Дрозофилы является мощным организмом модель для изучения молекулярных основ долголетия регулирования. Этот протокол будет обсудить этапы создания воспроизводимых населения на основе измерения продолжительности жизни, а также потенциальные подводные камни и как их избежать.
Старение представляет собой явление, которое приводит к ухудшению устойчивые физиологические почти во всех организмах, в котором она была рассмотрена, приводит к снижению физической работоспособности и повышение риска заболевания. Индивидуальные старения проявляются на популяционном уровне как увеличение возрастной смертности, которая часто измеряется в лаборатории наблюдений продолжительность жизни в большой когорты соответствующего возраста лиц. Эксперименты, направленные на количественную оценку степени, в которой генетических или экологических манипуляций влияние продолжительности жизни в простых модельных организмов был весьма успешным для понимания аспектов старения, которые сохраняются на таксонов и вдохновляющие новые стратегии для продления срока службы и предотвращения связанных с возрастом заболевания у млекопитающих .
Уксус мухи, дрозофилы, является привлекательным организма моделью для изучения механизмов старения благодаря своей относительно короткой продолжительности жизни, удобные животноводство, генетика и поверхностным.Тем не менее, меры демографической старения, в том числе возраст-специфическая выживаемость и смертность, чрезвычайно восприимчивы к даже незначительные изменения в опытно-конструкторских и окружающей среды, а также поддержание строгой лабораторной практике для продолжительности старения эксперименты не требуется. Эти соображения, а также необходимость заниматься тщательным контролем генетического фона, необходимые для создания надежных измерений. Действительно, есть много известных споров вокруг вывода из долголетие экспериментов дрожжей, червей, мух и мышей, которые были прослежены окружающей среды или генетическими артефакты 1-4. В этом протоколе, мы описываем набор процедур, которые были оптимизированы на протяжении многих лет измерения продолжительности жизни дрозофилы с использованием лабораторных флаконах. Мы также описываем использование программного обеспечения dLife, которая была разработана нашей лаборатории и доступен для загрузки ( http://sitemaker.umich.edu/pletcherlab / программное обеспечение). dLife ускоряет пропускную способность и способствует хорошей практики путем включения в оптимальном опытно-конструкторских, что упрощает обработку лету и сбора данных, стандартизация и анализ данных. Мы также обсудим много потенциальных ловушек в области проектирования, сбора и интерпретации данных, продолжительность жизни, и мы предпримем шаги, чтобы избежать этих опасностей.
Протокол, представленные здесь описывается способ получения воспроизводимых результатов измерений взрослого долголетия у дрозофилы, которая приспособлена для оценки генетических, фармакологических и экологических мероприятий. Crucial аспектов протокола включает тщательно контр…
The authors have nothing to disclose.
Эта работа была поддержана финансирование от Эллисон Медицинский фонд (SDP, http://www.ellisonfoundation.org/index.jsp ), NIH K01AG031917 (НИЛ, http://www.nih.gov/ ), NIH 5T32GM007315-35 (JR) и NIH R01AG030593 (SDP). Эта работа использовала ресурсы Drosophila старения Core (DAC) Центра Натан Шок выдающиеся достижения в области биологии старения финансируется Национальным институтом старения P30-AG-013283 ( http://www.nih.gov/ ). Авторы хотели бы поблагодарить Pletcher лаборатории за полезные обсуждения и особенно Брайан Чунг за критическое прочтение рукописи. Мы хотели бы поблагодарить Ника Ашер и Кэтрин Borowicz за помощь в сборе данных.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
Active Dry Yeast | Fleishmann’s Yeast | 2192 | |
Grape Agar Powder Premix | Genesee Scientific | 47-102 | |
Large Embryo Collection Cages | Genesee Scientific | 59-101 | |
Large Replacement End Caps | Genesee Scientific | 59-103 | |
6 oz Square Bottom Bottles, polypropylene | Genesee Scientific | 32-130 | |
Flugs Closures for Stock Bottles | Genesee Scientific | 49-100 | |
Drosophila Vials, Wide, Polystrene | Genesee Scientific | 32-117 | |
Flugs Closures for Wide Vials | Genesee Scientific | 49-101 | |
Wide Orifice Aardvark Pipet Tips, 200 ul | Denville Scientific | P1105-CP | |
Flystuff Flypad, Standard Size | Genesee Scientific | 59-114 | |
BD Falcon 15 ml Conical Centrifuge Tubes | Fisher Scientific | 14-959-70C | |
Fisherbrand Petri Dishes with Clear Lids, Raised Ridge; 100 O.D. x 15 mm H; | Fisher Scientific | 08-757-12 | |
Kimax* Colorware Flasks 1,000 ml yellow | Fisher Scientific | 10-200-47 | |
PBS pH 7.4 10x | Invitrogen | 70011044 | |
Gelidium Agar | Mooragar | n/a | |
Brewer’s Yeast | MP Biomedicals | 0290331280 | |
Granulated Sugar | Kroger | n/a | |
Tegosept | Genesee Scientific | 20-266 | Fly Food Preservative |
Propionic Acid, 99% | Acros Organics | 149300025 | Fly Food Preservative |
Kanamycin Sulfate | ISC BioExpress | 0408-10G | |
Tetracycline HCl | VWR | 80058-724 |