Hücre büyüme oranı düzenlenmiş bir süreç ve hücre fizyolojisi temel belirleyicisidir. Chemostats kullanılarak sürekli kültürü, hücre büyümesini ve ne kadar bu ağlar hücre büyümesini optimize etmek için moleküler evrim kontrol ağların çalışma kolaylaştırmak besin kısıtlaması hücre büyüme hızının dışsal kontrol edilmesini sağlar.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Mikrobiyal Systems Biyoloji Chemostats Kullanımı
Bu makalede
Özet
Özet
Hücreler, dış dünyaya gelen sinyallerine yanıt olarak büyüme hızını düzenler. Hücre büyüdükçe, çeşitli hücresel işlemleri makromolekül sentezi, metabolizma ve hücre bölünmesi döngüsü sonunda, bağlılık içeren koordine edilmelidir. Kemostat, deneysel olarak hücre büyüme hızının kontrol edilmesi için bir yöntem olup, sistematik olarak okuyan bir araç sağlar ne kadar güçlü bir büyüme etkileri hücresel süreçleri - ve hücre büyüme hızını kontrol eden düzenleyici ağlar - gen ifadesi ve metabolizma da dahil olmak üzere. Kuşak chemostats yüzlerce muhafaza zaman, hücre büyümesini sınırlamaya çevre koşullarında mikropların uyarlanabilir evrimini incelemek için kullanılabilir. Biz, kemostat kültürlerin ilkesi tanımlamak çalışmalarını gösteren ve çeşitli uygulama örnekleri sağlar. Yirminci yüzyılın ortasında kendi girişten sonra kullanmama dönemi takiben, ile genom ölçekli metodolojileri yakınsama bir yenilenditerest hücre büyümesi ve adaptif evrim moleküler temelinin düzenlenmesinde biyolojik araştırma chemostats kullanımında bir rönesans uyarıcı olduğunu.
Giriş
Hücrelerin büyümesi, genetik ve çevresel faktörler 1,2 etkileşen kompleks ağlarda düzenlenir. Hücre büyümesi çok faktörlü yönetmelik çalışmada bir sistem düzeyinde yaklaşımı gerektirmektedir. Bununla birlikte, düzenlenmiş hücre büyümesinin sıkı çalışma deneysel olarak hücrelerin büyüme hızını kontrol zorluğu tarafından meydan. Ayrıca, hatta en basit deneylerde hücre-dışı koşullar, çoğaldıkları olarak hücreler sürekli olarak çevreyi değiştirmek sık olarak, dinamik ve karmaşıktır. , Tanımlanmış değişmez ve kontrollü ortamlarda hücre büyüme oranlarının deneysel kontrol edilmesini sağlar hücrelerin kültürlenmesi için bir yöntem: bu sorunlara bir çözüm, kemosta....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Bir kemostat kullanarak sürekli kültür ilkesi uygulamaları çeşitli elde edilebilir. Bütün chemostats olarak tüm bileşenlerin steriliteyi korumaya 1) yöntemleri olması esastır, 2), iyi karıştırılmış, kültür, kültür kabı 3), uygun havalandırma ve ortam toplama ve kültür kaldırma 4) güvenilir bir araç. Burada, hali hazırda alternatif kurulumları için adapte edilebilir yöntemler kullanılarak, kemostat bir Sixfors biyoreaktör (Infors Inc) kullanımını tarif eder.
1.. Kemostat Gemiler Montaj
- Ana düğmeyi kullanarak Sixfors açın.
