline or RU486/Mifepristone. Exp. Gerontol. 42, 483-497 (2007).
  16. Priest, N. K., Mackowiak, B., Promislow, D. E. The role of parental age effects on the evolution of aging. Evolution. 56, 927-935 (2002).
  17. Smith, E. M., et al. Feeding Drosophila a biotin-deficient diet for multiple generations increases stress resistance and lifespan and alters gene expression and histone biotinylation patterns. J. Nutr. 137, 2006-2012 (2007).
  18. Sorensen, J. G., Loeschcke, V. Larval crowding in Drosophila melanogaster induces Hsp70 expression, and leads to increased adult longevity and adult thermal stress resistance. J. Insect Physiol. 47, 1301-1307 (2001).
  19. Bass, T. M., et al. Optimization of dietary restriction protocols in Drosophila. J. Gerontol. A Biol. Sci. Med. Sci. 62, 1071-1081 (2007).
  20. Miquel, J., Lundgren, P. R., Bensch, K. G., Atlan, H. Effects of temperature on the life span, vitality and fine structure of Drosophila melanogaster. Mechanisms of Ageing and Development. 5, 347-370 (1976).
  21. Pittendrigh, C. S., Minis, D. H. Circadian systems: longevity as a function of circadian resonance in Drosophila melanogaster. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 69, 1537-1539 (1972).
  22. Joshi, A., Mueller, L. D. Adult crowding effects on longevity in Drosophila melanogaster: Increase in age-dependent mortality. Current Science. 72, 255-260 (1997).
  23. Ja, W. W., et al. Prandiology of Drosophila and the CAFE assay. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104, 8253-8256 (2007).
  24. Lee, K. P., et al. Lifespan and reproduction in Drosophila: New insights from nutritional geometry. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105, 2498-2503 (2008).
  25. Gargano, J. W., Martin, I., Bhandari, P., Grotewiel, M. S. Rapid iterative negative geotaxis (RING): a new method for assessing age-related locomotor decline in Drosophila. Experimental gerontology. 40, 386-395 (2005).
における寿命の測定<em&gt;キイロショウジョウバエ</em
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Linford, N. J., Bilgir, C., Ro, J., Pletcher, S. D. Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (71), e50068, doi:10.3791/50068 (2013).More

Linford, N. J., Bilgir, C., Ro, J., Pletcher, S. D. Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (71), e50068, doi:10.3791/50068 (2013).

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