- Iyice kemostat gemi, karıştırıcı montaj, ve deiyonize (DI) su ile ekli boru durulayın. Tüm boru ve....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Chemostats önemli bir avantajı seyreltme oranının değiştirilmesiyle deneysel olarak hücrelerin büyüme hızını kontrol etme yeteneğidir. Tomurcuklanma Mayalarda Saccharomyces cerevisiae, bir hücre morfolojisi, hücre bölünme döngüsündeki kendi fazın bilgilendirici. Daha yüksek büyüme oranları ile Nüfus unbudded hücrelerin fraksiyonu (Şekil 5A) ölçülerek belirlenir aktif olarak bölünen hücreler daha yüksek bir oranda içerir. Kemostat kültürlerde küresel mRNA ifadesinin analizi, çok sayıda genin ekspresyon d.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Chemostats büyüme kontrollü kararlı hal koşulları mikropların ekimi etkinleştirin. Hücreler, değişmeyen bir dış çevre ile sonuçlanan sabit bir oranda sürekli olarak büyür. Bu durum, dış çevre, sürekli değişen ve hücre büyüme oranı çevre ve genotip karmaşık etkileşimi ile belirlenen küme kültür yöntemlerin aksine bulunmaktadır. Bu nedenle, toplu kültürler üzerinde chemostats içinde mikropları kültür önemli bir avantajı, deneysel olarak hücrelerin büyüme hızını kontrol etme yeteneğidir.
Bir hü.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar, hiçbir rakip mali çıkarlarını olmadığını beyan ederim.
Teşekkürler
Bu çalışma fonlar New York University oluşturmak başlatmak tarafından desteklenmiştir. Biz başlangıçta chemostats olarak Sixfors biyoreaktörlerin kullanımını geliştirdi Maitreya Dunham ve Matt Brauer teşekkür ederim.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Infors-HT Sixfors Chemostat | Uygun Teknik Kaynaklar A.Ş. | ||
| Cam Şişe 9.5 L | Fisher Scientific | 02-887-1 | Medya Kabı ve Hortum için |
| Pinchcock | Fisher Scientific | 05-867 | Medya Kabı ve |
| Hortum Tıpası, Boyut 12, Yeşil Neopren | Cole-Palmer | EW-62991-42 | Medya Kabı ve Hortum için |
| Düz Konnektör | Cole-Palmer | EW-30703-02 | Medya Kabı ve Hortum |
| Genel için Amaç Bağları 4 Fisher Scientific NC9557052'da | Medya Kabı ve | ||
| Hortum Boruları için, Silikon Kauçuk Medya Kabı | ve Hortum Boruları için | B000FMWTDE Küçük Parçalar | |
| , Silikon, 3/8 OD | Fisher Scientific | 02-587-1Q | Medya Kabı ve Hortum Boruları için |
| , Silikon, 7/32 OD | Fisher Scientific | 02-587-1E | Medya Kabı ve Hortum için |
| Boru, Paslanmaz Çelik, 3/16 inç OD | McMaster-Carr | 6100K164 | Medya Kabı ve Hortum Boruları için |
| , Paslanmaz Çelik, 3/8 inç | OD McMaster-Carr | 6100K161 | Medya Kabı ve Hortum |
| Kancası Konnektörleri | Kabı ve Hortum | Fisher Scientific | 14-66-18Q |
| Cırcır Kelepçesi | Cole-Palmer | EW-06403-11 | Medya Kabı ve Hortum |
| Luer için, Medya Kabı | ve Hortum | Cole-Palmer | EW-45512-34 |
| , Medya | Kabı ve Hortum | Cole-Palmer | EW-45513-04 |
| Millipore Aervent MTGR05010 62 mm Filtre, 0.2 & mu; m | Fisher Scientific | MTGR05010 | Medya Kabı ve Hortum |
| için PTFE Acrodisc CR 13 mm filtreler, 0.2 & mu; m | Gemisi ve Hortum için | Fisher Scientific | NC9131037 |
| Hava için Doğrudan Okuma Akış Tüpü | Cole-Palmer | EW-32047-77 | Azot Gazı Kurulumu için |
| Cole-Palmer | için Doğrudan Okuma Akış Tüpü | EW-32048-63 | Azot Gazı Kurulumu için |
| Gaz Oranlayıcı Çok Tüplü Çerçeveler | Azot Gazı Kurulumu | ||
| için Cole-Palmer EW-03218-50Regülatör, | Azot Gazı | Hava Gazı | Y12-N145D580 |
| Azot Gazı | Paslanmaz Çelik | Airgas | Y99-26450 |
| Azot Gazı Kurulumu için | Erkek Adaptör | Airgas | WES544 |
| Azot Gazı Kurulumu için | Norpren Boru | ABD Plastikleri | 57280 |
| Tripod Tabanı | Cole-Palmer | EW-03218-58 | Azot Gazı Kurulum |
| Vanası Kartuşları | için Cole-Palmer | EW-03217-92 | Azot Gazı Kurulumu için |
| Damacana 10 L | Fisher Scientific | 02-963-2A | Medya Hazırlama için |
| Steritop Steril Vakumlu Şişe Üstü Filtreler, 1.000 ml, PES membran; 45 mm boyun ölçüsü için | Fisher Scientific | SCGP-T10-RE | Medya Hazırlama |
| Şişesi için 100 ml, 45 mm boyun ölçüsü | Fisher Scientific | FB-800-100 | Medya Hazırlama için |
| kalsiyum klorür ve orta nokta; 2H2O | Fisher Scientific | C79-500 | Medya Reaktifleri |
| sodyum klorür | Fisher Scientific | BP358-1 | Medya Reaktifleri |
| magnezyum sülfat ve orta nokta; 7H2O | Sigma Aldrich | 230391 | Medya Reaktifleri |
| potasyum fosfat monobazik | Fisher Scientific | AC424205000 | Medya Reaktifleri |
| amonyum sülfat | Fisher Scientific | AC423400010 | Medya Reaktifleri |
| potasyum klorür | Sigma Aldrich | P9541 | Medya Reaktifleri |
| borik asit | Sigma Aldrich | B6768 | Medya Reaktifleri |
| bakır sülfat ve orta nokta; 5H2O | Sigma Aldrich | 209198 | Medya Reaktifleri |
| potasyum iyodür | Sigma Aldrich | 60400 | Medya Reaktifleri |
| ferrik klorür ve orta nokta; 6H2O | Fisher Scientific | I88-100 | Medya Reaktifleri |
| manganez sülfat ve middot; H2O | Sigma Aldrich | 230391 | Medya Reaktifleri |
| sodyum molibdat ve orta nokta; 2H2O | Sigma Aldrich | M7634 | Medya Reaktifleri |
| çinko sülfat ve orta nokta; 7H2O | Fisher Scientific | Z68-500 | Medya Reaktifleri |
| biotin | Fisher Scientific | BP232-1 | Medya Reaktifleri |
| kalsiyum pantotenat | Fisher Scientific | AC24330-1000 | Medya Reaktifleri |
| folik asit | Sigma Aldrich | F7876 | Medya Reaktifleri |
| inositol (diğer adıyla miyo-inositol) | Fisher Scientific | AC12226-1000 | Medya Reaktifleri |
| niasin (diğer adıyla nikotinik asit) | Sigma Aldrich | N4126 | Medya Reaktifleri |
| p-aminobenzoik asit | Fisher Scientific | AC14621-2500 | Medya Reaktifleri |
| piridoksin HCl | Sigma Aldrich | P9755 | Medya Reaktifleri |
| riboflavin | Sigma Aldrich | R4500-25G | Medya Reaktifleri |
| tiamin HCl | Fisher Scientific | BP892-100 | Medya Reaktifleri |
| Lösin | Sigma Aldrich | L8000-100G | Medya Reaktifleri |
| Urasil | Sigma Aldrich | U0750 | Medya Reaktifleri |
| Dekstroz | Fisher Scientific | DF0155-08-5 | Medya Reaktifleri |
Kaynaklar
- Ingraham, J. L., Maaloe, O., Neidhardt, F. C. Growth of the Bacterial Cell. , Sinauer Associates, Inc. (1983).
- Cell Growth: Control of Cell Size. Hall, M. N., Raff, M. C., Thomas, G. , CSHL Press. (2004).
- Monod, J. La technique de culture continue, theorie et applications. Ann. Inst. Pasteur. 79, 390-410 (1950). <....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
